環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)教案

1、會計(jì)學(xué)1環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)第一頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。第1頁/共26頁第二頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。第2頁/共26頁第三頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。第3頁/共26頁第四頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計(jì)數(shù)光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的配置和滅菌培養(yǎng)基的配置和滅菌實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)第4頁/共26頁第五頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計(jì)光學(xué)顯微

2、鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計(jì)數(shù)數(shù)1、掌握光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)、原理，學(xué)習(xí)顯微鏡的操作方法和保養(yǎng)2、觀察細(xì)菌、真菌、原生動物的標(biāo)本裝片，學(xué)會繪制生物圖3、掌握使用測微尺測量微生物大小的方法4、了解血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)，掌握使用和計(jì)算方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康牡?頁/共26頁第六頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的構(gòu)造現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又常被稱為復(fù)式顯微鏡，由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。機(jī)械裝置包括鏡筒、轉(zhuǎn)換器、載物臺、鏡臂、鏡座、調(diào)節(jié)器：光學(xué)系統(tǒng)包括目鏡、物鏡、聚光器、電光源。顯微鏡的總放大倍數(shù)為目鏡和物鏡的放大倍數(shù)的乘積。第6頁/共26

3、頁第七頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。顯微鏡的顯微鏡的使用使用 1、低倍鏡觀察、低倍鏡觀察 將標(biāo)本波片用標(biāo)本夾夾住，移動到物鏡的正下方。下降10物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡簡，使標(biāo)本在視野中初步聚焦，再使用微調(diào)調(diào)節(jié)圖像清晰。移動標(biāo)本，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。2、高倍鏡觀察、高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其移至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器使物象清晰，移動標(biāo)本，仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。3、油鏡觀察、油鏡觀察 在標(biāo)本的蓋玻片上滴少量香柏油，將物鏡轉(zhuǎn)換到油鏡，從側(cè)面注視，用

4、粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心降下，使鏡頭侵入香柏油中。開足光圈，旋轉(zhuǎn)細(xì)調(diào)節(jié)器至標(biāo)本顯出，清晰為止。第7頁/共26頁第八頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。微生物大小的測量微生物大小的測量標(biāo)定目鏡測微尺標(biāo)定目鏡測微尺 裝在目鏡上的目測微尺中央刻有等分為100格或更多格的標(biāo)尺，使用前要用物測微尺標(biāo)定。物測微尺中央刻有1mm長的標(biāo)尺，等分為100格，10m格。將物測微尺的刻度朝上放在載物臺上，用低倍鏡找出物測微尺的刻度，移動物測微尺使其第一條線與目測微尺的第一條線重合，順著刻度線找出另一條重合線。算出低倍鏡下目測微尺每格的長度。換高倍鏡用同樣方法標(biāo)定出高倍鏡下目測微尺每格的長度。鏡臺測微尺及其中央部分的放大目鏡

5、測微尺校正目鏡測微尺第8頁/共26頁第九頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。微生物大小的測量微生物大小的測量微生物大小的測量微生物大小的測量 將物測微尺取下，換上標(biāo)本片，選擇適當(dāng)物鏡測量微生物的長度和寬度占目測微尺的格數(shù)，再按目測微尺1格的長度算出微生物的長度和寬度。10 10 1010 顫藻顫藻第9頁/共26頁第十頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌大腸桿菌大腸桿菌酵母菌酵母菌第10頁/共26頁第十一頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果完成下列任務(wù)并提交一份實(shí)驗(yàn)報告。1、繪制所觀察的一種或兩種微生物的形態(tài)，并測量其大小。2、將菌液濃度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表：計(jì)數(shù)次數(shù)每個中方

6、格菌數(shù)稀釋倍數(shù)原菌液濃度（個/ml）平均值（個/ml）第一次第二次第11頁/共26頁第十二頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的配置和滅菌培養(yǎng)基的配置和滅菌1、明確培養(yǎng)基配置的原理2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟3、掌握滅菌鍋的使用方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康牡?2頁/共26頁第十三頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)基本原理實(shí)驗(yàn)基本原理本次需要配制的培養(yǎng)基是為下次從土壤或活性污泥中分離細(xì)菌用的，所以選擇配制適合細(xì)菌生長的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。這是一種應(yīng)用最廣泛最普遍的細(xì)菌基本培養(yǎng)基，牛肉膏提供碳原和能源，蛋白胨主要提供氮源，NaCI提供無機(jī)鹽，用HCI和NaOH調(diào)節(jié)pH，還要加入

7、一定量的瓊脂最為凝固劑。瓊脂在大于96時融化，小于40時凝固，通常不被微生物利用。培養(yǎng)基配方如下：（調(diào)節(jié) ）牛肉膏蛋白胨NaCI瓊脂水5 g10 g5 g 25 g1000ml第13頁/共26頁第十四頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和步驟1.配制溶液：取一定容最的燒杯或搪瓷杯盛入適量蒸餾水，按培養(yǎng)基配方逐一稱取各種成分，依次加入水中溶解。牛肉膏、蛋白胨可加熱促進(jìn)溶解，待全部溶解后，加水補(bǔ)足所需容量。2.調(diào)節(jié)pH：用精密pH試紙測量培養(yǎng)基原始pH值。若偏酸，逐滴加入1molL的NaOH 溶液，邊加邊攪拌，隨時測pH值，直至達(dá)約。若偏堿，同法用1molL的HCI溶液調(diào)節(jié)。3

8、.分裝：將配制好的培養(yǎng)基裝入三角瓶和試管中，三角瓶裝量不要超過容積的1/2，試管裝量不要超過試管高度的1/3，約為5ml。5、加塞：分裝完畢后，在試管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入并保證良好的通氣性能。4. 加塞：分裝完畢后，在試管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入并保證良好的通氣性能。第14頁/共26頁第十五頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和步驟5. 包扎：加塞后，三角瓶外包一層牛皮紙或兩層舊報紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好：試管先用橡皮筋全部捆好，再在棉塞外包牛皮紙或舊報紙，防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。 6. 滅菌

9、：將包扎好的培養(yǎng)基放進(jìn)高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121，20min，高壓蒸汽滅菌。7. 擱置斜面：將滅菌的試管培蕎基冷卻至50左右，將試管口端擱在玻璃棒或其它合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。8. 無菌檢套：將滅菌的培養(yǎng)基放入37的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h，檢查滅菌是否徹底。第15頁/共26頁第十六頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。第16頁/共26頁第十七頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。第17頁/共26頁第十八頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)l、掌握梯度稀釋平板法分離純種微生物的原理、方法2、掌握

10、常規(guī)接種技術(shù)3、建立無菌操作意識實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康牡?8頁/共26頁第十九頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。實(shí)驗(yàn)基本原理實(shí)驗(yàn)基本原理土樣或活性污泥中含有的微生物數(shù)量很多，而且聚集在一起，經(jīng)過無菌水的梯度稀釋可以將微生物充分分散，成單個細(xì)胞，涂布到固體平板上，長成單菌落，一個單菌落對應(yīng)于原土樣（或活性污泥）中的一個微生物，乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)可以計(jì)算出土樣的微生物濃度；將單菌落進(jìn)一步劃線純化可分離到純種微生物。第19頁/共26頁第二十頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。（一）梯度稀釋平板法（一）梯度稀釋平板法1、 制備土壤（或活性污泥）稀釋液制備土壤（或活性污泥）稀釋液準(zhǔn)確稱取土樣10g或活性污泥10

11、ml，加入裝有90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩約20min，使土樣與水充分混勻，將細(xì)胞分散。用一支無菌吸管從中吸取1ml土壤或活性污泥懸液加入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸（深吸淺吹）3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液：再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1 ml移入裝有9ml無菌水的誠管中，也吹吸三次，即成10-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀釋菌液。第20頁/共26頁第二十一頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。（一）梯度稀釋平板法（一）梯度稀釋平板法 2、加菌、加菌將無菌平板編上10-4、10-5、10-6

12、號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-6稀釋液各1ml放入編號10-6的3個平板中，同法吸取10-5稀釋液各1ml放入編號10-5的3個平板中，再吸取10-4稀釋液各1rnl放入編號10-4的3個平板中（圖3-1）（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。3、倒平板、倒平板上述操作的同時，將培養(yǎng)基加熱融化，再冷卻到4050，傾注1015ml培養(yǎng)基入已含有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)（約23mm厚）。迅速蓋上皿蓋，平放在工作臺上，輕輕轉(zhuǎn)動，是培養(yǎng)基和稀釋的菌液充分混合均勻，冷卻后，即制成平板。4、培養(yǎng)、培養(yǎng)將培養(yǎng)皿倒置，放于30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2436h，觀察結(jié)果。第21頁/共26頁第二

13、十二頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。（二）平板劃線（二）平板劃線平板劃線的主要目的是長出單菌落，得到純培養(yǎng)。將融化的培養(yǎng)基無菌操作倒入無菌的空培養(yǎng)皿中。接種環(huán)在火焰上徹底殺菌并冷卻后，蘸取少量菌種，在平板表面輕輕地劃線（如圖），使得初始聚集在一起的細(xì)胞漸漸稀釋，最后有單個分散的細(xì)胞，長出單菌落，達(dá)到分離純化的目的。將劃好線的培養(yǎng)皿倒置于30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2436h，觀察結(jié)果。第22頁/共26頁第二十三頁，編輯于星期二：八點(diǎn) 五十八分。（三）斜面接種（三）斜面接種1、在待接種的斜面培養(yǎng)基的試管上部，貼上標(biāo)簽，寫上菌名、接種日期等。2、將一支斜面菌種和一支待接的斜面培養(yǎng)基放在左手上，拇指壓住兩只試管，中指位于兩只試管之間，斜面向上，管口齊平。3、右手先將棉塞擰松動，以便接種時拔出。右手拿接種環(huán)，將接種環(huán)可能進(jìn)入試管的部分在火焰上灼燒滅菌。4、在火焰旁，用右手小指、無名指和手掌央住棉塞將它拔出。試管口在火焰上微