N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒使用說明書

1、N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒使用說明書(酶法·液體雙試劑)用 途本試劑盒用以測(cè)定尿液中N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。原 理在第一反應(yīng)中用己糖激酶(HK)消去血清中內(nèi)源性葡萄糖的影響，在第二反應(yīng)中，NAG作用于基質(zhì)P-硝基苯酚-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。此H2O2在過氧化物酶(POD)的作用下與高靈敏的發(fā)色劑雙3-雙(4-氯酚)甲基-4-二甲氨苯基胺(BCMA)反應(yīng)，生成綠色色素。通過測(cè)定此色素可求得NAG的活力。第一反應(yīng)： HK

2、 葡萄糖 + ATP 葡萄糖-6-磷酸 + ADP第二反應(yīng)： NAG PNP-NAG + H2O N-乙酰氨基葡萄糖 + p-硝基苯酚 NAGOD N-乙酰氨基葡萄糖 + O2 + H2O N-乙酰氨基葡萄糖酸 + H2O2 PODH2O2 + BCMA + H+ 綠色色素 + 2H2O試 劑 試 劑 成 份 含 量 R-1A1(凍干) NAGOD 3000U/L POD 12500U/L HK 8000U/L ATP·2Na 5mg/ml R-1A2(凍干) PNP-NAG R-1B 2-嗎啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L R-2A(凍干) BCMA R-2B MES 30m

3、mol/L 標(biāo)準(zhǔn)酶 NAG 約為50U/L標(biāo)準(zhǔn)酶溶解液 MES 30mmol/L標(biāo) 本尿液試劑配制R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。溶解后，低溫避光保存(2-8)可穩(wěn)定二周。R-2：以一瓶R-2B溶解一瓶R-2A。溶解后，低溫避光保存(2-8)可穩(wěn)定二周。標(biāo)準(zhǔn)酶溶液：吸取5.00ml標(biāo)準(zhǔn)酶溶解液溶解一瓶標(biāo)準(zhǔn)酶。測(cè)定方法分析方法：速率A；主波長(zhǎng)：750nm；副波長(zhǎng)：600nm（可不用）；樣品量：4.0ul；R-1：240ul，R-2：120ul；校準(zhǔn)方式：線性；反應(yīng)方向：上升；測(cè)定溫度：37。樣品與R-1混勻后反應(yīng)5分鐘，加入R-2混合后延遲157秒，測(cè)定1

4、25秒。樣品 4.0ul 主波長(zhǎng)750nm R-1 240ul R-2 120ul 副波長(zhǎng)600nm 測(cè)光 測(cè)光 0 5 7 10min計(jì) 算 As/minNAG(U/L) = ×標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)示值 Astd/minAs/min = 測(cè)定管的吸光度變化量Astd/min = 標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度變化量計(jì)算實(shí)例采用日立7020型自動(dòng)分析儀測(cè)得測(cè)定管的A/min為，標(biāo)準(zhǔn)管的A/min（標(biāo)準(zhǔn)酶的含量為51.7 U/L）為0.153, 則 NAG(U/L) = × 參考范圍尿液：1.1-11.9 U/L建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的正常值參考范圍注意事項(xiàng)1. 正常濃度的膽紅素、抗壞血酸等還原物質(zhì)對(duì)測(cè)定

5、無影響。異常高濃度時(shí)會(huì)導(dǎo)致負(fù)的誤差。2. 高濃度的尿糖會(huì)導(dǎo)致正的誤差。尿糖異常高值時(shí)請(qǐng)將樣品稀釋至尿糖7g/dl后測(cè)定。3. 備有各種自動(dòng)分析儀的參數(shù)可供參考。試劑性能1. 靈敏度：以純水為樣品測(cè)定時(shí)的吸光度為0.000-0.050；以50 U/L的標(biāo)準(zhǔn)酶溶液為樣品測(cè)定時(shí)，吸光度為0.140-0.160。2. 線性范圍：0-125 U/L。3. 精密度：n=5，CV< 5。 4. 準(zhǔn)確性：測(cè)定定值質(zhì)量控制物時(shí)，測(cè)得值在定值±2SD的范圍以內(nèi)。 相關(guān)：r=0.999, y=1.231x+0.411 (y：本法，x：CPR-NAG法)。儲(chǔ)存及穩(wěn)定性本試劑盒在2-8避光保存可穩(wěn)定一年

6、；試劑R-1、R-2配制后在2-8避光保存可穩(wěn)定二周。臨床意義NAG是腎小管損傷的標(biāo)記物，尿NAG活性升高是腎臟損害的較敏感指標(biāo)。NAG活性可用于腎小管間質(zhì)性腎炎、尿路感染、糖尿病腎病綜合癥、高血壓腎病、腎移植后的排異反應(yīng)和腎病綜合癥的早期診斷。上述疾病時(shí)NAG活性的升高均早于其他相應(yīng)指標(biāo)，有利于疾病的早期發(fā)現(xiàn)和及時(shí)治療。NAG活性還可用于重金屬等腎毒性物質(zhì)環(huán)境污染的人群篩查、職業(yè)病調(diào)查等。上海申索佑福醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司上海市可樂路168號(hào)，200335電話（Tel）:62380893傳真（Fax）: 2004年1月N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒常用

7、的自動(dòng)分析儀主要參數(shù)日立7170型Test NameNAGUnitU/LNormal RangeAssay CodeRate A，10,27,34Wave Length600/750Sample VolumeR1 Volume240R3 Volume120Abs Limit25000,INCStandardConcentrationPosition10992標(biāo)示值*Calibrate MethodL2,2,0AU600型項(xiàng)目名NAG單位U/L樣品種類尿液樣品量4.0R1用量240R3用量120波長(zhǎng)750（主）/600（副）分析方法Rate反應(yīng)方向+測(cè)光點(diǎn)1S1 20, E1 27正常值范圍線性

8、形式AB近似式Y(jié)=AX+B標(biāo)準(zhǔn)位置*標(biāo)準(zhǔn)含量標(biāo)示值日立7060/7070型Test NameNAGUnitU/LNormal RangeStandardConcentrationPosition109992標(biāo)示值*Assay CodeRate A，10Wave Length600/750 Assay Point24，30Sample Volume4.0Abs Limit25000，INCR1 Volume240R3 Volume120Cal MethodL,2,2,0Beckman CX4/CX5/CX7Test Name NAGCalculate Factor0Math ModelLinearNo. of Calibrators1Reaction TypeRate 1Reaction DirectionIncreasingUnitsU/LDecimal PrecisionPrimary Wavelength700Secondary Wavelength600Sample VolumePrimary Inject Rgt A(ul)150S