黃芪防護(hù)高劑量順鉑所致腎毒性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1、    黃芪防護(hù)高劑量順鉑所致腎毒性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)        摘要目的:探討不同劑量的中藥黃芪對(duì)順鉑所致腎毒性的防護(hù)作用，以期指導(dǎo)臨床改變目前高劑量順鉑必須水化的現(xiàn)狀。方法:以7 mg.kg-1順鉑單次腹腔注射建立小鼠的腎損模型，于實(shí)驗(yàn)的第17天分別給予不同劑量的黃芪腹腔注射。評(píng)估小鼠血尿素氮、血肌酐、血NAG酶及腎臟病理學(xué)改變。同樣的方法實(shí)驗(yàn)S180荷瘤小鼠并評(píng)估瘤重。結(jié)果:不同劑量的黃芪均能明顯改善順鉑所致小鼠血尿素氮、血肌酐、血NAG酶的增高，并與黃芪的劑量正相關(guān)。但當(dāng)

2、黃芪劑量增加到一定數(shù)值，其保護(hù)作用穩(wěn)定，對(duì)順鉑的抗腫瘤活性均無影響。獲病理學(xué)支持。結(jié)論:黃芪確能防護(hù)順鉑所致的腎毒性且不影響其抗瘤活性。關(guān)鍵詞黃芪，順鉑，腎毒性，實(shí)驗(yàn)研究Protection of astragalus membranaceus against cisplatin-induced nephrotoxicity in miceHuang Tao,Lu Hongda,Fei Yan,et al (Department of Oncology,PUAI Hospital of Tongji Medical University,Wuhan 430033)ABSTRACTOBJECTI

3、VE:The aim of the present study is to evaluate whether astragalus membranaceus(AM) can ameliorate alteration nephrotoxicity by cisplatin in animal models.It is possible to administrate much high dose of cisplatin without large venoclysis in clinic.METHODS:Mice were induced by a single injection of c

4、isplatin(7 mg.kg-1 ip).Different AM dose(030 g.kg-1) was injected intraperitoneally from 1 to 7 day.Blood urea nitrogen,blood creatinine and N-aceyl-beta-D-glucisaminidase(NAG) were measured.On both of the investigated models renal pathomorphology was detected.Mice inoculated S180 tumor cells were m

5、easured by the same procedure and tumor weight was evaluated.RESULTS:The increase of blood urea nitrogen,blood creatinine,NAG in mice could be improved markedly by different AM dose.It was also supported by renal pathomorphology that AM could reduce the cisplatin-induced nephrotoxicity.AM treatment

6、did not result in any observable loss in anti-tumor activity of cisplatin.CONCLUSIONS:These data from the basis supposed that AM can protect nephrotoxicity induced by cisplatin without reducing its anti-tumor activity.It will be worthy of further clinical trial.KEY WORDSastragalus membranaceus,cispl

7、atin,nephrotoxicity,animal experiment抗腫瘤藥物順鉑臨床運(yùn)用廣泛、療效可靠。其主要毒副作用為劑量依賴的腎毒性。目前常采用大劑量水化來避免這一毒性，但老年人及原有心肺疾病患者不能耐受大量液體，使其應(yīng)用受到限制，直接影響化療療效及患者預(yù)后。中藥黃芪具有益氣補(bǔ)腎、利尿脫毒之功效1。本文通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討黃芪對(duì)順鉑所致腎毒性的防護(hù)作用及對(duì)順鉑抗腫瘤作用的影響。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.1.1昆明種小鼠，5周齡，體重1921 g，購自同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)中心，清潔級(jí)，合格證號(hào)：19-052。1.1.2昆明種S180荷瘤小鼠，5周齡，體重1921 g，S180(Cro

8、cker sarcoma)取自同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥研室。將普通昆明種小鼠在實(shí)驗(yàn)前于身體相同部位(右腋下)接種等量S180腫瘤細(xì)胞(每只106個(gè))，接種后24 h開始給藥觀察，710 d作為一個(gè)周期2。1.2藥物1.2.1黃芪注射液(AM)：1 ml相當(dāng)于黃芪2 g，由成都地奧九泓制藥廠提供，批號(hào)：9702050。根據(jù)黃芪急性毒性試驗(yàn)報(bào)告，其腹腔注射的LD50在250 g.kg-1以上。取黃芪LD50的1/8即30 g.kg-1作為其用藥最大試驗(yàn)劑量。1.2.2順鉑：10 mg/瓶(齊魯制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：9708008)。1.3方法1.3.1觀察不同劑量順鉑對(duì)小鼠腎臟病理的影響40只昆明種小鼠隨

9、機(jī)分5組，每組8只。于實(shí)驗(yàn)開始的第1天分別以生理鹽水0.2 ml(空白對(duì)照)、順鉑3，7，11，15 mg.kg-1腹腔注射。其中順鉑15 mg.kg-1組分別有6只小鼠于實(shí)驗(yàn)第72，78，92，96，102，120 h死亡。一經(jīng)證實(shí)死亡，立即解剖取腎，并以200 mg.kg-1甲醛固定。第8天將存活小鼠全部脫頸椎處死，立即解剖取腎，200 ml.kg-1甲醛固定。共得腎臟標(biāo)本40份作病理檢查。1.3.2觀察不同劑量黃芪對(duì)順鉑所致腎損害的影響普通昆明種小鼠及昆明種S180荷瘤小鼠各110只，隨機(jī)分11組，每組10只。各取1組于實(shí)驗(yàn)第17天僅每天予以0.3 ml生理鹽水腹腔注射，實(shí)驗(yàn)第4天刺眼球

10、取血0.5 ml觀察血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、血NAG酶(NAG)作為正常范圍對(duì)照。其余各組于實(shí)驗(yàn)第1天全部予以順鉑7 mg.kg-1一次性腹腔注射，并依據(jù)組別的不同于實(shí)驗(yàn)第17天分別給以生理鹽水0.2 ml、黃芪2，4，6，8，10，15，20，25，30 g.kg-1腹腔注射(實(shí)驗(yàn)各組每日每只注射液體量均為0.3 ml以消除液體容量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響)。所有小鼠實(shí)驗(yàn)第4天刺眼球取血0.5 ml送檢BUN、Cr、NAG酶。第8個(gè)24 h將全部小鼠脫頸椎處死，立即解剖取腎，200 ml.kg-1甲醛固定。共得腎臟標(biāo)本200份作病理檢查(僅注射生理鹽水的兩個(gè)對(duì)照組未行病理檢查)。1.3.

11、3觀察黃芪對(duì)順鉑抗腫瘤作用的影響昆明種S180荷瘤小鼠40只，隨機(jī)分5組，每組8只。分別為：生理鹽水(空白對(duì)照)組，順鉑加黃芪10，20，30 g.kg-1實(shí)驗(yàn)組，單用順鉑7 mg.kg-1(陽性對(duì)照)組。生理鹽水組實(shí)驗(yàn)第17天每日給以0.3 ml生理鹽水腹腔注射；順鉑加黃芪各組實(shí)驗(yàn)方法同前；單用順鉑組于實(shí)驗(yàn)第1天予以順鉑7 mg.kg-1腹腔注射，第27天給以生理鹽水0.3 ml。第8天將小鼠全部脫頸椎處死，分離小鼠右腋下瘤體組織并稱重，200 ml.kg-1甲醛固定。得瘤體標(biāo)本40份作病理檢查。1.4數(shù)據(jù)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理后，用Excel97進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)算相應(yīng)的F值、t值，并

12、比較P值3。2結(jié)果2.1不同劑量順鉑對(duì)小鼠腎臟病理的影響按照注射生理鹽水到注射順鉑劑量漸增的順序，小鼠腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)也出現(xiàn)相應(yīng)改變。注射順鉑7mg.kg-1的實(shí)驗(yàn)組腎間質(zhì)充血明顯，腎小管(尤其近曲小管)水變性明顯，嚴(yán)重者出現(xiàn)腎小管點(diǎn)片狀壞死。而順鉑劑量小于7 mg.kg-1實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組水變性極輕或無病變。順鉑劑量大于7 mg.kg-1實(shí)驗(yàn)組呈現(xiàn)典型腎小管片狀壞死、腎小管內(nèi)管型、管周炎性細(xì)胞浸潤(其中順鉑劑量15 mg.kg-1實(shí)驗(yàn)組8 d存活率僅為25%)。故用7 mg.kg-1順鉑為實(shí)驗(yàn)劑量。2.2不同劑量的黃芪對(duì)順鉑所致腎損害的影響2.2.1黃芪劑量與小鼠腎功能的關(guān)系曲線如1，2，3。可見

13、無論非荷瘤和荷瘤小鼠，隨著黃芪劑量的增大，其BUN、Cr、NAG酶的均值都呈逐漸下降趨勢(shì)。當(dāng)黃芪劑量達(dá)到10 g.kg-1以后，3項(xiàng)指標(biāo)均下降到正常范圍并維持穩(wěn)定，繼續(xù)增加黃芪劑量，不影響前述3項(xiàng)指標(biāo)(P>0.05)。1不同劑量黃芪對(duì)小鼠血BUN的影響(.為BUN正常范圍95%可信區(qū)間上限±s：7.5±1.6)2.2.2從送檢的20組病理標(biāo)本看，使用同劑量黃芪的非荷瘤和荷瘤小鼠腎臟病理改變相似(P>0.05)。而隨黃芪劑量逐漸增加的順序，小鼠腎臟的點(diǎn)狀壞死數(shù)目及水變性的情況漸少，10 g.kg-1黃芪(為Cr正常范圍95%可信區(qū)間上限±s：69.1&#

14、177;13.6)(為NAG正常范圍95%可信區(qū)間上限±s：73.4±12.2)以后的各劑量組水變性均十分輕微，僅有2例點(diǎn)狀壞死，組間比較無明顯差異(P>0.05)。2.3黃芪對(duì)順鉑抗腫瘤作用的影響選取黃芪對(duì)順鉑保護(hù)作用穩(wěn)定的3個(gè)劑量組10，20，30 g.kg-1來研究其對(duì)順鉑抗腫瘤作用的影響，見表1。通過比較瘤重可見，生理鹽水組瘤重明顯高于順鉑加黃芪組及單用順鉑組，且有極顯著差異(P<0.01)。而黃芪各組間瘤重?zé)o明顯差異(P>0.05)，雖較單用順鉑組的瘤重略輕，亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。2不同劑量黃芪對(duì)小鼠血Cr的影響(.為Cr正常范圍

15、95%可信區(qū)間上限±s：69±13.6)3不同劑量黃芪對(duì)小鼠血NAG的影響(.為NAG正常范圍95%可信區(qū)間上限±s：73.4±12.2)表 1黃芪對(duì)荷瘤小鼠瘤重的影響組別平均體重/g動(dòng)物始/末瘤重/g(±s)空白對(duì)照組20.48/81.93±0.2410 g.kg-1黃芪組20.38/80.67±0.2420 g.kg-1黃芪組19.88/80.68±0.1330 g.kg-1黃芪組19.58/80.67±0.15順鉑對(duì)照組20.68/70.78±0.183討論從小鼠腎臟病理來看，順鉑的劑量越大腎臟損害越重。黃芪對(duì)于順鉑所致腎毒性的保護(hù)作用與其劑量正相關(guān)。但當(dāng)黃芪劑量達(dá)到一定數(shù)值，其保護(hù)作用基本保持穩(wěn)定，不再與劑量相關(guān)。黃芪1