第四章 藥物定量分析與分析方法驗證

1、 藥物定量分析藥物定量分析 與分析方法驗證與分析方法驗證 基 本 要 求 熟悉含鹵素與含金屬藥物的結(jié)構(gòu)特點與前處理方法之間的關(guān)系 掌握有機破壞方法(氧瓶燃燒法、濕法破壞及干法破壞）的特點及應(yīng)用 掌握定量分析方法(容量分析、光譜分析及色譜分析）的特點及其應(yīng)用 熟悉藥品質(zhì)量標準分析方法的驗證 第一節(jié) 定量分析方法特點一、容量分析法 1.特點 容量分析法是藥物分析中最為常用的一種分析方法。其優(yōu)點是精密度好、準確度高、操作簡單快速，是原料藥含量測定的首選方法。 它的缺點是專屬性不強、靈敏度不高。 2.計算(1)滴定度(T)(2)滴定液濃度校正因素(F)(3)原料藥百分含量計算 A.直接滴定法 B.回滴

2、定法(剩余滴定法) 做空白試驗時的計算方法 不做空白試驗時的計算方法滴定度（滴定度（T）：指每）：指每1ml某摩爾濃度的某摩爾濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的重量。滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的重量。dDcCbBaA(mg/ml)MabCTB滴定度的計算滴定度的計算：被測藥物（被測藥物（B）與滴定液（）與滴定液（A）之間）之間按一定的摩爾比進行反應(yīng)：按一定的摩爾比進行反應(yīng)：原料藥含量測定結(jié)果的計算原料藥含量測定結(jié)果的計算A、直接滴定法 %100%WFTV含量V滴定時，供試品消耗滴定液的體積（ml） F濃度校正因子 例取苯巴比妥取苯巴比妥0.4045g，加入新制的，加入新制的碳酸鈉試液碳酸鈉試液16ml

3、使溶解，加丙酮使溶解，加丙酮12ml與水與水90ml，用硝酸銀滴定液，用硝酸銀滴定液（0.1025mol/L）滴定至終點，消）滴定至終點，消耗硝酸銀滴定液耗硝酸銀滴定液16.88 ml，求苯巴，求苯巴比妥的百分含量（每比妥的百分含量（每1ml0.1mol/L硝酸銀相當于硝酸銀相當于23.22mg的的C12H22N2O3）？（）？（99.3%） 例取鹽酸麻黃堿取鹽酸麻黃堿0.1532g0.1532g，精密稱定，精密稱定，加冰醋酸加冰醋酸10ml10ml溶解后，加醋酸汞試液溶解后，加醋酸汞試液2ml2ml與結(jié)晶紫指示液與結(jié)晶紫指示液1 1滴，用滴，用HClO4HClO4滴滴定至綠色，用去定至綠色，

4、用去0.1022mol/L0.1022mol/L的高氯的高氯酸滴定液酸滴定液7.50m17.50m1，空白試驗消耗高氯，空白試驗消耗高氯酸滴定液酸滴定液0.08ml0.08ml。已知每。已知每1ml1ml高氯酸高氯酸滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）當于）當于20.17mg20.17mg的的C10H15ONHClC10H15ONHCl。試計算鹽酸麻黃堿。試計算鹽酸麻黃堿的百分含量？（的百分含量？（99.8099.80）B、剩余滴定法 T滴定度，每1ml滴定液相當于被測組分的 mg 數(shù) V滴定時，供試品消耗滴定液的體積（ml） V0滴定時，空白消耗滴定液的體積（ml）F濃度校正因

5、子 w供試品的質(zhì)量 標準實測ccF %100)V%0WFTVb（含量司可巴比妥鈉的含量測定：司可巴比妥鈉的含量測定： 精密稱定本品精密稱定本品0.0992g，置，置250ml碘瓶碘瓶中，加水中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴，振搖使溶解，精密加溴滴定液（滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（鈉滴定液（ 0.1mol/L，F(xiàn)0.981）滴定，）滴定，消耗消耗1

6、4.76ml。另做空白試驗，消耗硫代。另做空白試驗，消耗硫代硫酸鈉滴定液硫酸鈉滴定液22.84ml。已知司可巴比妥。已知司可巴比妥鈉分子量為鈉分子量為260.23.，計算司可巴比妥鈉的，計算司可巴比妥鈉的百分含量？百分含量？I22Na2S2O32NaINa2S4O6+Br2（定量過量）CO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaCO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr22KI2KBrI2 1.紫外-可見分光光度法 （1）特點 靈敏度較高 準確度較好 儀器價格較低 應(yīng)用較廣泛（主要用于制劑的含量測定以及含量均勻度和溶出度的檢查）（2

7、）計算公式 定量依據(jù)：朗伯-比爾定律 A = ELCA適宜范圍0.30.7 含量測定方法： 對照品比較法（ 美國藥典多用該法） 吸收系數(shù)法（ 中國藥典多用該法） 計算分光光度法 (用于復(fù)雜及有干擾的多組分測定)2. 紫外分光光度法（1）吸收系數(shù)法 100)g/ml()g/100ml(1%1cm1%1cm%1cm1lEAclEAcclEA%100100%11WDlEAcm含量含量計算公式：含量計算公式：%1 . 0%1001 . 0100 . 25%1005SVCL對乙酰氨基酚的含量測定：取本品40mg，精密稱定，置250mg量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量

8、取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻，照分光光度法，在257nm的波長處測定吸收度為0.572，按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算，求其百分含量？（2）對照法 對供對供對供對供對供對供AAccccAAlcElcEAA%1cm1%1cm1含量計算公式：含量計算公式：%100%WDC供含量 3比色法比色法標準曲線法標準曲線法條件前提：固定儀器和測定CACKA樣樣同上條件固定條件查得測定樣品曲線分別測定配制標準系列過程：CAACA示例示例 蘆丁含量測定蘆丁含量測定mLmgmLmLmLmg250 . 32550/200. 0樣品標樣分別移取三、色譜分析法

9、色譜法由于其具有很強的分離能力，因而在藥物分析中占有越來越重要的地位。它主要用于制劑及復(fù)方制劑的含量測定，特別適合那些結(jié)構(gòu)類似，有相關(guān)雜質(zhì)或附加成分干擾或各組分之間互相干擾的品種，其中以高效液相色譜法應(yīng)用最為廣泛。1.分離原理 吸附色譜 分配色譜 離子交換色譜 排阻色譜吸附色譜 根據(jù)填充劑吸附活性對樣品的吸收系數(shù)不同而分離充填劑：硅膠分配色譜根據(jù)固定相與流動相的極性不同而分為 正相分配色譜和反相分配色譜兩者的區(qū)別如下圖所示： 固定相流動相正相分配極性非極性反相分配非極性極性分配色譜 充填劑：多孔聚合物離子交換色譜 是根據(jù)固定相的離子交換基和樣品成分中的離子性基進行交換來分離的 凝膠色譜 凝膠色

10、譜分離方法是利用分子振動效應(yīng)，根據(jù)樣品分子的大小而進行分離。所以又稱為排斥色譜 充填劑多采用：一定孔徑的多孔性聚合物 2.高效液相色譜系統(tǒng)條件(1) 固定相 常用的固定相有硅膠和化學鍵合相，首選十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）、辛基硅烷鍵合硅膠(C8)，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用。 （2）流動相 首選甲醇-水系統(tǒng)。 （3）檢測器 多用紫外檢測器，并應(yīng)注意考察溶劑的紫外吸收對待測組分吸收度的影響。 用內(nèi)標法定量時，內(nèi)標物質(zhì)應(yīng)選擇容易獲得并對測定方法不產(chǎn)生干擾的物質(zhì)。 3.色譜系統(tǒng)適用性試驗 色譜系統(tǒng)適用性試驗系指用規(guī)定的對照品或原料藥的精制品（純度99.5%）對儀器進行試驗和調(diào)整，應(yīng)達到規(guī)定的要求

11、；或在規(guī)定的分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子應(yīng)達到規(guī)定的要求。(1)色譜柱的理論板數(shù)（n） 在選定的色譜條件下，注入供試品溶液或規(guī)定的內(nèi)標物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標物質(zhì)峰的保留時間tR（以分鐘或長度計，下同，但應(yīng)取相同單位）和半峰高寬（Wh/2），按n=5.54n=5.54（t tR R/W/Wh/2h/2）2 2 計算色譜柱的理論板數(shù)。 如果測得理論板數(shù)低于規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱填充的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達到要求。 (2)分離度(R) 在定量分析時，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定

12、外，分離度應(yīng)大于1.5。 分離度（R）的計算公式見下式： 21122WWttRRR 分離度圖(3)重復(fù)性 取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%。 也可按各品種校正因子測定項下，制備相當于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標溶液，制成3種不同濃度的溶液，分別進樣3次，計算平均校正因子，其相對標準偏差也應(yīng)不大于2.0%。(4)拖尾因子(T) 為保證測量精度，特別是采用峰高法測量時，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子（T）是否符合規(guī)定，或不同濃度進樣的校正因子誤差是否符合要求。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05之間。 拖尾因子計算公式為：

13、式中，W0.05h為0.05峰高處的峰寬；d1為峰極大值至峰前沿之間的距離。 拖尾因子圖4.色譜定量分析方法 用色譜法定量分析時，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。測定主成分含量時，常采用以下兩種方法： (1)內(nèi)標法加校正因子測定供試 品中主成 分含量 按規(guī)定的方法，精密稱（量）取對照品和內(nèi)標物質(zhì)，分別制成溶液，精密量取各溶液，制成校正因子測定用的對照品溶液。量取一定量注入色譜儀，記錄色譜圖，測量對照品和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子： 校正因子（f）= 式中AS為內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高， AR為藥物對照品峰面積或峰高：CS為內(nèi)標物質(zhì)的濃度 ；CR為藥物對照品的濃度。 R

14、RSSCACA/ 再取含有內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算含量： 含量（CX）= f 式中，AX為供試品峰面積或峰高；CX為供試品的濃度 。SSXCAA/丙酸睪酮含量測定采用高效液相法：取本品丙酸睪酮含量測定采用高效液相法：取本品對照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成對照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成每每lmL中約含中約含1mg的溶液。精密量取該溶液的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標溶液（和內(nèi)標溶液（16mg/ml苯丙酸諾龍甲醇溶苯丙酸諾龍甲醇溶液）各液）各5ml，置，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖

15、勻，取刻度，搖勻，取10l注入液相色譜儀，記錄注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取本品適量，同法測定，內(nèi)標法色譜圖。另取本品適量，同法測定，內(nèi)標法計算含量。已知對照品溶液為計算含量。已知對照品溶液為1052mg/ml，樣品溶液為樣品溶液為1032mgmL，測得對照液中，測得對照液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為54678和和61258，樣品液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面，樣品液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為積分別為52213和和61228計算丙酸睪酮的含計算丙酸睪酮的含量量(2)外標法測定供試品中主成分含量 外標法可分為標準曲線法和外標一點法： 標準曲線法 取純物質(zhì)配制

16、成一系列不同濃度的標準溶液，分別取一定量注入色譜儀，測量峰面積或峰高，以峰面積或峰高對濃度作標準曲線。得回歸方程或回歸曲線。然后在同樣條件下，注入供試品溶液，測得待量組分的峰面積或峰高。根據(jù)標準曲線或回歸方程，計算出待測物的含量。 外標一點法 按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和供試品，分別制備對照品溶液和供試品溶液。分別精密取一定量，注入色譜儀，記錄色譜圖，測量對照品和供試品中待測成分的峰面積（或峰高），按下式計算含量： 含量（CX）= CR 式中， CX為供試品的濃度，AX為供試品的峰面積或峰高；CR為對照品的濃度，AR為對照品的峰面積或峰高。RXAA中國藥典規(guī)定紫外測定中，溶液的吸

17、收度應(yīng)控制在A、0.002.00范圍 B、0.31.0范圍 C0.20.8范圍 D0.11.0范圍 E0.30.7范圍 高效液相色譜法用于含量測定時，對系統(tǒng)性能的要求A 理論板數(shù)越高越好理論板數(shù)越高越好 B 依法測定相鄰兩峰分離度一般須依法測定相鄰兩峰分離度一般須1 C 柱長盡可能長柱長盡可能長 D 理論板數(shù)，分離度等須符合系統(tǒng)適理論板數(shù)，分離度等須符合系統(tǒng)適用性的各項要求，分離度一般須用性的各項要求，分離度一般須1.5 E 由于采用內(nèi)標法，對照品法，系統(tǒng)由于采用內(nèi)標法，對照品法，系統(tǒng)的性能無須嚴格要求的性能無須嚴格要求 第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法 一、分子結(jié)構(gòu)式特點與前處理關(guān)系 在分析

18、含鹵素或含金屬有機藥物時，通常要進行適當前處理，使鹵素或金屬元素轉(zhuǎn)變?yōu)檫m于分析的狀態(tài)。由于鹵素或金屬原子在藥物分子中的結(jié)合狀態(tài)不同，因而其預(yù)處理方法也不同。下面分別介紹；1、含鹵素有機藥物 含鹵素有機藥物是指分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，它不包括某些有機藥物的鹵酸或氫鹵酸鹽。 含鹵素有機藥物的分子結(jié)構(gòu)特點是所含鹵素原子結(jié)構(gòu)直接與碳原子相連，但不同藥物中鹵素所處的位置不同，則與碳原子結(jié)合的牢固程度就有差異。如果鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，則結(jié)合不牢固，如三氯叔丁醇等。如果鹵素直接與芳環(huán)相連，則結(jié)合牢固，如泛影酸等。 例如：三氯叔丁醇 (鹵素與脂肪鏈碳原子相連)H3CCCCl3OHCH

19、31/2H2O例如：泛 影 酸(鹵素與芳環(huán)碳原子相連)COOHINHCOCH3IIH3COCHN 2、含金屬有機藥物含金屬有機藥物分兩種類型： 一是金屬原子不直接與碳原子相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物，稱為含金屬的有機藥物。如酒石酸銻鉀等，其分子結(jié)構(gòu)特點是金屬原子結(jié)合不夠牢固，在水溶液中即可離解出金屬離子。 酒石酸銻鉀(含金屬的有機藥物)OCHCHCCOOOOOSbOCCHCHCOOOOOSb2K . 3H2O 二是金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢，稱為有機金屬藥物。 如卡巴胂等，在溶液中其金屬一般不能解離成離子狀態(tài)。 卡巴胂(有機金屬藥物)NHCONH2AsHOOHO

20、二、不經(jīng)有機破壞的分析方法 1.直接測定法 原理 本法適合于含金屬有機藥物或某些C-M鍵（金屬原子直接與碳原子相連）結(jié)合不牢固的有機金屬藥物。由于其結(jié)合不牢，在水溶液中可以電離，因而不需經(jīng)有機破壞，可直接測定。 示例 中國藥典（2010年版）富馬酸亞鐵的含量測定： OCCHOFeHCCOO 取本品約0.3g，精密稱定，加稀硫酸15ml，加熱溶解后，放冷，加新沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液2滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的硫酸鈰滴定液（0.1mol/L)相當于16.99mg的C4H2FeO4。 討論 本品在水中幾乎不溶，但能溶于熱稀礦酸

21、（如稀硫酸），同時分解釋放出亞鐵離子，可選用硫酸鈰滴定法。 加入的水應(yīng)為新沸過的冷水。 本法指示劑為鄰二氮菲，可與亞鐵離子形成紅色配位化合物，等當點后被氧化成淺藍色。 2.經(jīng)水解后測定 原理 本法是將含鹵素的有機藥物溶于適當溶劑（如乙醇）中，加氫氧化鈉溶液或硝酸銀溶液后，加熱回流使其水解，將有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后選用間接銀量法（Volhard法）進行測定。 示例(直接回流后測定) 中國藥典（2010年版）測定三氯叔丁醇的方法： 取本品約0.1g 精密稱定, 加乙醇5ml溶解后, 加20%氫氧化鈉溶液5ml, 加熱回流15min ,放冷至室溫, 加水20ml與硝酸5ml, 精密

22、加硝酸銀滴定液(0.1mol/L)30ml, 再加鄰苯二甲酸二丁酯5ml , 密塞，強力震搖后，加硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液（0.1mol/L）滴定,并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于6.216 mg的C4H7Cl3O 1/2H2O。 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3(1.5610 10 )(1.010 -12 )滴定反應(yīng)：(過量)(剩余) 討

23、論: 加入乙醇作溶劑 滴定應(yīng)在強的硝酸溶液（加入5ml濃HNO3） 中進行滴定，以防Fe3+水解。 加入鄰苯二甲酸二丁酯作凝聚劑，其目 的是包裹氯化銀沉淀，以防沉淀轉(zhuǎn)化。 指示劑為硫酸鐵銨指示液(佛爾哈德法)。 3.經(jīng)氧化還原后測定 當鹵素藥物與芳環(huán)相連時，由于鹵元素結(jié)合較牢，需在堿性條件下加鋅粉還原（堿性還原法）或在酸性條件下加鋅粉還原（酸性還原法），使其共價鍵斷裂，形成無機鹵化物，然后用銀量法測定其含量，如泛影酸、膽影酸等。利用游離金屬離子的氧化性測定其含量，如葡萄糖酸銻鈉、酒石酸銻鈉、枸櫞酸鐵銨等。 三、經(jīng)有機破壞的分析方法 該法適合于藥物結(jié)構(gòu)中金屬原子、鹵素與碳原子結(jié)合牢固者，當用其它

24、方法難以將其轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的金屬化合物及鹵素有機化合物時，可以采用本法進行有機破壞。有機破壞方法可分為: 1.濕法破壞 硝酸-高氯酸法 本法適合于血液、尿樣、組織等生物樣品的破壞。但對于含氮雜環(huán)類藥物，由于不易破壞完全，宜選用干法進行破壞。 本法的特點是破壞能力強，反應(yīng)比較激烈，破壞后所得的無機金屬離子一般為高價態(tài)。硝酸-硫酸法 本法適合于大多數(shù)有機藥物的破壞，但不適合于含堿土金屬的有機藥物。因為堿土金屬易與硫酸形成不溶性硫酸鹽，使被測金屬離子被沉淀吸附而造成結(jié)果偏低。 本法的特點是破壞后所得的無機金屬離子均為高價態(tài)。 硫酸-硫酸鹽法 本法多用于含砷或含銻的有機藥物的破壞分解，最后得到低價態(tài)的三價

25、砷或銻離子。破壞所用的硫酸鹽一般多采用硫酸鉀。加入硫酸鹽既可以提高硫酸的沸點使樣品破壞完全，又可以防止硫酸在加熱過程中過早分解為三氧化硫而損失。 本法的特點是破壞所得的金屬離子多為低價態(tài)。為保證在破壞低碳化合物時，金屬離子都能轉(zhuǎn)變?yōu)榈蛢r態(tài)，需添加適量的淀粉等多碳化合物。 2.干法破壞 干法破壞是指將樣品置入坩堝中先小心加熱使樣品炭化，然后高溫熾灼,使其灰化的一種有機破壞方法。 本法適合濕法不易破壞完全的或某些不能用硫酸破壞的有機藥物（如含氮雜環(huán)類）。對于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機藥物也不宜采用本法。 干法破壞時應(yīng)注意： 加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度在420以下，以防某些被測金屬化合物揮發(fā)。

26、破壞時應(yīng)灰化完全，否則影響測定結(jié)果的準確性。 經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，此時切勿棄去。 3.氧瓶燃燒法 （Oxygen Flask Combustion Method ) 氧瓶燃燒法是指將含有鹵素或含有硫、氮、硒等元素的有機藥物置于充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進行燃燒，并選用合適的吸收液吸收燃燒產(chǎn)生的各價態(tài)待測離子來進行分析的方法。 該法的特點是快速簡便，不需要特別的設(shè)備就可使樣品完全破壞，被各國藥典廣泛采用。 儀器裝置 燃燒瓶為磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶，瓶塞應(yīng)嚴密、空心,底部熔封鉑絲一根，鉑絲下端做成網(wǎng)狀或螺旋狀，如右圖所示： 樣品包裝 稱取固體樣品時，取適量研細，精密稱定，置于無灰濾紙中心

27、，按藥典附錄規(guī)定方法包好后測定。 稱取液體樣品時，將待測樣品滴在用透明膠紙和無灰濾紙做成的紙袋中，精密稱定其重量。 燃燒操作 將樣品固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處，在燃燒瓶中加入規(guī)定的吸收液，小心急速通入氧氣，隨即點火燃燒。待燃燒完畢后，充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中。 吸收液 吸收液可使樣品經(jīng)燃燒后所產(chǎn)生的元素定量地被吸收或使其轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ū阌跍y定的價態(tài)，以適應(yīng)所選擇的分析方法。 B. 吸收液的選擇吸收液的選擇氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液碘碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶

28、液硝酸溶液 注意事項 燃燒要完全（應(yīng)無黑色碎片） 測定氟化物時，應(yīng)選用石英燃燒瓶。 操作過程中，要注意安全（應(yīng)戴防護 面具）。 98：140. 氧瓶燃燒法中的裝置有A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C. 鉑絲D. 鐵絲E. 鋁絲96：133選擇氧瓶燃燒法所必備的實驗物品A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 鉑絲C. 普通濾紙D. 氫氣 E. 無灰濾紙99：76氧瓶燃燒法測定含氯有機藥物時所用的吸收液多數(shù)為A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼飽和液E. NaOH硫酸肼飽和液99：134. 氧瓶燃燒法可用于A. 含鹵素有機藥物的含量測定B. 醚類藥物的含量測

29、定C. 檢查甾體激素類藥物中的氟D. 檢查甾體激素類藥物中的硒E. 芳酸類藥物的含量測定 第三第三 節(jié)節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 藥品質(zhì)量標準分析方法藥品質(zhì)量標準分析方法驗證的目的驗證的目的是證明采用是證明采用的方法是否適合于相應(yīng)檢測要求。的方法是否適合于相應(yīng)檢測要求。 驗證的分析項目驗證的分析項目有：鑒別試驗、雜質(zhì)檢查、含有：鑒別試驗、雜質(zhì)檢查、含量測定以及藥品的溶出度、釋放度等。量測定以及藥品的溶出度、釋放度等。 驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容有：準確度、精密度（包括重復(fù)性、中有：準確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、間精密度和重現(xiàn)性）、專屬

30、性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。線性、范圍和耐用性。 一、準確度一、準確度 (accuracy) 準確度指用該方法測定的結(jié)果與準確度指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值相接近的程度，一般真實值或參考值相接近的程度，一般以回收率（以回收率（% %）表示。準確度應(yīng)在規(guī)定）表示。準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。的范圍內(nèi)建立。（一）含量測定方法的準確度（一）含量測定方法的準確度 1.原料藥的回收率計算法原料藥的回收率計算法 取已知純度的對照品或樣品取已知純度的對照品或樣品( (加入量加入量) )，按本法進行測定（實測值），或用本法按本法進行測定（實測值），或用本法測定的結(jié)果與已建立準確度的另一方法

31、測定的結(jié)果與已建立準確度的另一方法測定的結(jié)果進行比較測定的結(jié)果進行比較. .回收率回收率% = 實測值實測值 加入量加入量100%2.制劑的回收率計算法制劑的回收率計算法 （1）空白回收試驗）空白回收試驗 在在空白輔料空白輔料中加入中加入已知量的被測已知量的被測物物( (對照品對照品) )進行測定進行測定 ，同時還應(yīng)作，同時還應(yīng)作單獨輔料的空白測定。單獨輔料的空白測定。 （2）加樣回收試驗）加樣回收試驗 在已知準確被測物量（在已知準確被測物量（P P）的制劑樣）的制劑樣品中，加入已知量的被測物（品中，加入已知量的被測物（A A）進行）進行測定，得被測物的量測定，得被測物的量(M)(M)。 其計

32、算公式是：其計算公式是：回收率回收率% = M P A100%注意事項注意事項: : 1. 生物樣品生物樣品 及中藥制劑及中藥制劑大多數(shù)采用加樣回收率大多數(shù)采用加樣回收率試驗。還可與準確度可靠的其它方法進行比較，以試驗。還可與準確度可靠的其它方法進行比較，以確立本法的準確度。確立本法的準確度。 2. 回收率試驗中回收率試驗中,要求要求至少測定高、中、低三個至少測定高、中、低三個不同濃度的樣品不同濃度的樣品，每個濃度測定，每個濃度測定3次，共用次，共用9 次測定次測定數(shù)據(jù)進行評價。數(shù)據(jù)進行評價。 3. 回收率的回收率的RSDRSD通常要求在通常要求在2.0%2.0%以內(nèi)以內(nèi)，對測定方，對測定方法

33、復(fù)雜或待測成分含量較低的，可放寬到法復(fù)雜或待測成分含量較低的，可放寬到90%-110%90%-110%。 二、精密度（二、精密度（precision） 精密度系指在規(guī)定的測試條件下，精密度系指在規(guī)定的測試條件下，對同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定對同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定,所得結(jié)果之間的接近程度。所得結(jié)果之間的接近程度。 精密度一般以偏差精密度一般以偏差(d)，相對偏差，相對偏差（RD），標準偏差），標準偏差(SD)或相對標準或相對標準偏差偏差(RSD)表示。表示。1. 1.偏差偏差(deviation, d)相對偏差相對偏差(RD) = 偏差偏差 平均值平均值100% (2)相對偏差相對

34、偏差(relative deviation , RD ) (1)偏差偏差(d) = 測定值測定值 -平均值平均值 = Xi X 2.2.標準偏差標準偏差 （standard deviation, SD或或S）S =( Xi X ) 2 n 1 3. 3.相對標準偏差相對標準偏差( (或變異系數(shù)或變異系數(shù)) ) （relative standard deviation , RSD）RSD =標準偏差標準偏差平均值平均值100% =SX100%容量分析法的RSD一般不大于0.2 %；UV法的RSD一般不大于1 %；HPLC法的RSD一般不大于2 %。4. 4. 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下，由在相同

35、條件下，由一個分析人員一個分析人員測測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。 在規(guī)定范圍內(nèi)在規(guī)定范圍內(nèi) ，至少用至少用9 9次測定結(jié)次測定結(jié)果進行評價果進行評價 ，如制備，如制備3 3個不同濃度的個不同濃度的樣品，各測定樣品，各測定3 3次次 , ,或把被測物濃度當或把被測物濃度當作作100% 100% ，用至少測定，用至少測定6 6次的結(jié)果進行次的結(jié)果進行評價。評價。5. 5. 中間精密度中間精密度 在同一個實驗室，在同一個實驗室，不同時間不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備由不同分析人員用不同設(shè)備測定測定結(jié)果的精密度，稱為中間精密度。結(jié)果的精密度，稱為中間精密度。 用于考

36、察隨機變動因素對精用于考察隨機變動因素對精密度的影響密度的影響。變動因素為不同日變動因素為不同日期、不同分析人員和不同設(shè)備。期、不同分析人員和不同設(shè)備。6. 6. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 在在不同實驗室由不同分析人員不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度，稱為重現(xiàn)性。測定結(jié)果的精密度，稱為重現(xiàn)性。 用于用于建立法定標準時采用建立法定標準時采用，如，如建立藥典分析方法時，通過協(xié)同建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。不同分析方法對精密度的要求不同分析方法對精密度的要求: : 滴定法的滴定法的RSDRSD不得超過不得超過0.3%0.3%； 重量法的重量法的RSDRSD不得超過

37、不得超過0.5%0.5%； 氮測定法的氮測定法的RSDRSD不得超過不得超過1%1%； 儀器分析法的儀器分析法的RSDRSD不得超過不得超過3% 3% 。三、三、專屬性專屬性(specificity) 專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。的方法能準確測定出被測物的特性。 鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)７?，均?yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個方法予以補充。屬，應(yīng)采用多個方法予以補充。 應(yīng)能將可能共存的物

38、質(zhì)或應(yīng)能將可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分開來；結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分開來；不含被測組分的樣品以及結(jié)不含被測組分的樣品以及結(jié)構(gòu)相似的其他組分，均應(yīng)呈構(gòu)相似的其他組分，均應(yīng)呈負反應(yīng)負反應(yīng)。 鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng) 四、檢測限四、檢測限 （limit of detection ,LOD） 檢測限系指試樣中的被測物在規(guī)檢測限系指試樣中的被測物在規(guī)定的實驗條件下能被檢測出的最低濃定的實驗條件下能被檢測出的最低濃度或最低量。它無需定量測定，只要度或最低量。它無需定量測定，只要指出高于或低于規(guī)定的濃度或最低量指出高于或低于規(guī)定的濃度或最低量即可。即可。 1. 1.非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度的

39、被測物用已知濃度的被測物, ,試驗出能被可靠試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或最低量。地檢測出的最低濃度或最低量。 2.2.儀器分析時的測定法儀器分析時的測定法 (1) (1) 采用采用UVUV或或FLFL法時法時 一般以多次空白試驗的背景響應(yīng)值的標一般以多次空白試驗的背景響應(yīng)值的標準差乘以準差乘以3 3作為檢測限的估計值。應(yīng)用時，作為檢測限的估計值。應(yīng)用時，要使計算得到的要使計算得到的LODLOD值與實際測得的值與實際測得的LODLOD值值相一致，還需用校正系數(shù)進行校正。相一致，還需用校正系數(shù)進行校正。 (2) (2) 采用采用GCGC或或HPLCHPLC法時法時 用已知低濃度樣品測出的信號

40、與空用已知低濃度樣品測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比信噪比(S/N)(S/N)為為3 3 或或2 2 時相應(yīng)的濃度或時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量來確定檢測限。注入儀器的量來確定檢測限。五五.定量限定量限（limit of quantitation, LOQ） 定量限系指樣品中的被測物能被定量限系指樣品中的被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準確度與精密度的要求。雜質(zhì)和降合準確度與精密度的要求。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應(yīng)確解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應(yīng)確定定量限。定定量限。 定量限常用信噪比法確定，一般以定量限常用信噪比法確定，一般以信噪比（信噪比（S/NS/N）為）為10 10 時相應(yīng)的濃度或時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量來確定。注入儀器的量來確定。定量限與檢測限的不同點: 定量限規(guī)定的最低測得濃度應(yīng)該符合一定的精密度和準確度的要求。 確定定量限的方法也因所用方法不同而異。當用非儀器分析方法時，它與檢測限的確定方法相同；如用儀器分析方法時，則往往將多次空白試驗測