實驗7植物的組織培養(yǎng)(浙科版選修1)xuesheng

1、組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖營養(yǎng)繁殖扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 植物植物 無性繁殖無性繁殖方法方法實驗實驗11 11 植物的組織培養(yǎng)植物的組織培養(yǎng)一、基礎知識取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在無菌條件下接種在三角瓶中的瓊或花粉等，在無菌條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的溫度和光照，使之產(chǎn)脂培養(yǎng)基上，給予一定的溫度和光照，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進而生根發(fā)芽。生愈傷組織，或進而生根發(fā)芽。2 2、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？植物細胞具有全能性植物細胞具有全能性，即植物體的細胞，即植物體的細胞，具有發(fā)育成為完整植物

2、體的能力。具有發(fā)育成為完整植物體的能力。3 3、植物組織培養(yǎng)過程中通過什么手段可、植物組織培養(yǎng)過程中通過什么手段可以誘導不同器官的生成？以誘導不同器官的生成？通過改變細胞分裂素和生長素的比例通過改變細胞分裂素和生長素的比例細胞分裂素細胞分裂素/ /生長素的比例高，誘導芽的生成。生長素的比例高，誘導芽的生成。發(fā)芽培養(yǎng)基發(fā)芽培養(yǎng)基: :細胞分裂素細胞分裂素/ /生長素的比例中等，生長素的比例中等，愈傷組織生長但不分化。愈傷組織生長但不分化。細胞分裂素細胞分裂素/ /生長素的比例低，誘導根的分化。生長素的比例低，誘導根的分化。生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基: :4.4.植物組織培養(yǎng)的基本過程植物組織培養(yǎng)的基本

3、過程: :離體離體的植物的植物器官、組織、器官、組織、細胞細胞脫分化愈愈傷傷組組織織再分化根根芽芽植植物物體體煙草植株取根細胞培養(yǎng)形成愈傷組織發(fā)育成幼胚長成植 物幼體成熟植株消毒、滅菌處理消毒、滅菌處理5.5.植物組織培養(yǎng)條件植物組織培養(yǎng)條件: :含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌環(huán)境、合適的空氣、無菌環(huán)境、合適的PHPH、適時光照、適時光照、一定濃度的激素配比等。一定濃度的激素配比等。本實驗使用的是人工合成的萘乙酸（生長素）本實驗使用的是人工合成的萘乙酸（生長素）人工合成的芐基腺嘌呤（細胞分裂素）人工合成的芐基腺嘌呤（細胞分裂素）二、菊花的

4、組織培養(yǎng)( (一一) )設備及用品設備及用品1.100ml1.100ml三角瓶或大口培養(yǎng)瓶三角瓶或大口培養(yǎng)瓶 2.2.鑷子鑷子 3.3.超凈臺超凈臺 4.4.滅菌鍋滅菌鍋 5.5.封口膜和橡皮圈封口膜和橡皮圈 6.6.有棉球的廣口瓶有棉球的廣口瓶 7.7.酒精燈酒精燈 8.8.三角漏斗三角漏斗 9.9.培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿( (二二) )材料材料1.MS1.MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基( (用于配置發(fā)芽和生根培養(yǎng)基用于配置發(fā)芽和生根培養(yǎng)基) )2.2.萘乙酸用少量萘乙酸用少量0.1mol/LNaOH0.1mol/LNaOH溶液溶解溶液溶解, ,芐基腺嘌呤用少量芐基腺嘌呤用少量0.1mol/LHCL0.1mol/L

5、HCL溶解溶解3.3.發(fā)芽培養(yǎng)基發(fā)芽培養(yǎng)基( (滅菌滅菌) )4.4.生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基( (滅菌滅菌) )( (三三) )步驟步驟1.1.取外植體取外植體 超凈臺上將無菌培養(yǎng)的幼苗切段超凈臺上將無菌培養(yǎng)的幼苗切段, ,每段至少每段至少1 1張葉片張葉片2.2.生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng) 生芽培養(yǎng)基中生芽培養(yǎng)基中, ,放入放入1-31-3段切段，使段切段，使一部分莖部插入培養(yǎng)基一部分莖部插入培養(yǎng)基, ,蓋上封口膜蓋上封口膜. .日光燈下保持日光燈下保持18251825的溫度培養(yǎng)的溫度培養(yǎng), ,每天光照不少于每天光照不少于14.5h14.5h。3.3.生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)2323周后周后, ,將叢狀苗在無菌

6、條件下轉(zhuǎn)入將叢狀苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)基中, ,在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng). .4.4.適應鍛煉適應鍛煉 將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中, ,用玻璃用玻璃罩或塑料布保持罩或塑料布保持8080以上的濕度以上的濕度,23,23天后打開減低濕度進行鍛煉天后打開減低濕度進行鍛煉, ,直到將直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。罩全部打開處于自然濕度下為止。5.5.定植定植將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)，即可長成植株并開花。將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)，即可長成植株并開花。若使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)方法方法: :7070乙醇乙醇中浸泡中浸泡10mi

7、n10min5 5次氯酸次氯酸鈉溶液中鈉溶液中浸泡浸泡5min5min5 5次氯酸次氯酸鈉溶液中鈉溶液中浸泡浸泡5min5min超凈臺超凈臺上用無上用無菌水清菌水清洗洗將莖移將莖移至生芽至生芽培養(yǎng)基培養(yǎng)基中中思考與練習：P611.1.不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度？用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度？2.2.本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？的天然激素，為什么？不可相同不可相同天然激素都有相應的使之分解的酶，所以天然激素都有相應的使之分解

8、的酶，所以使用時間短，而人工合成的激素，沒有分使用時間短，而人工合成的激素，沒有分解酶，作用時間長，效果顯著。解酶，作用時間長，效果顯著。3.3.如果在自然界取植物樣本進行組織培養(yǎng)如果在自然界取植物樣本進行組織培養(yǎng), ,你認為你認為應采取什么措施保證樣本不被污染應采取什么措施保證樣本不被污染? ?（1 1）操作環(huán)境清潔（）操作環(huán)境清潔（2 2）植物樣本的潔凈）植物樣本的潔凈（3 3）操作敏捷迅速）操作敏捷迅速污染的預防措施（一）防止外植體帶菌（一）防止外植體帶菌（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌滅菌（三）操作人員嚴格遵守無菌操作（三）操作人員嚴格遵守無菌操作規(guī)程規(guī)程（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔愈傷組織 脫分化 已經(jīng)分化的植物組織停止分裂。已經(jīng)分化的植物組織停止分裂。 組織從這種狀態(tài)中擺脫出來，恢復分裂和分組織從這種狀態(tài)中擺脫出來，恢復分裂和分化能力的過程稱為脫