微生物(第5章開(kāi)始)

1、 第五章：微生物的營(yíng)養(yǎng)微生物的六大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)： 碳源：提供微生物細(xì)胞或代謝產(chǎn)物中碳素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 碳素構(gòu)成細(xì)胞及代謝產(chǎn)物的骨架 碳素是大多數(shù)微生物代謝所需的能量來(lái)源 氮源：提供微生物細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中氮素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 提供合成細(xì)胞物質(zhì)代謝產(chǎn)物的原料，一般不做能源（除硝化細(xì)菌） 有速效氮源（無(wú)機(jī)氮和蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物）和遲效氮源（水解成胨、肽） 無(wú)機(jī)鹽：構(gòu)成微生物細(xì)胞的組成成分 調(diào)節(jié)微生物細(xì)胞的滲透壓，PH值和氧化還原電 位 有些無(wú)機(jī)鹽如S、Fe還可做為自養(yǎng)微生物的能源 構(gòu)成酶活性基的組成成分，維持酶活性。Mg、Ca、K是多種酶的激活劑 生長(zhǎng)因子：微生物生長(zhǎng)代謝所必需的微量有機(jī)營(yíng)養(yǎng)因子（維生素，堿基

2、，氨基酸） 水：生化反應(yīng)的介質(zhì)；比熱高，溫度不易變化；維持細(xì)胞形態(tài) 能源：提供能量來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物或輻射能不同微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型 碳源自養(yǎng)型，異養(yǎng)型 能源光能營(yíng)養(yǎng)型，化能營(yíng)養(yǎng)型 取得有機(jī)物的死活腐生型，寄生型 （相應(yīng)野生型突變而需外加生長(zhǎng)因子） 生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子自養(yǎng)型和生長(zhǎng)因子異養(yǎng)型； 營(yíng)養(yǎng)缺陷型和野生型 氨基酸氨基酸自養(yǎng)型，氨基酸異養(yǎng)型主要營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型 電子供體 舉例 光能自養(yǎng)型 H2、H2S、S或H2O 紫硫細(xì)菌，藍(lán)細(xì)菌 光能異養(yǎng)型 有機(jī)物 紫色無(wú)硫細(xì)菌 化能自養(yǎng)型 Fe2+、S、NH3、NO-2 硫/硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌 化能異養(yǎng)型 有機(jī)物 大多數(shù)細(xì)菌運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式 簡(jiǎn)單擴(kuò)散，協(xié)助擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸（

3、質(zhì)子動(dòng)力和ATP動(dòng)力），基團(tuán)轉(zhuǎn)位 基團(tuán)轉(zhuǎn)位：需要載體蛋白參與，消耗能量，且被運(yùn)輸物質(zhì)發(fā)生了分析結(jié)構(gòu)修飾。 主要存在于厭氧及兼性厭氧型微生物 培養(yǎng)基配置的原則： 合適的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其濃度與配比 碳氮比C/N：培養(yǎng)真菌較高，培養(yǎng)細(xì)菌尤其是病原菌較低（影響生長(zhǎng)速度和代謝物積累） 速效氮有利于微生物生長(zhǎng)，遲效氮有利于代謝物的積累 物理和化學(xué)條件調(diào)節(jié) PH: 酵母菌-3.86.0 霉菌-4.56.0 細(xì)菌-7.07.6 放線菌-7.58.0 氧化還原電勢(shì)：常使用還原劑，如抗壞血酸，半胱氨酸，谷胱甘肽 （專(zhuān)性厭氧微生物） 滅菌處理：控制滅菌條件，即配即滅，設(shè)置陰性對(duì)照 常用高壓蒸汽滅菌-對(duì)糖要求較高時(shí)糖與其

4、他成分分別滅菌；加入螯合劑防止沉淀培養(yǎng)基類(lèi)型：天然培養(yǎng)基：比如肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)酵母菌的麥芽汁培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：由化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成，比如高氏一號(hào)培養(yǎng)基，察氏培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基 （真菌）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)加富培養(yǎng)基：加入一些特殊營(yíng)養(yǎng)（血清，生長(zhǎng)因子）物質(zhì)以滿(mǎn)足要求苛刻的微生物生長(zhǎng)鑒別培養(yǎng)基：加入試劑對(duì)不同類(lèi)型微生物或不同菌株進(jìn)行鑒別 （伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基）選擇培養(yǎng)基：根據(jù)微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或者其對(duì)物理化學(xué)因素的抗性而設(shè)計(jì)厭氧培養(yǎng)基：專(zhuān)門(mén)培養(yǎng)厭氧微生物的培養(yǎng)基 第六章 微生物的代謝代謝類(lèi)型： 分解代謝和合成代謝 初級(jí)代謝：通過(guò)分解代謝和合成代謝，合成生長(zhǎng)

5、繁殖必須化合物及能量 次級(jí)代謝：合成對(duì)生長(zhǎng)繁殖非必須化合物，避免初級(jí)代謝中的一些不利作用，有利于生存， 其產(chǎn)物大多為結(jié)構(gòu)復(fù)雜的化合物，如抗生素、細(xì)菌素、生物堿、維生素、色素 產(chǎn)能代謝和耗能代謝 （對(duì)數(shù)期后期，穩(wěn)定期）葡萄糖丙酮酸的途徑： 己糖二磷酸途徑（EMP途徑，糖酵解） 己糖單磷酸途徑（HMP途徑），提供大量NADPH2和不同長(zhǎng)度碳鏈 ED途徑，微生物特有，KDPG縮醛酶（特征酶） 磷酸銅解途徑（PK途徑），存在少數(shù)微生物中 直接氧化，沒(méi)有己糖激酶，葡萄糖氧化酶發(fā)酵： 微生物細(xì)胞將有機(jī)物氧化釋放的電子直接交給底物未完全氧化的某種中間產(chǎn)物，同時(shí)釋放能量并產(chǎn)生各種不同代謝產(chǎn)物的過(guò)程。 特點(diǎn)-無(wú)

6、外源電子受體，產(chǎn)生能量較少，有機(jī)物積累 呼吸作用： 分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，氧化放出電子，經(jīng)電子傳遞鏈給外源電子受體，并伴隨能量產(chǎn)生 原核微生物呼吸鏈在細(xì)胞膜上（中介體），真核生物在線粒體內(nèi)膜IMViC實(shí)驗(yàn)： 大腸埃希菌結(jié)果+- 產(chǎn)氣桿菌結(jié)果-+ （色氨酸酶） I-吲哚試驗(yàn)：色氨酸吲哚 與對(duì)二甲基氨基苯甲醛生成玫瑰吲哚（紅色） M-甲基紅試驗(yàn)：丙酮酸分解成酸類(lèi)物質(zhì) 使甲基紅指示劑變紅 V-VP試驗(yàn)：丙酮酸二乙酰 與含胍基的反應(yīng)生成紅色化合物 C-枸櫞酸試驗(yàn)：枸櫞酸鹽CO2碳酸鈉 使溴百里酚藍(lán)由淺綠變成深藍(lán)色糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)： 指示劑測(cè)試產(chǎn)酸情況，杜氏小管測(cè)試產(chǎn)氣情況微生物代謝調(diào)控酶的調(diào)控 酶活性的調(diào)節(jié)：

7、a.酶的激活-前體激活，小分子離子激活，補(bǔ)償激活 b.酶的抑制-競(jìng)爭(zhēng)性抑制，反饋抑制 酶合成的調(diào)節(jié)： （E.coli乳糖操縱子） a.酶的誘導(dǎo)：環(huán)境物質(zhì)祖師微生物合成酶。 順序誘導(dǎo)，同時(shí)誘導(dǎo) B.酶的阻遏：末端產(chǎn)物過(guò)量時(shí)，調(diào)節(jié)體系會(huì)阻止代謝途徑中關(guān)鍵酶的合成 末端代謝產(chǎn)物阻遏和分解代謝物阻遏（葡萄糖效應(yīng)）大腸桿菌乳糖操縱子： 調(diào)節(jié)基因 啟動(dòng)子 操縱子 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，CAP-cAMP復(fù)合物結(jié)合位點(diǎn)，這兩個(gè)位點(diǎn)都位于啟動(dòng)子上，當(dāng)CAP-cAMP復(fù)合物結(jié)合上了后，聚合酶才能結(jié)合在啟動(dòng)子上。 葡萄糖和乳糖同時(shí)存在時(shí)，分解葡萄糖的組成酶將葡萄糖分解為中間產(chǎn)物X，X會(huì)阻止ATP環(huán)化成cAMP，并且

8、促進(jìn)cAMP分解成AMP，使聚合酶不能結(jié)合到啟動(dòng)子上，阻止了與乳糖降解有關(guān)的誘導(dǎo)酶合成。 第七章 微生物的生長(zhǎng)與控制微生物生長(zhǎng)： 固體培養(yǎng)基 純培養(yǎng)的方法： 稀釋法（平板劃線法、平板涂布法），傾注平板法，單細(xì)胞分離法出，富集培養(yǎng)法 半固體培養(yǎng)基 無(wú)動(dòng)力細(xì)菌-沿穿刺線線形生長(zhǎng)，周?chē)囵B(yǎng)基透明澄清 有動(dòng)力細(xì)菌-沿穿刺線呈羽毛狀或云霧狀渾濁生長(zhǎng) 液體培養(yǎng)基 靜置培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)，發(fā)酵罐培養(yǎng) 用于觀察微生物的生長(zhǎng)狀況，檢測(cè)生化反應(yīng)和積累代謝微生物的培養(yǎng)方法： 分批培養(yǎng) 將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)生長(zhǎng)，最后一次收獲。 連續(xù)培養(yǎng) 在微生物的整個(gè)培養(yǎng)期間，通過(guò)一定的方式使微生物能以恒定的比生長(zhǎng)速

9、率生長(zhǎng)，并能 持續(xù)生長(zhǎng)下去的一種培養(yǎng)方法（使微生物生長(zhǎng)長(zhǎng)時(shí)間處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的穩(wěn)定狀態(tài)或達(dá)到 平衡生長(zhǎng)）。 基本原則-培養(yǎng)過(guò)程中不斷的補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和以同樣的速率移出培養(yǎng)物 恒濁培養(yǎng)（培養(yǎng)液濁度恒定）和恒化培養(yǎng)（營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定） 同步培養(yǎng) 使群體中不同步的細(xì)胞轉(zhuǎn)變成生長(zhǎng)發(fā)育在同一階段的方法 選擇法和誘導(dǎo)法微生物生長(zhǎng)測(cè)定 計(jì)數(shù)法： 顯微計(jì)數(shù)法（計(jì)數(shù)板）：不能區(qū)分死菌和活菌 比濁法：結(jié)果包括死菌和活菌；樣品中不能有雜質(zhì)，顏色不能太深 平板計(jì)數(shù)法：計(jì)數(shù)活菌菌落數(shù)，所需時(shí)間長(zhǎng)，且菌落可能由相鄰較近的菌 液體稀釋法：只有不能使用平板計(jì)數(shù)時(shí)使用 膜濾器法：測(cè)定空氣，水等量大且含菌濃度低的，通過(guò)微孔膜濾器 生

10、長(zhǎng)曲線： P233 少量菌種接種到一恒定容積的液體培養(yǎng)基中，提供最適培養(yǎng)條件培養(yǎng)，定時(shí)測(cè)定培養(yǎng) 液中的細(xì)胞數(shù)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫座標(biāo)，以細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱座標(biāo)作圖。 a.延滯期 (影響因素-菌種生理活性，培養(yǎng)基組分，接種量) 細(xì)胞需要合成分裂所需的酶、ATP和其他成分，為細(xì)胞分裂作準(zhǔn)備 b.對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 （影響因素-遺傳特性，培養(yǎng)條件和環(huán)境） 細(xì)胞代謝活動(dòng)旺盛，分裂速度最快、代時(shí)最短，細(xì)胞數(shù)以幾何級(jí)數(shù)的方式增加 c.穩(wěn)定期- 體系內(nèi)新生細(xì)胞數(shù)與死亡細(xì)胞數(shù)相等，活菌數(shù)達(dá)到最大值，產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物 d.衰退期- 菌體老化、生長(zhǎng)環(huán)境進(jìn)一步惡化 生長(zhǎng)曲線指導(dǎo)意義：使用合適的菌種、菌齡、接種量和培養(yǎng)條

11、件能盡量縮短延遲期，縮短生產(chǎn)周期滅菌工序應(yīng)控制在遲緩期，以保證制劑質(zhì)量及減少熱原質(zhì)污染對(duì)數(shù)期細(xì)菌廣泛用作生產(chǎn)種子和科研材料發(fā)酵工業(yè)上盡量延長(zhǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以達(dá)到較高的菌體密度在穩(wěn)定期采取補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、移去代謝產(chǎn)物等措施延長(zhǎng)該期，以收獲更多次級(jí)代謝產(chǎn)物芽胞于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期開(kāi)始形成、穩(wěn)定期大量形成、衰亡期釋放，有利于菌種保藏影響微生物生長(zhǎng)的因素 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，物理?xiàng)l件（溫度、pH、氧氣、水活度）微生物的控制（消毒與滅菌） 物理方法：熱力滅菌法 （殺滅包括芽孢的一切微生物） 干熱滅菌法-灼燒法（接種環(huán)，管口），焚燒法，干烤法（玻璃，瓷器，金屬工具） 濕熱滅菌法-巴氏消毒法（63下30min或72下30s）

12、，煮沸法（外科器械，食具， 注射器），流通蒸汽消毒法（外科器械，注射器），高壓蒸汽滅菌法， 間歇滅菌法（不耐高溫的培養(yǎng)基，如血清，卵黃），連續(xù)加壓滅菌 （發(fā)酵工廠培養(yǎng)基滅菌）紫外線與電離輻射 紫外線原理-核酸吸收峰在265nm，被照射時(shí)，DNA吸收紫外線，在鏈間或鏈內(nèi)相鄰 的胸腺嘧啶之間形成二聚體，改變分子構(gòu)型，影響DNA復(fù)制膜濾過(guò)除菌法-濾菌器其他方法-超聲波，滲透作用，沉積法，干燥法 化學(xué)方法：消毒劑，防腐劑-高錳酸鉀，硫酸銅，龍膽紫，過(guò)氧化氫，過(guò)氧乙酸，苯酚化學(xué)療劑-磺胺類(lèi)，抗生素 第八章 遺傳與變異質(zhì)粒的特性大多數(shù)為共價(jià)，閉合，環(huán)狀，雙鏈DNA（ccc dsDNA）自主復(fù)制（可游離也可

13、整合入染色體）具相容性和不相容性（干擾近緣質(zhì)粒）非細(xì)胞生長(zhǎng)所必需，賦予細(xì)胞某些特性，如抗藥性、致育性、重金屬抗性等質(zhì)?？勺孕邢Щ蛉斯を?qū)除轉(zhuǎn)移性，分接合型和非接合型幾種重要的質(zhì)粒：F因子-編碼細(xì)胞壁外的性纖毛，又稱(chēng)為致育因子R質(zhì)粒-即抗藥質(zhì)粒，分為接合型（抗藥決定簇和抗藥轉(zhuǎn)移因子組成）和非接合型Col質(zhì)粒編碼大腸菌素的質(zhì)粒，大腸菌素是蛋白質(zhì)類(lèi)的抗菌物質(zhì)轉(zhuǎn)座因子：細(xì)胞基因組能夠從一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另一位置的一段DNA序列，可移動(dòng)的遺傳因子。質(zhì)粒到染色體或者質(zhì)粒到質(zhì)粒等等基因突變生物基因組的核苷酸序列發(fā)生了可遺傳的變化，從而導(dǎo)致了生物性狀的改變。 營(yíng)養(yǎng)缺陷型某一野生型菌株經(jīng)基因突變后，其生長(zhǎng)需要某一營(yíng)

14、養(yǎng)物質(zhì)，在基本培養(yǎng)基中不能正常生長(zhǎng) 繁殖的突變類(lèi)型。 野生型菌株 從自然界分離到的，發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變前的，能夠在基本培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的原始菌株 Ames實(shí)驗(yàn) 使用鼠傷寒沙門(mén)氏菌組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，觀察待檢物能否使該種菌株發(fā)生回復(fù)突變而 檢測(cè)其誘變作用。 基因突變的特點(diǎn)： 自發(fā)性和不對(duì)應(yīng)性；稀少性；獨(dú)立性；穩(wěn)定性；可逆性（回復(fù)突變）回復(fù)突變：突變型菌株經(jīng)過(guò)二次突變，性狀變?yōu)樵吧途甑耐蛔儭?亞硝酸的誘變機(jī)制：使堿基發(fā)生氧化脫氨，結(jié)果是引起堿基對(duì)的替換腺嘌呤（A）次黃嘌呤（H），次黃嘌呤與胞嘧啶配對(duì)胞嘧啶（C）尿嘧啶（U），尿嘧啶與腺嘌呤配對(duì) 5-溴尿嘧啶（5-BU）誘變機(jī)制：5-溴尿嘧啶是胸

15、腺嘧啶的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，能夠取代T的位置當(dāng)5-BU以酮式狀態(tài)存在時(shí)，與A配對(duì)當(dāng)5-BU以烯醇式狀態(tài)存在時(shí)，與鳥(niǎo)嘌呤G配對(duì)，從而導(dǎo)致堿基對(duì)替換 UV紫外線誘變機(jī)制：主要為相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶T形成了胸腺嘧啶二聚體，阻礙其正常配對(duì)原核生物的基因重組 轉(zhuǎn)化，接合，轉(zhuǎn)導(dǎo)，原生質(zhì)體融合 轉(zhuǎn)化： 受體菌接受供體菌的DNA片段，從而獲得了新的遺傳性狀的現(xiàn)象轉(zhuǎn)化條件：供體DNA片段為雙鏈且大小適合，同源的，未變性的轉(zhuǎn)化率較高 受體菌處于感受態(tài)（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或人工誘導(dǎo)Ca2+，cAMP）轉(zhuǎn)化過(guò)程： DNA接合在受體菌上單鏈DNA攝取同源重組獲得轉(zhuǎn)化的細(xì)菌細(xì)菌轉(zhuǎn)化所用的DNA來(lái)源于病毒則稱(chēng)為轉(zhuǎn)染 接合： 供體與受體直接接

16、觸后，質(zhì)粒從供體細(xì)胞轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的過(guò)程。通過(guò)接合而獲得新 性狀的受體細(xì)胞稱(chēng)為接合子。 G-通過(guò)性菌毛完成接合，G+通過(guò)分泌類(lèi)似性激素的短肽刺激細(xì)胞接合 F因子的轉(zhuǎn)移及機(jī)制 F+菌株含有F因子且處于游離狀態(tài)；F-菌株不含有F因子，因此不具有性菌毛 Hfr菌株高頻重組菌株（F因子整合在染色體上） 與F-菌株接合時(shí)，Hfr菌株的染色體在F因子處發(fā)生斷裂，由環(huán)狀變?yōu)榫€狀，在轉(zhuǎn) 移過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生斷裂，處于末端的F因子基因進(jìn)入F-細(xì)菌的機(jī)會(huì)少，因此，大多 數(shù)情況下，轉(zhuǎn)以后的受體菌株仍然是F-菌株，極少數(shù)成為Hfr菌株。 F菌株 當(dāng)Hfr菌株內(nèi)的F因子不正常切離而脫離染色體基因組時(shí)，可重新形成游離的單攜

17、帶一小段染色體基因的特殊F因子，稱(chēng)為F因子，可使F-轉(zhuǎn)化為F菌株 轉(zhuǎn)導(dǎo)： 以噬菌體為媒介將供體細(xì)菌的基因?qū)胧荏w細(xì)菌的過(guò)程。 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)： 完全缺陷型噬菌體（由烈性噬菌體誤包而得）攜帶了供體菌基因組的任意部分片段， 感染受體菌時(shí)，使后者獲得了這部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入的DNA不進(jìn)行整合與復(fù)制，僅僅進(jìn)行表達(dá) 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)： 部分缺陷的溫和噬菌體將供體菌少數(shù)特定基因轉(zhuǎn)移到受體菌中的現(xiàn)象。 過(guò)程： 溫和噬菌體感染的受體菌經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)而裂解得到少量部分缺陷噬菌體和正常噬菌體。 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)：當(dāng)二者以低感染復(fù)數(shù)感染受體菌時(shí)，部分缺陷噬菌體感染的受體菌即為局 限轉(zhuǎn)導(dǎo)子。 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)：當(dāng)二者以高感染復(fù)數(shù)感

18、染受體菌時(shí)，會(huì)形成雙重溶原菌，裂解后可以得到 大量部分缺陷噬菌體，然后以這些噬菌體以低感染復(fù)數(shù)侵染受體菌，可得 到局限轉(zhuǎn)導(dǎo)子 第九章 微生物在藥學(xué)中的應(yīng)用抗生素是生物（包括微生物、植物和動(dòng)物）在生命活動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生的（或其他方法獲得），能在低微濃度下有選擇性地抑制或影響它種生物機(jī)能的有機(jī)物質(zhì)。 醫(yī)用抗生素的基本要求：較大的差異毒力 生物活性大并具有選擇性 不易產(chǎn)生抗藥性毒副作用小 血藥濃度高 不易引起超敏反應(yīng) 土壤中分離產(chǎn)抗生素細(xì)菌的一般方法：取樣無(wú)菌水稀釋涂布平板并培養(yǎng)挑取單菌落濾紙片法篩選培養(yǎng)觀察抑菌圈鑒定擴(kuò)培精制 抗生素的效價(jià)=檢品的抗菌活性/標(biāo)準(zhǔn)品的抗菌活性 重量單位：抗生素的生物活性部

19、位的重量 效價(jià)的基本測(cè)定方法：管碟法：比較標(biāo)準(zhǔn)品與檢品對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑菌圈的大小，以決定供試品效價(jià)的方法。在一定 濃度范圍內(nèi)，抗生素的對(duì)數(shù)濃度與抑菌圈直徑成正比。細(xì)菌抗藥性： 微生物或腫瘤細(xì)胞多次與藥物接觸發(fā)生敏感性降低的現(xiàn)象產(chǎn)生機(jī)制：遺傳學(xué)基因突變+藥物選擇作用；細(xì)菌間抗藥性的轉(zhuǎn)移生化產(chǎn)生使抗生素結(jié)構(gòu)改變的酶；抗生素作用靶點(diǎn)改變；細(xì)胞通透性改變藥物的體外抗菌實(shí)驗(yàn)：瓊脂擴(kuò)散法：濾紙片法，打孔法，管碟法，挖溝法連續(xù)稀釋法：液體稀釋法，斜面稀釋法，平板稀釋法無(wú)菌藥物的無(wú)菌檢查：方法：直接接種法，膜過(guò)濾法項(xiàng)目：需氧菌，厭氧菌，霉菌對(duì)照： 陰性對(duì)照：空白培養(yǎng)基+所用溶液，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌檢查 陽(yáng)性對(duì)照：培

20、養(yǎng)基+待檢藥品+陽(yáng)性對(duì)照菌，對(duì)藥物抑菌作用檢查 培養(yǎng)基靈敏度檢查：培養(yǎng)基+陽(yáng)性對(duì)照菌特殊樣品的與處理： 油類(lèi)藥物吐溫80培養(yǎng)基 抗菌藥物或含防腐劑加入滅活劑；將藥物稀釋到最低有效濃度以下； 微孔膜濾法非滅菌制劑的微生物檢查：項(xiàng)目：細(xì)菌30300/板 真菌550/板 質(zhì)控菌檢查 活螨0質(zhì)控菌： 口服藥大腸桿菌，沙門(mén)氏菌 外用藥，眼科制劑銅綠假單胞菌，金葡菌 深部組織，潰瘍藥破傷風(fēng)梭菌檢查方法： 預(yù)處理增菌培養(yǎng)分離，純培養(yǎng)菌落特征觀察鏡檢形態(tài)學(xué)檢查 生理生化反應(yīng)檢查，血清學(xué)反應(yīng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)判斷 第十章 免疫學(xué)基本概念抗原：抗原是能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)免疫產(chǎn)物發(fā)生特異性反應(yīng)的

21、物質(zhì) 兩個(gè)特征：免疫原性，免疫反應(yīng)性 半抗原：只具有免疫反應(yīng)性而不具有免疫原性的物質(zhì)（某些半抗原可以結(jié)合大分子成為抗原） 抗原決定簇：又稱(chēng)為表位 是Ag分子表面有一定空間構(gòu)象的特殊的化學(xué)基團(tuán)，（其性質(zhì)、數(shù)目、空間構(gòu)型） 決定抗原特異性。分類(lèi)：T表位被TCR識(shí)別，需要MHC分子呈遞 B表位被BCR識(shí)別，不需要MHC分子呈遞 交叉反應(yīng) 某些抗原不僅可與其特異性應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)，還可與其他抗原誘生的應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生反 應(yīng)，稱(chēng)為交叉反應(yīng)。 共同抗原： 若不同抗原含有相同或相似的抗原決定簇，則這樣的抗原稱(chēng)為共同抗原或交叉抗原。 異嗜性抗原與種屬特異性無(wú)關(guān)的，存在于人，動(dòng)物，植物，微生物間的共同抗原重要的抗原

22、： 1.胸腺依賴(lài)性抗原-TD抗原 需在APC（抗原呈遞細(xì)胞）及Th細(xì)胞（T淋巴細(xì)胞）的參與下，才能激活B細(xì)胞產(chǎn)生 抗體的抗原 特點(diǎn)：既有可被TCR識(shí)別的載體決定簇，也有可被BCR識(shí)別的半抗原決定簇 既可觸發(fā)細(xì)胞免疫，也可觸發(fā)體液免疫，且誘生各類(lèi)抗原 2.胸腺非依賴(lài)性抗原-TI抗原 刺激B細(xì)胞時(shí)不需要T細(xì)胞輔助的抗原，分為兩種TI-1Ag和TI-2Ag。 TI-1Ag，比如細(xì)菌的脂多糖，含有B細(xì)胞絲裂原和B細(xì)胞表位 TI-2Ag，比如莢膜多糖，多聚的鞭毛素等，由多個(gè)重復(fù)的B表位組成 特點(diǎn)：只能激活B細(xì)胞產(chǎn)生IgM類(lèi)抗體，只能誘導(dǎo)體液免疫，不能產(chǎn)生免疫記憶 3.超抗原 不需經(jīng)APC加工處理就可直接

23、與APC表面的MHC-分子及TCR的V區(qū)結(jié)合。 特點(diǎn)：只需極低濃度即可產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫應(yīng)答，如金葡菌的腸毒素，某些病毒蛋白佐劑：一種非特異性免疫增強(qiáng)劑，先于或與抗原同時(shí)注入機(jī)體后，能非特異性地增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答的類(lèi)型。 第十一章 免疫分子免疫球蛋白 概念：泛指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體類(lèi)似的球蛋白，分為分泌型和膜型 基本結(jié)構(gòu)，功能區(qū)： 免疫球蛋白的水解木瓜蛋白酶：鉸鏈區(qū)二硫鍵的近N端切斷重鏈。裂解為三個(gè)片段，其中兩個(gè)片段能夠單 價(jià)結(jié)合抗原，另一個(gè)片段不能結(jié)合抗原，在低溫下可結(jié)晶胃蛋白酶：鉸鏈區(qū)二硫鍵近C端切斷重鏈。裂解為兩個(gè)片段，大片段具有二價(jià)抗體活性 五類(lèi)免疫球蛋白：1

24、.IgG 多以單體形式存在，人體有1，2，3，4四個(gè)亞型，是血液中的主要抗體成分 功能： 抗感染的主要抗體，參與組織，粘膜層的抗感染免疫應(yīng)答 唯一能通過(guò)胎盤(pán)屏障的抗體 參與，型超敏反應(yīng) IgG在其Fc段與吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）相應(yīng)受體結(jié)合，發(fā)揮調(diào)理吞噬 和ADCC作用（抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用） 兩個(gè)或兩個(gè)以上的IgG分子同時(shí)結(jié)合在微生物表面能活化補(bǔ)體裂解靶細(xì)胞 2.IgM 分子量最大的免疫球蛋白，在細(xì)胞膜上為單體，在血清中為五聚體，又稱(chēng)為巨球蛋白。 不易通過(guò)細(xì)胞壁，主要存在于血液中。是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中最早合成和分泌的抗體。功能： 膜型IgM是組成BCR復(fù)合物的主要成分 天然

25、血型抗體為IgM 參與，型超敏反應(yīng) 3.IgA 血清型和分泌型兩種，血清型為單體分子，分泌型通過(guò)連接鏈（J鏈）連接成二聚體， 分泌型是人體分泌液（乳汁）和粘膜免疫中的主要抗體。 4.IgD 以單體形式存在，B細(xì)胞膜上的IgD是B細(xì)胞發(fā)育成熟的標(biāo)志 5.IgE 正常人血清中含量最少的。與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)的受體相結(jié)合，參與型 超敏反應(yīng) 單克隆抗體：由單一克隆B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，只識(shí)別一種抗原表位的具有高度特異性 （McAb） 的抗體 多克隆抗體：利用純化的抗原免疫動(dòng)物后，誘導(dǎo)動(dòng)物多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)該抗原多種抗 （PcAb） 原決定簇的抗體混合物 Ig產(chǎn)生規(guī)律： 1、Ag進(jìn)入機(jī)體后

26、刺激B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞，分泌Ig進(jìn)入體液； 2、初次免疫應(yīng)答，先產(chǎn)生IgM，隨后才出現(xiàn)IgG，Ab總量在血清中的滴度低，與Ag親和 力低，維持時(shí)間短； 3、再次免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的特異性Ab主要是IgG，潛伏期短且滴度高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，與Ag 親和力較高；（直接刺激Bm）補(bǔ)體系統(tǒng) 概念：補(bǔ)體（C）是存在于人或脊椎動(dòng)物血清與組織液中的一組與免疫相關(guān)，不耐熱并具有 酶活性，能協(xié)助抗體發(fā)揮溶細(xì)胞效應(yīng)的球蛋白。 組成：補(bǔ)體固有成分，補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，補(bǔ)體受體 命名： 補(bǔ)體的特點(diǎn)：血清中補(bǔ)體的含量相對(duì)穩(wěn)定，不因抗原的刺激而改變 絕大多數(shù)固有成分以酶原或非活化形式存在 成分為球蛋白，性質(zhì)不穩(wěn)定 非特異性，可以與

27、任何抗原-抗體復(fù)合物作用 補(bǔ)體的激活： 補(bǔ)體系統(tǒng)激活后的功能：補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解：在靶細(xì)胞膜上形成MAC，導(dǎo)致細(xì)胞裂解調(diào)理作用：補(bǔ)體激活過(guò)程中產(chǎn)生的C3b，C4b稱(chēng)為調(diào)理素，一端與靶細(xì)胞或免疫復(fù)合物 結(jié)合，另一端與帶有相應(yīng)受體的吞噬細(xì)胞結(jié)合，促進(jìn)其吞噬作用參與炎癥反應(yīng)：產(chǎn)生多種具有炎癥介質(zhì)作用的片段-C3a，C4a，C5a清除免疫復(fù)合物免疫調(diào)節(jié)作用：促進(jìn)抗原的呈遞，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分化和增殖細(xì)胞因子：主要由活化的免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞分泌的具有多種生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。白細(xì)胞介素，干擾素，腫瘤壞死因子，生長(zhǎng)因子免疫細(xì)胞膜分子 免疫細(xì)胞相互作用的物質(zhì)基礎(chǔ)是膜型免疫分子，參與抗原識(shí)別、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

28、、細(xì)胞活化等多種 效應(yīng)。免疫細(xì)胞膜分子有叫細(xì)胞表面標(biāo)志，包括受體（或配體）和抗原等。 主要組織相容性抗原： 在誘發(fā)移植排斥反應(yīng)中起主導(dǎo)作用的，可引起強(qiáng)而迅速的排斥反應(yīng)的抗原為主要組織相 容性抗原MHAS，又稱(chēng)為MHC分子。 人類(lèi)的MHAS稱(chēng)為HLA，編碼MHAS的基因群稱(chēng)為MHC，人類(lèi)的叫HLA復(fù)合體。 （位于第六號(hào)染色體短臂上）HLA的生物學(xué)功能： 參與抗原的加工與呈遞 約束免疫細(xì)胞間的相互作用-MHC限制性：TCR識(shí)別APC表面的復(fù)合抗原時(shí)，一般 要同時(shí)識(shí)別抗原肽和與抗原肽結(jié)合的HLA分子 參與對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答的遺傳控制 參與T細(xì)胞在胸腺的分化成熟及中樞性免疫耐受的建立 HLA兩種分子： 第

29、十二章 免疫器官與免疫細(xì)胞免疫器官 1.胸腺 T細(xì)胞分化和成熟的場(chǎng)所，建立自身耐受與維持免疫自穩(wěn) 2.骨髓 免疫細(xì)胞發(fā)生的場(chǎng)所，B細(xì)胞發(fā)育和分化的場(chǎng)所，再次體液免疫應(yīng)答的場(chǎng)所 3.淋巴結(jié)（外周） 成熟的T、B細(xì)胞定居的場(chǎng)所，免疫應(yīng)答發(fā)生的場(chǎng)所，參與淋巴細(xì)胞再循環(huán)， 濾過(guò)和凈化作用免疫細(xì)胞 抗原特異性淋巴細(xì)胞1.T淋巴細(xì)胞 分化和發(fā)育 TCR鏈表達(dá) CD8+單陽(yáng)性細(xì)胞 淋巴前體細(xì)胞雙陰性T細(xì)胞CD4+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞 （骨髓） （胸腺皮質(zhì)） （皮質(zhì)深處） CD4+單陽(yáng)性細(xì)胞 表面膜分子： T細(xì)胞抗原受體TCR特異性識(shí)別抗原并與之結(jié)合 CD4和CD8分別與MHC類(lèi)、類(lèi)分子的Ig區(qū)結(jié)合，增強(qiáng)TCR

30、與APC的親和力 CD3活化T細(xì)胞的第一信號(hào)，經(jīng)TCR特異識(shí)別后經(jīng)CD3傳入（CD3-TCR復(fù)合體） 協(xié)同刺激因子第二信號(hào)由T細(xì)胞協(xié)同刺激因子與靶細(xì)胞或APC結(jié)合產(chǎn)生 CD28，CD2-E玫瑰花環(huán)實(shí)驗(yàn) 其它有絲分裂原受體，MHC分子，細(xì)胞因子受體 亞型： 根據(jù)TCR種類(lèi)： T細(xì)胞， T細(xì)胞（主要） 免疫功能：Th細(xì)胞（效應(yīng)T細(xì)胞），CTL（細(xì)胞毒T細(xì)胞），Tr細(xì)胞（調(diào)節(jié)性） 生物學(xué)功能: 介導(dǎo)細(xì)胞免疫，輔助體液免疫，參與固有免疫，免疫調(diào)節(jié)作用2.B淋巴細(xì)胞 表面膜分子： B細(xì)胞抗原受體BCR膜結(jié)合型IgM，Ig/Ig（協(xié)助傳遞識(shí)別抗原的信號(hào)） CD19/CD21/CD81輔助受體 協(xié)同刺激分子

31、CD40，與Th細(xì)胞表面的協(xié)同刺激分子相互粘附提供第二信號(hào) 其它Fc受體（主要IgGFc受體），補(bǔ)體受體，MHC分子 亞群： B1（CD5+）細(xì)胞-識(shí)別TI抗原，無(wú)記憶性，參與固有免疫 B2（CD5-）細(xì)胞-識(shí)別TD抗原，執(zhí)行體液免疫功能 生物學(xué)功能： 介導(dǎo)體液免疫，抗原呈遞作用，參與固有免疫，免疫調(diào)節(jié)作用 抗原呈遞細(xì)胞（APC）1. 單核吞噬細(xì)胞 外周血中的單核細(xì)胞和組織中的巨噬細(xì)胞（最活躍的） 非特異性吞噬作用，抗原呈遞作用2. 樹(shù)突狀細(xì)胞（DC） 功能最強(qiáng)的APC，唯一能直接激活初始T細(xì)胞引發(fā)初次免疫的APC3. B淋巴細(xì)胞 將攝入的抗原加工成抗原肽-MHC類(lèi)分子復(fù)合物，提交給CD4+細(xì)

32、胞 B細(xì)胞能更有效地呈遞低濃度抗原 自然殺傷細(xì)胞NK 功能： 非特異直接殺傷靶細(xì)胞，作用廣譜，不需要抗原的激活，不需要抗體協(xié)助 殺傷的靶細(xì)胞主要是腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、較大的病原體(如真菌和寄生蟲(chóng))、同種 異體移植的器官等機(jī)制： 直接細(xì)胞毒效應(yīng)穿孔素-顆粒酶，NK細(xì)胞毒因子 ADCC效應(yīng)抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用 第十三章 免疫應(yīng)答非特異性免疫 屏障結(jié)構(gòu)：皮膚與粘膜屏障，血腦屏障，胎盤(pán)屏障 吞噬細(xì)胞吞噬功能 炎癥反應(yīng) 正常組織及體液中的抗菌物質(zhì)：補(bǔ)體、溶菌酶等特異性免疫 1.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答 CD4+細(xì)胞介導(dǎo)的： 識(shí)別階段： TD抗原被APC攝取加工，以抗原肽-MHC類(lèi)分子復(fù)合物的形式表達(dá)

33、在表面 CD4+T細(xì)胞接受第一信號(hào)：識(shí)別抗原肽，且CD4分子與MHC類(lèi)分子結(jié)合 活化、增殖階段 （B7） （CD28） CD4+T細(xì)胞接受第二信號(hào)：APC上的粘附因子和T細(xì)胞上的協(xié)同刺激分子結(jié)合 CD4+T細(xì)胞分化為效應(yīng)Th1細(xì)胞，長(zhǎng)壽記憶T細(xì)胞 發(fā)揮效應(yīng) 誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡；集聚并活化單核-巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞，發(fā)揮清除抗原作用 CD8+介導(dǎo)的: 識(shí)別階段： CD8+T細(xì)胞接受第一信號(hào)：CD8分子識(shí)別表達(dá)在病毒感染細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞表面的 抗原肽-MHC類(lèi)分子復(fù)合物 活化、增殖階段 CD8+T細(xì)胞接受第二信號(hào)：B7與CD28粘附 在Th1細(xì)胞的幫助下，CTL前體增殖分化為CTL（細(xì)胞毒T細(xì)胞），部分CD8+T細(xì)胞 分化為記憶細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng) CTL具有特異性直接殺傷抗原靶細(xì)胞的功能 2.B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答 TD抗原誘發(fā)識(shí)別階段： 第一信號(hào)的獲取：B細(xì)胞表面的BCR與抗原的抗原表位直接結(jié)合，通過(guò)Ig/Ig 傳入細(xì)胞內(nèi)活化、增殖階段： B細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞將抗原處理成抗原肽-MHC類(lèi)分子復(fù)合物表達(dá)在細(xì)胞膜 表面，使初始CD4+T細(xì)胞獲得第一信號(hào)，B細(xì)胞表達(dá)的B7與CD4