實(shí)驗(yàn)性牙齒移動(dòng)中TG內(nèi)P2X3受體的表達(dá)變化(1)

1、    實(shí)驗(yàn)性牙齒移動(dòng)中TG內(nèi)P2X3受體的表達(dá)變化(1)    】 目的: 研究正畸牙移動(dòng)中加力后P2X3受體在三叉神經(jīng)節(jié)的表達(dá)變化規(guī)律，以探討P2X3受體在正畸牙移動(dòng)疼痛機(jī)制中的作用. 方法: 以雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，模擬臨床矯治的牙移動(dòng)過程，應(yīng)用免疫組織化學(xué)手段進(jìn)行研究. 結(jié)果: 大鼠牙齒加力后,觀察到三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元P2X3受體免疫反應(yīng)陽性率增高，并呈現(xiàn)一定的時(shí)間規(guī)律：實(shí)驗(yàn)后1 d開始出現(xiàn)變化，實(shí)驗(yàn)后3 d達(dá)高峰，14 d后下降至與對(duì)照組基本一致. 結(jié)論: 大鼠牙移動(dòng)過程中，三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)（TG）的P2X3

2、受體表達(dá)變化是一過性變化,呈現(xiàn)短時(shí)上調(diào)的規(guī)律，時(shí)間與正畸牙移動(dòng)疼痛時(shí)間一致.【關(guān)鍵詞】 正畸牙移動(dòng);三叉神經(jīng)節(jié); ATP; P2X3受體0引言正畸臨床治療是通過對(duì)錯(cuò)位的牙，牙弓或頜骨施加一定的矯治力來達(dá)到畸形矯治的目的，伴隨著很多機(jī)體的反應(yīng)，疼痛的產(chǎn)生是正畸治療中最常見問題之一. 研究發(fā)現(xiàn)三磷酸腺ATP及它的功能類似體在周圍組織的炎癥時(shí)使動(dòng)物的疼痛行為加強(qiáng)1. 因此ATP及其嘌呤類受體P2X3被認(rèn)為在組織和神經(jīng)受損害后扮演傷害感受信息的初級(jí)傳入及傳導(dǎo)的角色2. 越來越多的證據(jù)表明P2X3受體參與傷害刺激的編碼表達(dá),P2X3受體是P2X受體的一個(gè)亞單位，P2X受體是ATP門控陽離子通道的一個(gè)家族

3、3，它與細(xì)胞外的ATP結(jié)合后被激活4， P2X3受體基因是在1995年從感覺神經(jīng)元cDNA文庫中克隆出來的3,5，被特異的定位于感覺神經(jīng)節(jié)的中小徑的神經(jīng)元如背根神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)節(jié)(trigeminal ganglion, TG)及節(jié)狀神經(jīng)節(jié) 3, 5-6,當(dāng)正畸加力使牙移動(dòng)時(shí)，由于牙周膜，牙槽骨和牙齦等會(huì)發(fā)生組織改建，可以預(yù)料這些都將對(duì)外周神經(jīng)有激惹，造成神經(jīng)損傷，可能使細(xì)胞內(nèi)的ATP向細(xì)胞外流動(dòng)通過三叉神經(jīng)細(xì)胞的.P2X3受體傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致患者出現(xiàn)疼痛不適等感覺異常. 本研究擬對(duì)正畸牙移動(dòng)中加力后引起P2X3受體在三叉神經(jīng)節(jié)的表達(dá)變化進(jìn)行探索,為進(jìn)一步研究P2X3受體在正畸疼痛機(jī)制中的作用奠

4、定基礎(chǔ).1材料和方法1.1材料選用8 wk雄性SD大鼠（四川大學(xué)華西動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物符合國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物求）共84只,體質(zhì)量200250 g, 在安靜環(huán)境中飼養(yǎng)48 h以上.隨機(jī)分為3組：實(shí)驗(yàn)組：輕力（50 g）組及重力（100 g）組，按時(shí)間段各有7小組，每組4只. 空白對(duì)照組按時(shí)間段分7小組，每組4只. 采用鹽酸氯胺酮（0.4 mg/100g）肌注麻醉. 將大鼠一側(cè)上頜第一磨牙和前牙間用結(jié)扎絲拴正畸用NiTi螺旋彈簧（0.008×0.032)為防止彈簧脫落，在前牙唇面及軸角處磨出深約0.51.0 mm槽溝，便于結(jié)扎絲結(jié)扎. 測(cè)力計(jì)測(cè)力，建立輕力（50 g）及重力（100

5、 g）正畸力作用下的牙移動(dòng)模型. 分別于加力后4 h, 1, 2, 3, 5, 7和14 d定期處死. 處死后迅速取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組同側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)、液氮速凍保存，冰凍連續(xù)切片,片厚10 m.吹干后零下20冰箱保存.1.2.1免疫組織化學(xué)染色大鼠的三叉神經(jīng)節(jié)冰凍切片，常規(guī)LsAB法. 第一抗體（Santa Cruz生物技術(shù)公司，美國(guó)）為親和純化的P2X3羊多克隆抗體(1100)；免疫熒光第二抗體(vector公司)為FITC標(biāo)記兔抗山羊IgG(1100)，加二抗前程序同常規(guī)LsAB法. 陰性對(duì)照試驗(yàn)：空白對(duì)照用0.01 mol/L PBS (pH 7.4)取代一抗;血清對(duì)照用正常羊血清取代一抗.1

6、.2.2圖像分析各時(shí)間點(diǎn)的每只大鼠三叉神經(jīng)節(jié)隨機(jī)選取不相鄰切片各三張,在明視野下計(jì)數(shù)免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元的總數(shù)量,計(jì)算其占節(jié)內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞總數(shù)的比例，得到每只大鼠的陽性神經(jīng)元百分率，按每組4只大鼠，計(jì)算出平均百分率，并求得標(biāo)準(zhǔn)差.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 資料用SPSS 10.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間單因素方差統(tǒng)計(jì)分析.2結(jié)果2.1免疫組化染色鏡下觀察表明P2X3受體抗體標(biāo)記的棕黃色陽性胞體均勻分布于下頜支,上頜支及眼支,的感覺神經(jīng)元上, 主為中小型神經(jīng)元,直徑從1045 m，部分大型神經(jīng)元也有部分著色. DAB染色標(biāo)記在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿里的陽性胞體染色深淺不一，部分細(xì)胞核部位著色淺或不著色，周圍胞漿點(diǎn)狀著

7、色，似菊花樣. 部分細(xì)胞胞漿內(nèi)染色致密均勻，只在中心部位略淡胞體染色深淺與胞體大小無關(guān)(圖1A，B).2.2P2X3受體變化情況大鼠牙移動(dòng)后,實(shí)驗(yàn)組P2X3免疫反應(yīng)陽性在TG神經(jīng)元中的表達(dá)明顯上調(diào)并呈現(xiàn)出時(shí)程變化. 與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組P2X3免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元的數(shù)量在刺激后4 h即有微弱增加，至第3日達(dá)到高峰（圖1B, 圖2B），此后逐漸減少，14 d后P2X3受體神經(jīng)元陽性率與對(duì)照組相似. 而輕力組與重力組相比變化較小(表1).A: 對(duì)照; B: 重力實(shí)驗(yàn)(3 d).圖1大鼠三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元P2X3受體陽性表達(dá)LsAB ×400（略）A: 對(duì)照; B: 重力實(shí)驗(yàn)(3 d).圖2大

8、鼠三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元P2X3受體陽性表達(dá)(免疫熒光)LsAB ×200（略）            作者：曹陽,賴文莉,陳揚(yáng)熙 【關(guān)鍵詞】正畸牙移動(dòng);三叉神經(jīng)節(jié);,ATP;,P2X3受體Change of P2X3 receptor express         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)

9、習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。表1實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間TG內(nèi)P2X3陽性神經(jīng)元比率（略）aP<0.05, bP<0.01 vs對(duì)照.2.3免疫熒光結(jié)果FITC標(biāo)記的神經(jīng)元細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光, 主標(biāo)記在中小型細(xì)胞及部分大細(xì)胞,可見重力組3 d（圖2B）的P2X3陽性神經(jīng)元的密度較正常對(duì)照組(圖2A)明顯增加.3討論3.1ATP，P2X3受體及三叉神經(jīng)節(jié)ATP不僅存在于細(xì)胞內(nèi)，也存在于細(xì)胞外. 細(xì)胞內(nèi)的ATP為細(xì)胞膜上的各種離子泵提供能量；而細(xì)胞外的ATP在神經(jīng)，肌肉等組織中的信息傳遞中起一定的作用. ATP從組織損傷的部位或一些病理狀態(tài)的交感神經(jīng)末端

10、釋放而作用于感覺神經(jīng)末端的嘌呤受體已證實(shí)是引起疼痛開始的原因7. 在神經(jīng)損傷后ATP和P2X3嘌呤受體在感覺神經(jīng)元的超敏性及向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)傳遞疼痛信息中有重的角色8. 已經(jīng)有較多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明支持p2X3受體介導(dǎo)傷害感受的理論,特別是通過對(duì)P2X3基因敲除的大鼠的實(shí)驗(yàn) 9,已經(jīng)較明確了P2X3受體在大鼠的外周疼痛傳入中的主作用.生理學(xué)研究表明頭面部的傷害性信息是由三叉神經(jīng)節(jié)中的中小徑神經(jīng)元傳入的10，在正畸力作用下，牙周膜內(nèi)出現(xiàn)張力區(qū)和壓力區(qū)，即使使用輕微的力量，也能造成牙周組織的損傷,疼痛的刺激興奮牙齒的外周傷害性感受器傳導(dǎo)至初級(jí)感覺三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元后再傳導(dǎo)至中樞神經(jīng). 本研究結(jié)果顯

11、示p2x3受體主呈現(xiàn)在三叉神經(jīng)節(jié)小中徑神經(jīng)元上,與以前的報(bào)道相似11-12. P2X3受體在初級(jí)感覺神經(jīng)節(jié)的特異定位分布強(qiáng)烈提示其與牙移動(dòng)中的傷害痛覺反應(yīng)有密切的關(guān)系，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)P2X3受體的免疫反應(yīng)陽性在少部分三叉神經(jīng)節(jié)的大神經(jīng)元也有表達(dá),提示P2X3除與痛覺有關(guān),很可能還與正畸牙移動(dòng)中的本體感覺有關(guān). 有待進(jìn)一步研究.    3.2牙移動(dòng)中P2X3受體在三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)變化我們的實(shí)驗(yàn)顯示在牙移動(dòng)時(shí)P2X3生了上調(diào)的現(xiàn)象,提示牙移動(dòng)時(shí)造成了一定的神經(jīng)傷害,矯治力使牙齒一側(cè)神經(jīng)受壓另一側(cè)受牽張,損傷導(dǎo)致三磷酸腺苷ATP時(shí)釋放出來,對(duì)傷害性感受器起激活作

12、用,而P2X3這個(gè)特殊的離子通道貫穿于神經(jīng)元胞膜內(nèi)外,當(dāng)ATP在細(xì)胞外部與其結(jié)合時(shí)就開放.從而激活了三叉神經(jīng)節(jié)中部分未表達(dá)或表達(dá)較弱的細(xì)胞,使組織中的基因和蛋白表達(dá)的效率增加, P2X3受體免疫反應(yīng)上升可能是在受損后P2X3的合成增加為中樞神經(jīng)末端提供新的受體而造成的結(jié)果，此外免疫組織化學(xué)研究結(jié)果顯示輕力組的P2X3受體免疫反應(yīng)弱于重力組,提示在正畸牙移動(dòng)時(shí),輕力造成的疼痛傷害較輕,對(duì)臨床上提倡輕力矯治提供一個(gè)佐證，但合適的力值范圍值得進(jìn)一步研究.本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)P2X3的表達(dá)在1 wk或2 wk后出現(xiàn)降低,這可能是局部組織已逐漸適應(yīng)外界刺激的原因,也說明P2X3的表達(dá)變化可隨刺激而變化,是短時(shí)

13、間的效應(yīng),不是一個(gè)持續(xù)的變化,也暗合了牙移動(dòng)的一過性疼痛規(guī)律,提示P2X3的表達(dá)在牙移動(dòng)疼痛中的可能重位置. 最近的研究顯示P2X3也許不是急性疼痛的主介導(dǎo)13,而是主在慢性炎癥及神經(jīng)病理性疼痛中表達(dá)14,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果從疼痛類型提示了P2X3的表達(dá)變化在矯治力引起的慢性疼痛中的重作用.3.3牙移動(dòng)中P2X3受體變化與其他痛覺模型中變化本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Eriksson等12報(bào)道在三叉神經(jīng)的分支神經(jīng)受損傷但神經(jīng)元保持完整的情況下P2X3受體的表達(dá)是呈現(xiàn)瞬時(shí)的上調(diào)及持續(xù)增加的結(jié)果基本相一致. 可以看出在神經(jīng)損傷時(shí)如果神經(jīng)元保持完整,則表達(dá)是呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì),如果神經(jīng)元受損,則出現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì),而牙移動(dòng)是由于牙

14、周神經(jīng)或牙髓神經(jīng)受到損傷,是三叉神經(jīng)感覺神經(jīng)分支末梢受損,沒有損傷到神經(jīng)節(jié)的感覺神經(jīng)元,神經(jīng)元保持完整,故其中P2X3的表達(dá)呈現(xiàn)出上調(diào)的趨勢(shì). 因而從一定意義上我們可以將牙移動(dòng)模型看為一種局部神經(jīng)損傷模型.【參考文獻(xiàn)】1 Hamilton SG, Wade A, McMahon SB. The effects of inflammation and inflammatory mediators on nociceptive behaviour induced by ATP analogues in the ratJ. Br J Pharmacol, 1999，126(1): 326-332.2

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