第三章病毒和亞病毒因子.

1、上次教學(xué)回顧上次教學(xué)回顧 第二章真核微生物第二章真核微生物 第三節(jié)第三節(jié) 霉菌霉菌 霉菌細(xì)胞形態(tài)和構(gòu)造：霉菌細(xì)胞形態(tài)和構(gòu)造：菌絲體菌絲體及其各種分化形式及其各種分化形式 霉菌的繁殖霉菌的繁殖 無性孢子：無性孢子：孢囊孢子孢囊孢子、分生孢子、節(jié)孢子、厚垣孢子、分生孢子、節(jié)孢子、厚垣孢子 有性孢子：有性孢子：卵孢卵孢 子、結(jié)合孢子、子、結(jié)合孢子、子囊孢子子囊孢子、擔(dān)孢子、擔(dān)孢子 霉菌的菌落霉菌的菌落 比較四大類微生物的細(xì)胞形態(tài)和菌落特征比較四大類微生物的細(xì)胞形態(tài)和菌落特征 討論：討論：比較四大類微生物細(xì)胞壁成分的異同及其原生質(zhì)體制比較四大類微生物細(xì)胞壁成分的異同及其原生質(zhì)體制備方法備方法 第四節(jié)第

2、四節(jié) 蕈菌蕈菌 菌絲分化過程：二級(jí)菌絲的菌絲分化過程：二級(jí)菌絲的鎖狀聯(lián)合鎖狀聯(lián)合第三章第三章 病毒和亞病毒病毒和亞病毒 一、教學(xué)目的與要求一、教學(xué)目的與要求 學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)病毒的形態(tài)和大小，病毒的形態(tài)和大小，掌握掌握病毒的化學(xué)組成、病毒的化學(xué)組成、形態(tài)結(jié)構(gòu)、增殖方式和生活周期，形態(tài)結(jié)構(gòu)、增殖方式和生活周期，了解了解亞病毒亞病毒的特點(diǎn)，的特點(diǎn)，了解了解病毒在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用。病毒在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用。 二、二、 教學(xué)內(nèi)容：教學(xué)內(nèi)容： 1 1、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分與增殖方式病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分與增殖方式() 2 2、亞病毒的組成與特點(diǎn)亞病毒的組成與特點(diǎn) 、病毒與實(shí)踐、病毒與實(shí)踐()第一節(jié)病毒第一節(jié)

3、病毒 病毒的概念：病毒的概念： 病毒是一類由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的病毒是一類由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的超顯微超顯微“非細(xì)胞生物非細(xì)胞生物”。其本質(zhì)是一種只含有。其本質(zhì)是一種只含有DNA或或RNA的的遺傳因子遺傳因子，它們能以，它們能以感染態(tài)感染態(tài)和和非感染非感染態(tài)兩態(tài)兩種狀態(tài)存在。種狀態(tài)存在。 在宿主體內(nèi)呈在宿主體內(nèi)呈感染態(tài)感染態(tài)，只能在活的、敏感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方，只能在活的、敏感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖式增殖(活細(xì)胞內(nèi)專性寄生活細(xì)胞內(nèi)專性寄生) ；在離體條件下，能以無生命；在離體條件下，能以無生命的生物大分子顆粒狀態(tài)長(zhǎng)期存在，并可保持其侵染活性，的生物大分子顆粒狀態(tài)長(zhǎng)期存在，并可

4、保持其侵染活性，即即非感染態(tài)。非感染態(tài)。 可以作為可以作為致病因子致病因子，也可以當(dāng)作，也可以當(dāng)作遺傳成分遺傳成分。第一節(jié)病毒第一節(jié)病毒 病毒的特點(diǎn)病毒的特點(diǎn) 1、形體極微小形體極微小，都通過細(xì)菌濾器，只能在電鏡下觀察；，都通過細(xì)菌濾器，只能在電鏡下觀察； 2、無細(xì)胞構(gòu)造無細(xì)胞構(gòu)造，其主要成分僅為核酸和蛋白質(zhì)兩種。故又稱，其主要成分僅為核酸和蛋白質(zhì)兩種。故又稱“分子生物分子生物”； 3、每一種病毒、每一種病毒只含一種核酸只含一種核酸，不是，不是DNA就是就是RNA； 4、既無既無產(chǎn)能酶系，產(chǎn)能酶系，又無又無蛋白質(zhì)和核酸合成酶系，只能利用宿蛋白質(zhì)和核酸合成酶系，只能利用宿主活細(xì)胞內(nèi)現(xiàn)成代謝系統(tǒng)合

5、成自身的核酸和蛋白質(zhì)組分；主活細(xì)胞內(nèi)現(xiàn)成代謝系統(tǒng)合成自身的核酸和蛋白質(zhì)組分； 5、以核酸和蛋白質(zhì)等、以核酸和蛋白質(zhì)等“元件元件 ”的的裝配裝配實(shí)現(xiàn)大量繁殖；實(shí)現(xiàn)大量繁殖； 6、在離體條件下，能以無生命的生物大分子狀態(tài)存在，并可、在離體條件下，能以無生命的生物大分子狀態(tài)存在，并可長(zhǎng)期保持侵染活力長(zhǎng)期保持侵染活力； 7、對(duì)一般抗生素、對(duì)一般抗生素不敏感不敏感，但，但對(duì)干擾素敏感；對(duì)干擾素敏感； 8、有些病毒的核酸還能整合到宿主的基因組中，并誘發(fā)、有些病毒的核酸還能整合到宿主的基因組中，并誘發(fā)潛伏潛伏性感染性感染。第一節(jié)第一節(jié) 病毒病毒 病毒的主要類群病毒的主要類群真病毒：真病毒：亞病毒：亞病毒：至

6、少含有至少含有核酸核酸和和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)兩種兩種組分組分類病毒：類病毒：衛(wèi)星因子：衛(wèi)星因子：朊病毒：朊病毒：只含只含不具獨(dú)立侵染性不具獨(dú)立侵染性的的核酸核酸組分組分只含只含具獨(dú)立侵染性具獨(dú)立侵染性的的核酸核酸組分組分只含只含單一單一蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)組分組分病毒病毒第一節(jié)病毒第一節(jié)病毒 病毒與人類的關(guān)系病毒與人類的關(guān)系 病毒病毒種類種類多樣性：凡在多樣性：凡在有細(xì)胞的生物有細(xì)胞的生物生存之處都生存之處都有與其相對(duì)應(yīng)的病毒存在。有與其相對(duì)應(yīng)的病毒存在。 與人類關(guān)系與人類關(guān)系密切密切 至今和許多有益動(dòng)物疑難疾病和威脅性最大的至今和許多有益動(dòng)物疑難疾病和威脅性最大的傳染病傳染病幾幾乎都是病毒病乎都是病毒病

7、發(fā)酵工業(yè)發(fā)酵工業(yè)中的噬菌體污染會(huì)嚴(yán)重危及生產(chǎn)中的噬菌體污染會(huì)嚴(yán)重危及生產(chǎn) 許多許多侵染有害生物侵染有害生物的病毒則可制成的病毒則可制成生物防治劑生物防治劑而用于生而用于生產(chǎn)實(shí)踐產(chǎn)實(shí)踐 許多病毒還是許多病毒還是生物學(xué)生物學(xué)基礎(chǔ)研究和基礎(chǔ)研究和基因工程基因工程中的重要材料中的重要材料或工具或工具一、一、 病毒的形態(tài)構(gòu)造和化學(xué)成分病毒的形態(tài)構(gòu)造和化學(xué)成分 一）病毒的大小一）病毒的大小 二）病毒的形態(tài)二）病毒的形態(tài) 三）病毒的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)和對(duì)稱性三）病毒的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)和對(duì)稱性重點(diǎn)重點(diǎn)一）病毒的大小一）病毒的大小 測(cè)量單位為納米測(cè)量單位為納米,直徑直徑20-200nm (病毒：細(xì)菌：真菌病毒：細(xì)菌：

8、真菌 約為約為1：10：100) 150nm 大型大型病毒病毒 最大：痘病毒，直徑約為最大：痘病毒，直徑約為200 nm 最?。翰硕够《荆睆阶钚。翰硕够《荆睆?-11nm 微生物的大小比較微生物的大小比較葡萄球菌葡萄球菌(1000nm(1000nm） 牛痘病毒300250nmABCDEFG立克次體立克次體450nm450nm衣原體衣原體390nm390nmA A、大腸桿菌噬菌體、大腸桿菌噬菌體 ( 65 ( 65 95nm )95nm )B B、腺病毒、腺病毒(70nm )(70nm )C C、脊髓灰質(zhì)炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒 (30nm )(30nm )D D、乙腦病毒、乙腦病毒(

9、 40nm )( 40nm )E E、蛋白分子、蛋白分子(10nm )(10nm )F F、流感病毒、流感病毒(100nm )(100nm )G G、煙草花葉病毒、煙草花葉病毒二）病毒的形態(tài)二）病毒的形態(tài) 1、病毒的細(xì)胞形態(tài)、病毒的細(xì)胞形態(tài) 多種多樣，多種多樣，有有桿狀桿狀、球狀球狀、蝌蚪狀蝌蚪狀、磚狀、子彈狀、磚狀、子彈狀 桿狀：桿狀：直桿狀直桿狀-煙草花葉病毒、苜?；ㄈ~病毒煙草花葉病毒、苜?；ㄈ~病毒 稍彎曲稍彎曲-馬鈴薯馬鈴薯X病毒、甜菜黃化病毒病毒、甜菜黃化病毒 球狀：球狀：豌豆花葉病毒、黃瓜花葉病毒、大多數(shù)動(dòng)物病毒豌豆花葉病毒、黃瓜花葉病毒、大多數(shù)動(dòng)物病毒 蝌蚪狀：蝌蚪狀：有些細(xì)菌病毒

10、有些細(xì)菌病毒桿狀桿狀球狀球狀蝌蚪狀蝌蚪狀二）病毒的形態(tài)二）病毒的形態(tài) 2、病毒的群體形態(tài)、病毒的群體形態(tài) 包涵體包涵體 噬菌斑噬菌斑 病斑和空斑病斑和空斑 枯斑枯斑 包涵體包涵體（inclusion body）概念：概念：感染病毒的感染病毒的宿主細(xì)胞宿主細(xì)胞內(nèi)，出現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下可見的大小、內(nèi)，出現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下可見的大小、形態(tài)、數(shù)量不等的小體，稱為形態(tài)、數(shù)量不等的小體，稱為包涵體包涵體。在細(xì)胞中的形成部位在細(xì)胞中的形成部位：位于位于細(xì)胞核細(xì)胞核內(nèi)內(nèi)如包疹病毒如包疹病毒 位于位于細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)如狂犬病毒等如狂犬病毒等 細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)都有都有麻疹病毒麻疹病毒 包涵體的本質(zhì)包涵

11、體的本質(zhì) 大多數(shù)是大多數(shù)是病毒粒子病毒粒子組成的，少數(shù)是細(xì)胞對(duì)病毒的反應(yīng)。組成的，少數(shù)是細(xì)胞對(duì)病毒的反應(yīng)。了解研究包涵體的實(shí)踐意義了解研究包涵體的實(shí)踐意義病毒鑒定、病毒鑒定、 臨床診斷依據(jù)臨床診斷依據(jù)噬菌斑噬菌斑(plaque)概念：概念： 指在指在宿主細(xì)菌宿主細(xì)菌的的菌苔菌苔上，上，噬菌體使菌體裂解而形成的一噬菌體使菌體裂解而形成的一個(gè)具有一定形狀、大小、邊緣個(gè)具有一定形狀、大小、邊緣和透明度的和透明度的空斑空斑（負(fù)菌落負(fù)菌落）。應(yīng)用應(yīng)用： 1 1、噬菌體定量計(jì)數(shù)、噬菌體定量計(jì)數(shù) 2 2、噬菌體的鑒定、噬菌體的鑒定烈性噬菌體噬菌斑烈性噬菌體噬菌斑溫和噬菌體噬菌斑溫和噬菌體噬菌斑 空斑和病斑：

12、空斑和病斑：由由動(dòng)物病毒動(dòng)物病毒在宿主單層細(xì)胞培養(yǎng)物上形成的。在宿主單層細(xì)胞培養(yǎng)物上形成的。也可以采用噬菌斑法類似的技術(shù)。用于動(dòng)物也可以采用噬菌斑法類似的技術(shù)。用于動(dòng)物病毒粒子的計(jì)數(shù)。病毒粒子的計(jì)數(shù)?？莅撸嚎莅撸?植物病毒植物病毒在植物葉片上形成的群體稱為枯斑在植物葉片上形成的群體稱為枯斑三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性 1、病毒的化學(xué)組成、病毒的化學(xué)組成 基本成分為基本成分為核酸核酸和和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)，有的還有脂質(zhì)、糖類等。，有的還有脂質(zhì)、糖類等。 病毒核酸病毒核酸 一種病毒只有一種核酸，核酸構(gòu)成了病毒的一種病毒只有一種核酸，核酸構(gòu)成了病毒的基因組基因組，具有，具有遺傳

13、信息的遺傳信息的載體載體和和傳遞體傳遞體的作用。的作用。 是是病毒系統(tǒng)分類病毒系統(tǒng)分類中最可靠的分子基礎(chǔ)。大多數(shù)病毒粒子中中最可靠的分子基礎(chǔ)。大多數(shù)病毒粒子中只有一個(gè)核酸分子，但有少數(shù)只有一個(gè)核酸分子，但有少數(shù)RNA病毒含病毒含2個(gè)或以上的核酸個(gè)或以上的核酸分子，各個(gè)分子擔(dān)負(fù)著不同的遺傳功能，它們一起構(gòu)成了分子，各個(gè)分子擔(dān)負(fù)著不同的遺傳功能，它們一起構(gòu)成了病毒的基因組，這些病毒為病毒的基因組，這些病毒為雙組分基因組雙組分基因組、三組分基因組三組分基因組和和多組分基因組多組分基因組。 類型極為多樣化：病毒類型極為多樣化：病毒DNA和和RNA不僅有是不僅有是單鏈單鏈(single strand,s

14、s)還是還是雙鏈雙鏈(double strand,ds) ，線狀線狀和和環(huán)狀環(huán)狀，而，而且有且有正鏈正鏈(+鏈鏈)和和負(fù)鏈負(fù)鏈(-鏈鏈)，其類型為生物之最。，其類型為生物之最。若干有代表性病毒的核酸類型若干有代表性病毒的核酸類型病毒病毒種類種類核酸核酸形態(tài)形態(tài)DNARNAssDNAdsDNAssRNAdsRNA動(dòng)動(dòng)物物病病毒毒線狀線狀細(xì)小病毒細(xì)小病毒(鼠細(xì)小病毒鼠細(xì)小病毒)痘病毒。皰疹病毒痘病毒。皰疹病毒腺病毒，彩虹病毒腺病毒，彩虹病毒細(xì)小細(xì)小RNA病毒病毒(脊髓灰質(zhì)炎病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒)呼腸孤病毒、質(zhì)呼腸孤病毒、質(zhì)型多角體病毒型多角體病毒環(huán)狀環(huán)狀乳多孔病毒乳多孔病毒(鼠多瘤病毒鼠多瘤病毒)植

15、植物物病病毒毒線狀線狀雙生病毒雙生病毒(玉米條紋病毒玉米條紋病毒)(煙草花葉病毒、煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒黃瓜花葉病毒)傷瘤病毒傷瘤病毒(玉米矮縮病毒玉米矮縮病毒)環(huán)狀環(huán)狀花椰菜花葉病毒組花椰菜花葉病毒組微微生生物物病病毒毒線狀線狀E.coil的的T系和系和系系噬菌體噬菌體E.coil的的MS2 和和RNA噬菌體噬菌體(真菌病毒、假單真菌病毒、假單菌的菌的6噬菌體噬菌體)環(huán)狀環(huán)狀(E.coli的的X174、fd、f1噬菌體噬菌體)銅綠假單胞菌的銅綠假單胞菌的PM2噬菌體噬菌體細(xì)菌病毒細(xì)菌病毒真菌病真菌病毒毒三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性 1、病毒的化學(xué)組成、病毒的化

16、學(xué)組成 病毒蛋白質(zhì)：由病毒病毒蛋白質(zhì)：由病毒核酸核酸編碼編碼 結(jié)構(gòu)功能：結(jié)構(gòu)功能：結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的成分結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的成分 衣殼蛋白衣殼蛋白：包在病毒外構(gòu)成病毒的基本結(jié)構(gòu)：包在病毒外構(gòu)成病毒的基本結(jié)構(gòu)核衣殼核衣殼 包膜蛋白包膜蛋白： 基質(zhì)蛋白基質(zhì)蛋白：連接衣殼蛋白與包膜蛋白的部分：連接衣殼蛋白與包膜蛋白的部分吸附功能：吸附功能：噬菌體尾絲及包膜糖蛋白噬菌體尾絲及包膜糖蛋白刺突刺突吸附在宿主表面的吸附在宿主表面的受體受體上上破壞宿主細(xì)胞膜與細(xì)胞壁破壞宿主細(xì)胞膜與細(xì)胞壁：如噬菌體的溶菌酶如噬菌體的溶菌酶增殖增殖：各種酶。如各種酶。如DNADNA和和RNARNA聚合酶，聚合酶，RNARNA復(fù)

17、制酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等復(fù)制酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性裸露病毒：裸露病毒： 基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)( (核衣殼核衣殼) ) 包膜：包膜：核心核心( (基因組基因組) )：衣殼：衣殼：病毒核酸病毒核酸由許許多多由許許多多衣殼粒衣殼粒( (蛋白質(zhì)亞單位蛋白質(zhì)亞單位) )組成組成由由類脂類脂雙層膜雙層膜( (來自宿主的細(xì)胞膜來自宿主的細(xì)胞膜) )組成，有的長(zhǎng)有組成，有的長(zhǎng)有刺突刺突包膜病毒：包膜病毒： 2、病毒的構(gòu)造、病毒的構(gòu)造 病毒粒病毒粒(病毒體病毒體)：有時(shí)也稱：有時(shí)也稱病毒顆粒病毒顆粒或或病毒粒子病毒粒子，專指成熟的、結(jié)構(gòu)完整的和有感染性的單個(gè)病毒。專指成熟的、

18、結(jié)構(gòu)完整的和有感染性的單個(gè)病毒。病毒粒的模式構(gòu)造病毒粒的模式構(gòu)造衣殼粒衣殼粒衣殼衣殼核心（核核心（核 酸）酸）核衣殼核衣殼包膜包膜包膜病毒包膜病毒包膜子粒包膜子粒3 3、病毒粒的對(duì)稱體制、病毒粒的對(duì)稱體制 桿狀：桿狀：煙草花葉病毒煙草花葉病毒(TMV(TMV) )等等 絲狀：絲狀：E.coilE.coil的的f1f1、fdfd、M13 M13 噬菌體等噬菌體等 卷曲狀：正粘病毒卷曲狀：正粘病毒( (流感病毒流感病毒) )等等 彈狀：狂犬病毒，水泡性口膜炎病毒等彈狀：狂犬病毒，水泡性口膜炎病毒等 小型：脊髓灰質(zhì)炎病毒等，小型：脊髓灰質(zhì)炎病毒等，174174噬菌體等噬菌體等 大型：大型：腺病毒腺病

19、毒等等 無包膜：無包膜： E.coilE.coil的的T T偶數(shù)噬菌體偶數(shù)噬菌體( (蝌蚪狀蝌蚪狀) )等等 有包膜有包膜 ：痘病毒：痘病毒( (磚塊狀磚塊狀) )三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對(duì)稱性無包膜無包膜無包膜無包膜有包膜有包膜螺旋對(duì)稱螺旋對(duì)稱二十面體對(duì)稱二十面體對(duì)稱復(fù)合對(duì)稱復(fù)合對(duì)稱有包膜：皰疹病毒等有包膜：皰疹病毒等ssRNA(5%)衣殼粒衣殼粒 (95%)煙草花葉病毒的模式構(gòu)造煙草花葉病毒的模式構(gòu)造腺病毒的模式構(gòu)造腺病毒的模式構(gòu)造A A 二十面體的形態(tài)二十面體的形態(tài)五鄰體五鄰體腺病毒的模式構(gòu)造腺病毒的模式構(gòu)造B B 衣殼粒形態(tài)衣殼粒形態(tài)1212個(gè)角，個(gè)角，202

20、0個(gè)面，個(gè)面，3030條棱，條棱，252252個(gè)球狀衣殼粒個(gè)球狀衣殼粒70-80nm六鄰體六鄰體腺病毒的模式構(gòu)造腺病毒的模式構(gòu)造C C 腺病毒的形態(tài)腺病毒的形態(tài) 核心為線狀核心為線狀dsDNAdsDNAE.coilE.coil的的T T偶數(shù)噬菌體的模式構(gòu)造偶數(shù)噬菌體的模式構(gòu)造T2T2、T4T4、T6T665nm95nm95nm20nm（中空的核心）（中空的核心）二、二、 4 4類病毒及其繁殖方式類病毒及其繁殖方式 一）原核生物病毒一）原核生物病毒噬菌體噬菌體 二）植物病毒二）植物病毒 三）人類和脊椎動(dòng)物病毒三）人類和脊椎動(dòng)物病毒 四）昆蟲病毒四）昆蟲病毒一）原核生物病毒一）原核生物病毒噬菌體噬

21、菌體 概念概念： 即原核生物的病毒。包括即原核生物的病毒。包括噬細(xì)菌體噬細(xì)菌體、噬放線菌體噬放線菌體和和噬藍(lán)細(xì)菌體噬藍(lán)細(xì)菌體等。等。 分布：分布： 噬菌體在自然界廣泛存在，凡有原核生物活動(dòng)之處噬菌體在自然界廣泛存在，凡有原核生物活動(dòng)之處幾乎都發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)噬體菌存在。幾乎都發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)噬體菌存在。 種類：種類： 可歸納成可歸納成6種主要形態(tài)種主要形態(tài)噬菌體的六類形態(tài)噬菌體的六類形態(tài)T-系噬菌體系噬菌體T-系噬菌體是研究的最廣泛而又深入的細(xì)菌噬菌系噬菌體是研究的最廣泛而又深入的細(xì)菌噬菌體，按發(fā)現(xiàn)的先后順序進(jìn)行從體，按發(fā)現(xiàn)的先后順序進(jìn)行從T1-T7編號(hào)，后來發(fā)現(xiàn)其中偶數(shù)者的編號(hào)，后來發(fā)現(xiàn)其中偶數(shù)者的形態(tài)

22、都相同（蝌蚪形形態(tài)都相同（蝌蚪形收縮性長(zhǎng)尾收縮性長(zhǎng)尾），故統(tǒng)稱），故統(tǒng)稱T偶數(shù)噬菌體偶數(shù)噬菌體（A型）。型）。1 1、噬菌體的繁殖、噬菌體的繁殖 吸附吸附(adsorption) 侵入侵入 (penetration) 增殖增殖(復(fù)制與生物合成）復(fù)制與生物合成） 成熟（裝配）成熟（裝配）( assembly ) 裂解（釋放）裂解（釋放）( release)幾個(gè)概念幾個(gè)概念 烈性噬菌體（烈性噬菌體（virulent phage） 感染細(xì)胞后，能在寄主細(xì)胞內(nèi)短時(shí)間完成吸附、侵入、感染細(xì)胞后，能在寄主細(xì)胞內(nèi)短時(shí)間完成吸附、侵入、增殖、成熟和裂解增殖、成熟和裂解5個(gè)階段而實(shí)現(xiàn)繁殖，產(chǎn)生大量子代噬菌個(gè)階段

23、而實(shí)現(xiàn)繁殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體。體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體。 溫和噬菌體（溫和噬菌體（temperate phrage） 噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合（插入）到宿主的核噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合（插入）到宿主的核DNA上，并且可以隨宿主上，并且可以隨宿主DNA的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在一般情況下，不引起寄主細(xì)胞裂解的噬菌體。一般情況下，不引起寄主細(xì)胞裂解的噬菌體。 裂解性周期（增殖性周期）裂解性周期（增殖性周期） 烈性噬菌體所經(jīng)歷的繁殖過程烈性噬菌體所經(jīng)歷的繁殖過程The Lytic Life Cycle of Lytic Bacteriopha

24、ges 吸附：吸附： 接觸接觸結(jié)合結(jié)合特異性吸附（病毒以其特異性吸附（病毒以其特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)與與宿主細(xì)胞表面的宿主細(xì)胞表面的特異受體特異受體結(jié)合）結(jié)合） 噬菌體噬菌體: :尾絲、刺突尾絲、刺突- - 細(xì)胞壁細(xì)胞壁( (脂多糖、脂蛋白、磷壁酸脂多糖、脂蛋白、磷壁酸) ) 莢膜、鞭毛、性毛莢膜、鞭毛、性毛 動(dòng)物病毒：刺突、吞噬作用和胞飲作用被動(dòng)進(jìn)入動(dòng)物病毒：刺突、吞噬作用和胞飲作用被動(dòng)進(jìn)入 植物病毒：刺突植物病毒：刺突 侵入侵入 病毒或其一部分進(jìn)入宿主細(xì)胞的過程病毒或其一部分進(jìn)入宿主細(xì)胞的過程 噬菌體噬菌體: :吸附后尾絲收縮，使尾管碰及細(xì)胞壁，這時(shí)，尾管端吸附后尾絲收縮，使尾管碰及細(xì)胞壁，這時(shí)

25、，尾管端所攜帶的少量溶菌酶水解細(xì)胞上的肽聚糖，然后，尾鞘收縮，所攜帶的少量溶菌酶水解細(xì)胞上的肽聚糖，然后，尾鞘收縮，把尾管推出并插入細(xì)胞壁中，頭部的核酸就通過尾管迅速注入把尾管推出并插入細(xì)胞壁中，頭部的核酸就通過尾管迅速注入宿主細(xì)胞中，而將蛋白質(zhì)外殼留在壁外。宿主細(xì)胞中，而將蛋白質(zhì)外殼留在壁外。 動(dòng)物病毒：核衣殼侵入，需動(dòng)物病毒：核衣殼侵入，需脫殼脫殼 植物病毒：通過表面?zhèn)诨蚶ハx口器插入細(xì)胞而侵入植物病毒：通過表面?zhèn)诨蚶ハx口器插入細(xì)胞而侵入吸附和侵入吸附和侵入The bacteriophage binds to receptors on the bacterial cell wall. T

26、he bacteriophage injects its genome into the bacteriums cytoplasm Fig. 2: Penetration Fig. 1: Adsorption 增殖（復(fù)制和生物合成）增殖（復(fù)制和生物合成） 核酸復(fù)制核酸復(fù)制增殖（復(fù)制和生物合成）增殖（復(fù)制和生物合成） 蛋白質(zhì)的生物合成蛋白質(zhì)的生物合成 首先是設(shè)法利用宿主細(xì)胞內(nèi)原有的首先是設(shè)法利用宿主細(xì)胞內(nèi)原有的RNA聚合酶聚合酶轉(zhuǎn)錄出噬菌體的轉(zhuǎn)錄出噬菌體的mRNA 病毒一轉(zhuǎn)錄出其病毒一轉(zhuǎn)錄出其mRNA，就由這些，就由這些mRNA合成出合成出病毒蛋白質(zhì)病毒蛋白質(zhì)(酶、酶、衣殼粒衣殼粒) 早期轉(zhuǎn)錄早

27、期轉(zhuǎn)錄:早期蛋白早期蛋白 次早期轉(zhuǎn)錄次早期轉(zhuǎn)錄:次早期蛋白次早期蛋白 晚期轉(zhuǎn)錄晚期轉(zhuǎn)錄:晚期蛋白晚期蛋白噬菌體的基因組轉(zhuǎn)錄和表達(dá)噬菌體的基因組轉(zhuǎn)錄和表達(dá)具有嚴(yán)格的具有嚴(yán)格的時(shí)序性時(shí)序性裝配裝配( (成熟成熟) ) 偶數(shù)噬菌體的裝配偶數(shù)噬菌體的裝配 指導(dǎo)裝配：需要有一些非結(jié)構(gòu)蛋白作指導(dǎo)指導(dǎo)裝配：需要有一些非結(jié)構(gòu)蛋白作指導(dǎo)成熟成熟 (裝配裝配) TMV的裝配的裝配 自體裝配：各個(gè)組分自發(fā)地組裝形成病毒粒自體裝配：各個(gè)組分自發(fā)地組裝形成病毒粒完整病毒粒完整病毒粒雙層盤雙層盤雙圈螺旋雙圈螺旋裂解裂解(釋放釋放) 裂解（裂解（DisintegrationDisintegration） : : 裸露病毒裸

28、露病毒 裂解裂解 當(dāng)宿主細(xì)胞內(nèi)的大量子代噬菌體成熟后，由于水解細(xì)胞膜的脂當(dāng)宿主細(xì)胞內(nèi)的大量子代噬菌體成熟后，由于水解細(xì)胞膜的脂肪酶和水解細(xì)胞壁的溶菌酶等的作用，促進(jìn)了細(xì)胞的肪酶和水解細(xì)胞壁的溶菌酶等的作用，促進(jìn)了細(xì)胞的裂解裂解，從，從而完成了子代噬菌體的釋放。而完成了子代噬菌體的釋放。 自外裂解自外裂解 指大量噬菌體吸附在同一宿主細(xì)胞表面并釋放眾多的溶菌酶，指大量噬菌體吸附在同一宿主細(xì)胞表面并釋放眾多的溶菌酶，最終因外在的原因而導(dǎo)致細(xì)胞裂解。最終因外在的原因而導(dǎo)致細(xì)胞裂解。 裂解量：裂解量：平均每一宿主細(xì)胞裂解后產(chǎn)生的子代病毒粒子數(shù)平均每一宿主細(xì)胞裂解后產(chǎn)生的子代病毒粒子數(shù) 出芽（出芽（Bud

29、dingBudding）: : 包膜病毒包膜病毒 裝配好的核衣殼遷移到宿主細(xì)胞膜上對(duì)應(yīng)特異部位，在裝配好的核衣殼遷移到宿主細(xì)胞膜上對(duì)應(yīng)特異部位，在出芽出芽穿過細(xì)胞膜的過程中裹上包膜，釋放穿過細(xì)胞膜的過程中裹上包膜，釋放.植植物物病病毒毒的的繁繁殖殖過過程程2、噬菌體效價(jià)的測(cè)定、噬菌體效價(jià)的測(cè)定 效價(jià)效價(jià)(滴度滴度,Titre) 表示表示每毫升每毫升試樣中所含有的試樣中所含有的具有侵染性具有侵染性的的病毒粒子病毒粒子數(shù)。數(shù)。 噬菌體效價(jià)噬菌體效價(jià) 或或噬菌斑形成單位噬菌斑形成單位（plaque-forming unit,pfu）或）或感染中心數(shù)感染中心數(shù)（infective centre），指噬

30、菌體的濃度，即），指噬菌體的濃度，即每毫升每毫升試樣中含具有試樣中含具有侵染性的侵染性的噬菌體噬菌體的個(gè)數(shù)。的個(gè)數(shù)。 噬菌體效價(jià)測(cè)定方法噬菌體效價(jià)測(cè)定方法 電鏡直接計(jì)數(shù)法、電鏡直接計(jì)數(shù)法、血細(xì)胞血細(xì)胞凝集試驗(yàn)、抗原試驗(yàn)（免疫沉淀試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、抗原試驗(yàn)（免疫沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等）、分光光度法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等）、分光光度法 雙層平板法雙層平板法 成斑率成斑率 同一樣品根據(jù)同一樣品根據(jù)噬菌斑噬菌斑計(jì)算出來的計(jì)算出來的效價(jià)效價(jià)與用與用電鏡電鏡計(jì)算出來的計(jì)算出來的效價(jià)效價(jià)比。比。主要操作步驟：主要操作步驟：雙層平板法雙層平板法（2%2%瓊脂瓊脂底層培養(yǎng)基底層培養(yǎng)基7-8mL7-8mL）上層培

31、養(yǎng)基上層培養(yǎng)基（1%1%瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基3mL3mL）底層平板底層平板宿主菌懸液（對(duì)數(shù)期菌液宿主菌懸液（對(duì)數(shù)期菌液0.2mL0.2mL）噬菌體試樣（合適稀釋液噬菌體試樣（合適稀釋液0.1mL0.1mL）上層平板上層平板雙層平板雙層平板混均混均3710余余h 計(jì)數(shù)噬菌斑計(jì)數(shù)噬菌斑 雙層平板法雙層平板法計(jì)算出來的噬菌體效價(jià)總是比計(jì)算出來的噬菌體效價(jià)總是比用電鏡用電鏡直接計(jì)數(shù)直接計(jì)數(shù)得到的效價(jià)低得到的效價(jià)低可使所有噬菌斑都近似位于可使所有噬菌斑都近似位于同一平面同一平面上，因上，因而大小一致、邊緣清晰且無重疊現(xiàn)象而大小一致、邊緣清晰且無重疊現(xiàn)象瓊脂較稀，故形成的的瓊脂較稀，故形成的的噬菌噬菌斑斑

32、形態(tài)較大、特征較明顯并形態(tài)較大、特征較明顯并便于觀察和計(jì)數(shù)便于觀察和計(jì)數(shù)3、一步生長(zhǎng)曲線、一步生長(zhǎng)曲線 概念：概念： 或稱一級(jí)生長(zhǎng)曲線，是定量描述或稱一級(jí)生長(zhǎng)曲線，是定量描述烈性噬菌體烈性噬菌體生長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線。生長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線。 基本實(shí)驗(yàn)步驟基本實(shí)驗(yàn)步驟 1、吸附、吸附 用噬菌體的用噬菌體的高倍稀釋液高倍稀釋液去感染去感染高濃度高濃度的宿主細(xì)胞，以保證每個(gè)細(xì)胞所的宿主細(xì)胞，以保證每個(gè)細(xì)胞所吸附的噬體體至多只有一個(gè)。吸附的噬體體至多只有一個(gè)。 吸附數(shù)分鐘后，在混合液中加入適量的相應(yīng)吸附數(shù)分鐘后，在混合液中加入適量的相應(yīng)抗血清抗血清以中和尚未吸附的以中和尚未吸附的噬菌體。噬菌體。 2、稀釋、

33、稀釋 用保溫的培養(yǎng)液稀釋此混合液，同時(shí)終止抗血清的作用。用保溫的培養(yǎng)液稀釋此混合液，同時(shí)終止抗血清的作用。 3、培養(yǎng)與測(cè)定、培養(yǎng)與測(cè)定 置于置于適宜的溫度適宜的溫度與培養(yǎng)，其間每隔數(shù)分鐘取樣，連續(xù)測(cè)定其效價(jià)，以與培養(yǎng)，其間每隔數(shù)分鐘取樣，連續(xù)測(cè)定其效價(jià)，以感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，噬菌體的效價(jià)為縱坐標(biāo)繪制一步生長(zhǎng)曲線。感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，噬菌體的效價(jià)為縱坐標(biāo)繪制一步生長(zhǎng)曲線。3、一步生長(zhǎng)曲線、一步生長(zhǎng)曲線指噬菌體核酸指噬菌體核酸侵入侵入宿主細(xì)胞后至宿主細(xì)胞后至第一第一個(gè)個(gè)成熟噬菌體粒子成熟噬菌體粒子裝配前裝配前的一段時(shí)間。的一段時(shí)間。指潛伏期后的宿主指潛伏期后的宿主細(xì)胞細(xì)胞迅速裂解迅速裂解，溶，溶液中噬

34、菌體粒子液中噬菌體粒子急急劇增多劇增多的一段時(shí)間。的一段時(shí)間。指感染后的宿主細(xì)指感染后的宿主細(xì)菌菌全部裂解全部裂解，溶液，溶液中中噬菌體效價(jià)噬菌體效價(jià)達(dá)到達(dá)到最高點(diǎn)最高點(diǎn)的時(shí)期。的時(shí)期。指在潛伏前期指在潛伏前期人為地人為地( (用用氯仿等氯仿等) )裂解宿主細(xì)胞后，裂解宿主細(xì)胞后，此裂解液仍此裂解液仍無侵染性無侵染性的的一段時(shí)間一段時(shí)間。胞內(nèi)積累期：胞內(nèi)積累期：指在隱晦期指在隱晦期后，若后，若人為地人為地裂解細(xì)胞，裂解細(xì)胞，其裂解液其裂解液已呈現(xiàn)侵染性已呈現(xiàn)侵染性的的一段時(shí)間。一段時(shí)間。噬菌體噬菌體以分鐘計(jì)，以分鐘計(jì)，動(dòng)物病毒動(dòng)物病毒和和植物病毒植物病毒以小時(shí)或天計(jì)。以小時(shí)或天計(jì)。是平均是平均

35、每一宿主細(xì)胞每一宿主細(xì)胞裂解后所產(chǎn)生的裂解后所產(chǎn)生的子代子代病毒粒子病毒粒子數(shù)。其值等于平穩(wěn)期病毒效價(jià)與數(shù)。其值等于平穩(wěn)期病毒效價(jià)與潛伏期病毒效價(jià)之比。潛伏期病毒效價(jià)之比。噬菌體噬菌體的裂解量一般為幾十至上百個(gè)，的裂解量一般為幾十至上百個(gè)，動(dòng)動(dòng)物病毒物病毒和和植物病毒植物病毒可達(dá)數(shù)百至上萬(wàn)個(gè)可達(dá)數(shù)百至上萬(wàn)個(gè)3、一步生長(zhǎng)曲線、一步生長(zhǎng)曲線Phage plaquesPhage plaques概念概念：又稱又稱一級(jí)生長(zhǎng)曲線一級(jí)生長(zhǎng)曲線，定量，定量描述描述烈性噬菌體烈性噬菌體生長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)生長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線。其驗(yàn)曲線。其基本實(shí)驗(yàn)步驟基本實(shí)驗(yàn)步驟為：為：Samples removed at 5-minut

36、e intervalsSamples removed at 5-minute intervalsP h a g e P h a g e suspensionsuspensionInfected Infected bacteriabacteriaBacteriaBacteriaBacteria Bacteria lysedlysedBacteriaBacteriachlorofomchlorofomHostHostbacteriabacteria melted agarmelted agarBacteriaBacteriaeach cell becones each cell becones i

37、nfected with one phageinfected with one phageAllow to hardedAllow to hardedSandwich of top agar Sandwich of top agar and nutrient agarand nutrient agarN u t r i e n t N u t r i e n t agar plateagar plateIncubate 24-48 hoursIncubate 24-48 hoursLawn of host Lawn of host cellcellBacteriophagBacteriopha

38、ge suspensione suspensionAllowed to stand 1 Allowed to stand 1 minute with chloroformminute with chloroformPour mixture of bacteria and Pour mixture of bacteria and phage onto nutrient agar platephage onto nutrient agar plate1%1%瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基 45-4845-482%2%瓊脂瓊脂雙層平雙層平板板每隔數(shù)每隔數(shù)分鐘取分鐘取樣樣4、溶源性、溶源性 概念：概念： 或稱或

39、稱溶源現(xiàn)象溶源現(xiàn)象。指。指溫和噬菌體溫和噬菌體侵染敏感宿主細(xì)胞后不裂解它們，而侵染敏感宿主細(xì)胞后不裂解它們，而與宿主細(xì)胞共存的特性。與宿主細(xì)胞共存的特性。 溶源菌：溶源菌：是能與是能與溫和噬菌體溫和噬菌體長(zhǎng)期共存，一般不會(huì)出現(xiàn)有害影響的宿主長(zhǎng)期共存，一般不會(huì)出現(xiàn)有害影響的宿主細(xì)胞。細(xì)胞。 溫和噬菌體溫和噬菌體 如如E.coli的的 、P1、P2，Salmonella typhimurium的的P22等等 存在形式：存在形式： 游離態(tài)：游離態(tài)：指成熟后被釋放并有侵染性的游離噬菌體狀態(tài)指成熟后被釋放并有侵染性的游離噬菌體狀態(tài) 整合態(tài)：整合態(tài)：指已整合到宿主基因上的前噬菌體狀態(tài)。指已整合到宿主基因上

40、的前噬菌體狀態(tài)。 (進(jìn)入進(jìn)入溶源性周期溶源性周期) 營(yíng)養(yǎng)態(tài)：指前噬菌體經(jīng)外界理化因子誘導(dǎo)后，脫離宿主核基營(yíng)養(yǎng)態(tài)：指前噬菌體經(jīng)外界理化因子誘導(dǎo)后，脫離宿主核基因組而處于積極復(fù)制、合成和裝配的狀態(tài)。因組而處于積極復(fù)制、合成和裝配的狀態(tài)。 檢出：噬菌斑檢出：噬菌斑前噬菌體：前噬菌體：沒有感染力沒有感染力圖圖1.1-4 細(xì)菌受噬菌體感染后的兩種反應(yīng)細(xì)菌受噬菌體感染后的兩種反應(yīng) A.裂解反應(yīng)裂解反應(yīng) B.溶原性反應(yīng)溶原性反應(yīng)自發(fā)或誘導(dǎo)變異自發(fā)或誘導(dǎo)變異營(yíng)養(yǎng)態(tài)營(yíng)養(yǎng)態(tài)游離態(tài)游離態(tài)整整合合態(tài)態(tài)自發(fā)或誘導(dǎo)變異自發(fā)或誘導(dǎo)變異烈性噬菌體與溫和噬菌體的生活史比較：烈性噬菌體與溫和噬菌體的生活史比較：吸附吸附侵入侵入增

41、殖增殖成熟成熟裂解裂解整合整合同步復(fù)制同步復(fù)制自發(fā)或誘導(dǎo)自發(fā)或誘導(dǎo)多次循環(huán)多次循環(huán)裂解性循環(huán)裂解性循環(huán)溶源性循環(huán)溶源性循環(huán)溶源菌的檢驗(yàn)：溶源菌的檢驗(yàn)：方法：方法：將少量溶源菌與大量的將少量溶源菌與大量的敏感性指示菌敏感性指示菌混合混合倒倒瓊脂平板瓊脂平板經(jīng)培養(yǎng)后觀察是否有經(jīng)培養(yǎng)后觀察是否有噬菌斑噬菌斑出現(xiàn)。出現(xiàn)。敏感性指示菌敏感性指示菌遇遇溶源菌溶源菌裂解后所釋放的裂解后所釋放的溫和噬菌體溫和噬菌體會(huì)發(fā)生裂解會(huì)發(fā)生裂解循環(huán)者，這些菌株可以從自然界或菌種庫(kù)中獲得。循環(huán)者，這些菌株可以從自然界或菌種庫(kù)中獲得。由于溶源菌在細(xì)胞分裂過程中有極少數(shù)個(gè)體會(huì)引起自發(fā)裂由于溶源菌在細(xì)胞分裂過程中有極少數(shù)個(gè)體會(huì)

42、引起自發(fā)裂解，其釋放的噬菌體可不斷侵染溶源菌菌落周圍的解，其釋放的噬菌體可不斷侵染溶源菌菌落周圍的指示菌指示菌菌苔，菌苔，于是就形成了一個(gè)個(gè)于是就形成了一個(gè)個(gè)中央有溶源菌的小菌落中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈圍四周有透明圈圍著著的獨(dú)特的的獨(dú)特的噬菌斑噬菌斑在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)待測(cè)菌樣在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)待測(cè)菌樣原噬菌體復(fù)制原噬菌體復(fù)制除去活菌體除去活菌體倒瓊脂平板（或?qū)V液加到倒瓊脂平板（或?qū)V液加到敏敏感性指示菌感性指示菌的液體培養(yǎng)物中的液體培養(yǎng)物中培養(yǎng)培養(yǎng)觀察是否有噬菌斑出現(xiàn)（或使菌液變清）觀察是否有噬菌斑出現(xiàn)（或使菌液變清）對(duì)數(shù)期進(jìn)行紫外照射對(duì)數(shù)期進(jìn)行紫外照射培養(yǎng)，過濾培養(yǎng)，過濾取取

43、少量濾液少量濾液與大量的與大量的敏敏感性指示菌感性指示菌混合混合溶源菌的優(yōu)化溶源菌的優(yōu)化檢驗(yàn)檢驗(yàn)步驟：步驟：補(bǔ)充補(bǔ)充1：病毒的分類：病毒的分類 病毒的分類系統(tǒng)病毒的分類系統(tǒng) 病毒分類與命名的權(quán)威機(jī)構(gòu)病毒分類與命名的權(quán)威機(jī)構(gòu) 國(guó)際病毒分類委員會(huì)（國(guó)際病毒分類委員會(huì)（ICTV） 國(guó)際病毒分類系統(tǒng)國(guó)際病毒分類系統(tǒng) 目、科、亞科、目、科、亞科、屬屬、種種分類依據(jù)是其免疫學(xué)特性與宿主特異性分類依據(jù)是其免疫學(xué)特性與宿主特異性ICTV將其定義為將其定義為具有一定世代關(guān)系并占據(jù)具有一定世代關(guān)系并占據(jù)一定生境的病毒群。一定生境的病毒群。即在具有即在具有科科和和屬屬特征特征前提下，把某些次要特征不完全相同的病前提

44、下，把某些次要特征不完全相同的病毒歸為同一種。毒歸為同一種。 病毒種以下的血清型、基因型、毒力株、變異株和分離株的分病毒種以下的血清型、基因型、毒力株、變異株和分離株的分類和命名由公認(rèn)的類和命名由公認(rèn)的國(guó)際專家小組國(guó)際專家小組確定。確定。 病毒的命名病毒的命名 采用英文或英文化拉丁文，只用單名，不用斜體書寫。但采用英文或英文化拉丁文，只用單名，不用斜體書寫。但目目、科科、亞科亞科、屬屬分別用拉丁文后綴分別用拉丁文后綴“virales”、“viridae”、“virinae”、“virus”。補(bǔ)充補(bǔ)充2：病毒研究的基本方法：病毒研究的基本方法 一、病毒的培養(yǎng)一、病毒的培養(yǎng) 病毒只能在對(duì)其敏感的病

45、毒只能在對(duì)其敏感的相應(yīng)宿主及其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)宿主及其細(xì)胞內(nèi)才能繁殖。才能繁殖。 二、病毒的分離與純化二、病毒的分離與純化 1、病毒的分離、病毒的分離 將疑有病毒而待分離的標(biāo)本經(jīng)處理后，接種于敏感的實(shí)驗(yàn)宿主、將疑有病毒而待分離的標(biāo)本經(jīng)處理后，接種于敏感的實(shí)驗(yàn)宿主、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)過一段時(shí)間后，檢查病毒雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)過一段時(shí)間后，檢查病毒特異性病理表現(xiàn)特異性病理表現(xiàn)或用其他方法來肯定病毒的存在。或用其他方法來肯定病毒的存在。 2、病毒的純化、病毒的純化 (1)病毒純化的標(biāo)準(zhǔn)病毒純化的標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充補(bǔ)充2：病毒研究的基本方法：病毒研究的基本方法 二、病毒的鑒定：病毒性質(zhì)和特征分析二、病毒的鑒定：病毒性質(zhì)

46、和特征分析 1、病毒感染的、病毒感染的宿主范圍宿主范圍及及感染表現(xiàn)感染表現(xiàn)的鑒定的鑒定 2、病毒的理化性質(zhì)鑒定、病毒的理化性質(zhì)鑒定 病毒顆粒大小和形態(tài)、病毒及其組分的沉降系數(shù)、浮力密度和病毒顆粒大小和形態(tài)、病毒及其組分的沉降系數(shù)、浮力密度和相對(duì)分子質(zhì)量、病毒的核酸類型、對(duì)理化因子的敏感性等。相對(duì)分子質(zhì)量、病毒的核酸類型、對(duì)理化因子的敏感性等。 3、血細(xì)胞凝集性質(zhì)鑒定、血細(xì)胞凝集性質(zhì)鑒定 不同病毒所凝集的不同病毒所凝集的血細(xì)胞種類血細(xì)胞種類及發(fā)生凝集所要求的溫度、及發(fā)生凝集所要求的溫度、pH條件不同條件不同 4、病毒的血清學(xué)鑒定、病毒的血清學(xué)鑒定 采用免疫血清或抗體，進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、

47、酶聯(lián)免采用免疫血清或抗體，進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、血凝抑制實(shí)驗(yàn)等疫吸附測(cè)定、血凝抑制實(shí)驗(yàn)等 5、病毒的分子生物學(xué)鑒定、病毒的分子生物學(xué)鑒定病毒感染宿主所引起的病毒感染宿主所引起的疾病癥狀；疾病癥狀；在雞胚絨在雞胚絨毛尿囊膜上所形成的毛尿囊膜上所形成的痘皰形態(tài)痘皰形態(tài)及在單層細(xì)胞及在單層細(xì)胞培養(yǎng)物上所產(chǎn)生的培養(yǎng)物上所產(chǎn)生的細(xì)胞病變表現(xiàn)細(xì)胞病變表現(xiàn)等等補(bǔ)充補(bǔ)充3：病毒與腫瘤發(fā)生：病毒與腫瘤發(fā)生 腫瘤腫瘤 是由失去調(diào)控而是由失去調(diào)控而異常生長(zhǎng)和繁殖異常生長(zhǎng)和繁殖的的新生異常細(xì)胞新生異常細(xì)胞或或瘤瘤形成的組織團(tuán)塊。形成的組織團(tuán)塊。 據(jù)估計(jì)，據(jù)估計(jì)，15%的人類腫瘤是由病毒所引起。

48、的人類腫瘤是由病毒所引起。 腫瘤病毒腫瘤病毒 可引發(fā)機(jī)體腫瘤發(fā)生的病毒。其最顯著的特征是能夠可引發(fā)機(jī)體腫瘤發(fā)生的病毒。其最顯著的特征是能夠像像溫和噬菌體溫和噬菌體一樣把病毒自身核酸整合到宿主染色體一樣把病毒自身核酸整合到宿主染色體DNA上。上。補(bǔ)充補(bǔ)充4：新生病毒：新生病毒 概念概念 指以往指以往局部低水平局部低水平感染的病毒或具有感染的病毒或具有種間屏障種間屏障的病毒，的病毒，將其宿主范圍擴(kuò)大到別的物種，引起了大范圍的人類將其宿主范圍擴(kuò)大到別的物種，引起了大范圍的人類傳染性疾病。傳染性疾病。 其產(chǎn)生與人類對(duì)環(huán)境的破壞有關(guān)、其產(chǎn)生與人類對(duì)環(huán)境的破壞有關(guān)、 艾滋病艾滋?。ㄈ祟惈@得性免疫缺陷綜合癥

49、，（人類獲得性免疫缺陷綜合癥，AIDS），其病原體是人），其病原體是人免疫缺陷病毒（免疫缺陷病毒（HIV） 其產(chǎn)生與現(xiàn)代交通、旅游發(fā)展和人類大規(guī)模遷居有關(guān)其產(chǎn)生與現(xiàn)代交通、旅游發(fā)展和人類大規(guī)模遷居有關(guān) 脊髓灰質(zhì)炎病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒 其產(chǎn)生與某些病毒基因突變改變了宿主范圍或致病力有關(guān)其產(chǎn)生與某些病毒基因突變改變了宿主范圍或致病力有關(guān) 禽流感禽流感（AI），由），由A型流感（型流感（H有有15個(gè)型，個(gè)型，N有有9個(gè)型）病毒引起個(gè)型）病毒引起 H5N1流感、甲型流感、甲型H1N1流感流感 ，由，由A型流感病毒變種引起型流感病毒變種引起 其產(chǎn)生與人和動(dòng)物的密切接觸有關(guān)其產(chǎn)生與人和動(dòng)物的密切接觸有關(guān) 嚴(yán)

50、重急性呼吸綜合癥嚴(yán)重急性呼吸綜合癥（SARS），由），由SARS冠狀病毒引起冠狀病毒引起第二節(jié)第二節(jié) 亞病毒亞病毒 類病毒類病毒(Viroids)：只含只含具具獨(dú)立侵染活性的獨(dú)立侵染活性的核酸核酸 低相對(duì)分子量，有二級(jí)結(jié)構(gòu)低相對(duì)分子量，有二級(jí)結(jié)構(gòu) 環(huán)狀環(huán)狀 ，裸露，裸露ssRNA 分子，無衣殼或包膜分子，無衣殼或包膜 復(fù)制依賴于宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)，而復(fù)制依賴于宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)，而不需要輔助不需要輔助病毒病毒 其其RNA不產(chǎn)生蛋白質(zhì)不產(chǎn)生蛋白質(zhì) 其其RNA總是在總是在宿主細(xì)胞核宿主細(xì)胞核中復(fù)制中復(fù)制 類病毒顆粒的識(shí)別需要類病毒顆粒的識(shí)別需要鑒定其鑒定其RNA序列序列 多與多與植物疾病植物疾

51、病相關(guān)相關(guān)第二節(jié)第二節(jié) 亞病毒亞病毒 衛(wèi)星因子：衛(wèi)星因子：只含只含不具不具獨(dú)立侵染活性的獨(dú)立侵染活性的核酸核酸，需需輔助病毒輔助病毒才能復(fù)制和感染才能復(fù)制和感染 衛(wèi)星病毒衛(wèi)星病毒 核酸分子核酸分子含有編碼衣殼蛋白含有編碼衣殼蛋白的遺傳信息，核酸被所編碼的的遺傳信息，核酸被所編碼的衣殼蛋白包裹成形態(tài)學(xué)和血清學(xué)與輔助病毒不同的顆粒。衣殼蛋白包裹成形態(tài)學(xué)和血清學(xué)與輔助病毒不同的顆粒。 衛(wèi)星核酸（衛(wèi)星衛(wèi)星核酸（衛(wèi)星RNA或衛(wèi)星或衛(wèi)星DNA） 核酸分子核酸分子沒有編碼衣殼蛋白沒有編碼衣殼蛋白的遺傳信息，核酸被裝配于輔的遺傳信息，核酸被裝配于輔助病毒的衣殼蛋白中。助病毒的衣殼蛋白中。 例如：例如： 煙草壞

52、死病毒（煙草壞死病毒（TNV）衛(wèi)星病毒衛(wèi)星病毒（STNV） 人類丁型肝炎病毒（人類丁型肝炎病毒（HDV）是乙型肝炎病毒（）是乙型肝炎病毒（HBV）的）的衛(wèi)衛(wèi)星核酸星核酸第二節(jié)第二節(jié) 亞病毒亞病毒 朊病毒：朊病毒：蛋白侵染子（蛋白侵染子（“普利昂普利昂”） 是具是具侵染性蛋白質(zhì)分子侵染性蛋白質(zhì)分子，對(duì)人類最大的威脅是導(dǎo)致，對(duì)人類最大的威脅是導(dǎo)致人類和家畜患中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，最終不治人類和家畜患中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，最終不治而亡。而亡。 抗熱，抗熱，90度不能使之失活度不能使之失活 抗輻射抗輻射 抗抗DNA酶或酶或RNA酶降解酶降解 對(duì)蛋白質(zhì)變性劑如酚和尿素敏感對(duì)蛋白質(zhì)變性劑如酚和尿素敏感 具有直接配對(duì)的氨基酸具有直接配對(duì)的氨基酸 例如例如 庫(kù)魯病庫(kù)魯病、克雅病克雅病、牛海綿狀腦?。?、牛海綿狀腦?。ǒ偱２’偱２?，BSE）第三節(jié)病毒與實(shí)踐第三節(jié)病毒