分光光度法在職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)中的應(yīng)用20131028

1、紫外紫外-可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法在職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)中的應(yīng)用在職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)中的應(yīng)用姜素霞2013年10月u熟悉紫外可見(jiàn)分光光度法相關(guān)基本概念熟悉紫外可見(jiàn)分光光度法相關(guān)基本概念u熟悉紫外可見(jiàn)分光光度法的基本原理熟悉紫外可見(jiàn)分光光度法的基本原理u掌握紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的儀器組成、分掌握紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的儀器組成、分析測(cè)試條件選擇、分析方法及注意事項(xiàng)析測(cè)試條件選擇、分析方法及注意事項(xiàng)一一分光光度方法分類分光光度方法分類二二紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)分光光度原理及儀器構(gòu)成三三紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度法分析條件的選擇可見(jiàn)分光光度法分析條件的選擇四四紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用

2、可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用五五常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng) 光，或稱電磁輻射，具有兩重性質(zhì)：光，或稱電磁輻射，具有兩重性質(zhì)：（1 1）它是通過(guò)空間）它是通過(guò)空間傳播傳播的一種波的一種波, ,具有波動(dòng)性。具有波動(dòng)性。（2 2）它又是由粒子（光子）組成的，具有粒子性。）它又是由粒子（光子）組成的，具有粒子性。光子是非連續(xù)的（離散性的）光子是非連續(xù)的（離散性的）能束能束。 對(duì)包含大量數(shù)目的光子的行為，光的波動(dòng)性對(duì)包含大量數(shù)目的光子的行為，光的波動(dòng)性是主要的；當(dāng)對(duì)個(gè)別原子產(chǎn)生輻射效應(yīng)時(shí)，把光是主要的；當(dāng)對(duì)個(gè)別原子產(chǎn)生輻射效應(yīng)時(shí)，把光子作為能束是主要的。子作為能束是主要的。一一分光光度方法分類分光光度

3、方法分類光譜分區(qū)光譜分區(qū)(穿透穿透)能量能量 小小200nm400nm760nm 大大波波 長(zhǎng)長(zhǎng)光譜區(qū)域光譜區(qū)域紫外光區(qū)紫外光區(qū)可見(jiàn)光區(qū)可見(jiàn)光區(qū)紅外紅外50m分析方法分析方法 紫外分光光度法紫外分光光度法可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法紅外分光光度法紅外分光光度法紫、藍(lán)、青、綠、黃、橙、紅紫、藍(lán)、青、綠、黃、橙、紅一一分光光度方法分類分光光度方法分類紫外分光光度法紫外分光光度法紅外分光光度法紅外分光光度法分分光光光光度度吸光光度法吸光光度法發(fā)光光度法發(fā)光光度法可見(jiàn)光分光光度法可見(jiàn)光分光光度法熒光分光光度法熒光分光光度法一一分光光度方法分類分光光度方法分類 熒光分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì)既可用于定量既

4、可用于定量分析，也可用于測(cè)繪激發(fā)光譜分析，也可用于測(cè)繪激發(fā)光譜和熒光光譜。第一單色器選擇和熒光光譜。第一單色器選擇激發(fā)光波長(zhǎng)（激發(fā)光波長(zhǎng)（250nm250nm的紫外的紫外光），故稱為激發(fā)單色器。第光），故稱為激發(fā)單色器。第二單色器（熒光單色器）與激二單色器（熒光單色器）與激發(fā)光入射方向垂直，并選擇熒發(fā)光入射方向垂直，并選擇熒光波長(zhǎng)，可提高方法的選擇性光波長(zhǎng)，可提高方法的選擇性和準(zhǔn)確度和準(zhǔn)確度。一一分光光度方法分類分光光度方法分類熒光分光光度法熒光分光光度法靈敏度高靈敏度高 較紫外較紫外- -可見(jiàn)分光光度法高可見(jiàn)分光光度法高1-31-3個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。選擇性強(qiáng)選擇性強(qiáng) 能吸收光的物質(zhì)并不一定

5、能產(chǎn)生熒光，能吸收光的物質(zhì)并不一定能產(chǎn)生熒光，且不同物質(zhì)由于結(jié)構(gòu)不同，雖吸收同一波長(zhǎng)的光，且不同物質(zhì)由于結(jié)構(gòu)不同，雖吸收同一波長(zhǎng)的光，但產(chǎn)生的熒光波長(zhǎng)也不盡相同但產(chǎn)生的熒光波長(zhǎng)也不盡相同 。用樣量少、操作簡(jiǎn)便用樣量少、操作簡(jiǎn)便 缺點(diǎn)缺點(diǎn) : :許多物質(zhì)本身不會(huì)發(fā)射熒光許多物質(zhì)本身不會(huì)發(fā)射熒光 應(yīng)用不夠廣泛應(yīng)用不夠廣泛 受外界條件影響大鈹：桑色素?zé)晒夥止夤舛肉敚荷Ｉ責(zé)晒夥止夤舛?硒：二氨基萘熒光分光光度硒：二氨基萘熒光分光光度一一分光光度方法分類分光光度方法分類熒光分光光度法特點(diǎn)熒光分光光度法特點(diǎn) 物質(zhì)吸收紫外和可見(jiàn)光區(qū)電磁波而產(chǎn)物質(zhì)吸收紫外和可見(jiàn)光區(qū)電磁波而產(chǎn)生吸收光譜生吸收光譜紫外紫外-可

6、見(jiàn)吸收光譜。可見(jiàn)吸收光譜。波長(zhǎng)（波長(zhǎng)（200400）nm范圍稱為范圍稱為紫外紫外光區(qū)，光區(qū)，波長(zhǎng)（波長(zhǎng)（400760）nm稱為稱為可見(jiàn)可見(jiàn)光區(qū)。光區(qū)。 一一分光光度方法分類分光光度方法分類為什么可以為什么可以達(dá)到檢測(cè)的達(dá)到檢測(cè)的目的？目的？產(chǎn)生吸收光譜的原因產(chǎn)生吸收光譜的原因 分子具有不同的特征能級(jí)，當(dāng)分子從外界分子具有不同的特征能級(jí)，當(dāng)分子從外界吸收能量后，就會(huì)發(fā)生相應(yīng)的能級(jí)躍遷。同原吸收能量后，就會(huì)發(fā)生相應(yīng)的能級(jí)躍遷。同原子一樣，分子吸收能量具有量子化特征，記錄子一樣，分子吸收能量具有量子化特征，記錄分子對(duì)電磁輻射的吸收程度與波長(zhǎng)的關(guān)系就可分子對(duì)電磁輻射的吸收程度與波長(zhǎng)的關(guān)系就可以得到吸收

7、光譜。以得到吸收光譜。 一一分光光度方法分類分光光度方法分類 紫外紫外- -可見(jiàn)吸收光譜法是一種可見(jiàn)吸收光譜法是一種分子光譜分子光譜法。法。該法廣泛運(yùn)用于無(wú)機(jī)物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)定性和定量分析該法廣泛運(yùn)用于無(wú)機(jī)物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)定性和定量分析二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成分光光度法測(cè)量的理論依據(jù)：分光光度法測(cè)量的理論依據(jù)： 朗伯朗伯比爾（比爾（ Lambert -Beer）定律）定律 當(dāng)溶液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下，當(dāng)溶液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下，產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)。物質(zhì)對(duì)光的吸收是有產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)。物質(zhì)對(duì)光的吸收是有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都有其

8、各自的吸收選擇性的，各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。光譜。 ：比例常數(shù)，與吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)及溫度等有關(guān)。比例常數(shù)，與吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)及溫度等有關(guān)。 A：吸光度，表征物質(zhì)對(duì)光吸收程度的量。吸光度，表征物質(zhì)對(duì)光吸收程度的量。C：溶液濃度溶液濃度 ； I0：入射光強(qiáng)；：入射光強(qiáng)； It ：透射光強(qiáng)；：透射光強(qiáng)； b：液層厚度；：液層厚度； T ：透光率或透光度透光率或透光度朗伯朗伯-比爾定律表達(dá)式比爾定律表達(dá)式二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成bcTTIIAtlg1lglg0當(dāng)一束單色光穿過(guò)透明介質(zhì)時(shí)，光強(qiáng)度的降當(dāng)一束單色光穿過(guò)透明介質(zhì)

9、時(shí)，光強(qiáng)度的降低同吸收介質(zhì)的低同吸收介質(zhì)的厚度（或厚度（或光徑長(zhǎng)度光徑長(zhǎng)度）、）、溶液溶液的濃度的濃度成正比。成正比。I0Itbl溶液的透光率愈大，表示它對(duì)光的吸收愈小溶液的透光率愈大，表示它對(duì)光的吸收愈小l溶液的透光率愈小，表示它對(duì)光的吸收愈大溶液的透光率愈小，表示它對(duì)光的吸收愈大 0IITt二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)它是吸光物質(zhì)在它是吸光物質(zhì)在特定波長(zhǎng)特定波長(zhǎng)下的一個(gè)特征常數(shù)。下的一個(gè)特征常數(shù)。在在數(shù)值上等于數(shù)值上等于1molL-1吸光物質(zhì)在吸光物質(zhì)在1cm光程中光程中的吸光度。其單位為的吸光度。其單位為L(zhǎng) mol-1

10、 cm-1。由于。由于值值與入射光波長(zhǎng)有關(guān)，故表示與入射光波長(zhǎng)有關(guān)，故表示時(shí)，應(yīng)注明所用時(shí)，應(yīng)注明所用入射光波長(zhǎng)。入射光波長(zhǎng)。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成朗伯朗伯-比爾定律比爾定律 A=-lgT=bc 適用于適用于單色光、稀溶液?jiǎn)紊?、稀溶液回回顧顧在分析化學(xué)中，在分析化學(xué)中，值的大小反應(yīng)了吸光物值的大小反應(yīng)了吸光物質(zhì)對(duì)某一特定波長(zhǎng)光吸光能力大小。質(zhì)對(duì)某一特定波長(zhǎng)光吸光能力大小。值越值越大大，該吸光物質(zhì)的吸光能力越，該吸光物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)強(qiáng)。值是衡量光度分析方法靈敏度的重要指值是衡量光度分析方法靈敏度的重要指標(biāo)，標(biāo)，值越值越大大，方法的靈敏度越，

11、方法的靈敏度越高高 。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成回回顧顧五五個(gè)單元組成個(gè)單元組成二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成吸收池吸收池訊號(hào)處訊號(hào)處理和顯理和顯示器示器1. 1. 光源光源 在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。定性、較長(zhǎng)的使用壽命。鎢燈或鹵鎢燈鎢燈或鹵鎢燈可見(jiàn)光源可見(jiàn)光源 （3501000）nm氫燈或氘氫燈或氘燈燈 紫外光源紫外光源 （200360）nm二、紫外二、紫外-

12、-可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成2 2. .單色器單色器是是將將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光單色光并可從并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。包括。包括5 5部部分。分。 入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器； 準(zhǔn)光準(zhǔn)光裝置裝置( (準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直鏡) )：透鏡或返射鏡使入射透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；光成為平行光束； 色散色散元件（元件（分光鏡分光鏡）：）：將復(fù)合光分解成單將復(fù)合光分解成單色光色光；過(guò)濾、過(guò)濾、棱鏡棱鏡或光柵或光柵； 聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光聚焦裝置：透鏡或凹面

13、反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；后所得單色光聚焦至出射狹縫； 出射出射狹縫：射出單色光。狹縫：射出單色光。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成3. 3. 樣品樣品室室( (吸收池吸收池) ) 樣品室放置各種類型的吸收池樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池般用玻璃池。玻璃玻璃能能吸收紫外光吸收紫外光

14、，僅適用于，僅適用于可見(jiàn)可見(jiàn)光區(qū)光區(qū)石英石英不能吸收紫外光，適用于不能吸收紫外光，適用于紫外和可見(jiàn)紫外和可見(jiàn)光區(qū)光區(qū) 二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成4 4. . 檢測(cè)器檢測(cè)器 利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電池、光電管或光光電倍增管、二極管陣列檢測(cè)器電倍增管、二極管陣列檢測(cè)器。5. 5. 信號(hào)處理及顯示信號(hào)處理及顯示記錄系統(tǒng)記錄系統(tǒng) 即：記錄裝置。檢流計(jì)即：記錄裝置。檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果

15、處理等。處理等。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成分光光度計(jì)從入射光類型劃分分光光度計(jì)從入射光類型劃分分光光度計(jì)從入射光類型劃分分光光度計(jì)從入射光類型劃分分光光度計(jì)從入射光類型劃分分光光度計(jì)從入射光類型劃分單光束分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì) 簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光

16、光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成雙光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì) 經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光強(qiáng)度相等的兩束光，一，一束通過(guò)參比池，一束通過(guò)樣品池。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光束通過(guò)參比池，一束通過(guò)樣品池。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)。雙光束分光光度計(jì)一般吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)。雙光束分光光度計(jì)一般都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過(guò)參比都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過(guò)參比池和樣品池

17、，還池和樣品池，還能自動(dòng)消除光源能自動(dòng)消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響等因素的影響，特別適合于，特別適合于結(jié)構(gòu)分析結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì) 將不同波長(zhǎng)的兩束單色光將不同波長(zhǎng)的兩束單色光( (1 1、2 2) ) 快束交替快束交替通過(guò)通過(guò)同一吸收池同一吸收池而后到達(dá)檢而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。無(wú)需參比池?zé)o需參比池。 = =1 12 2nmnm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜數(shù)光譜。對(duì)于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景對(duì)于多組分混合物

18、、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長(zhǎng)分光光度法，往往能提高方法干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長(zhǎng)分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。的靈敏度和選擇性。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成紫外紫外與與可見(jiàn)分光光度計(jì)的不同可見(jiàn)分光光度計(jì)的不同首先光源不同，紫外用首先光源不同，紫外用氫燈或氘燈氫燈或氘燈，而可見(jiàn)用，而可見(jiàn)用鎢鎢燈，燈，因?yàn)槎甙l(fā)出的光的波長(zhǎng)范圍不同因?yàn)槎甙l(fā)出的光的波長(zhǎng)范圍不同 從單色器來(lái)說(shuō)，如果用棱鏡做單色器，則紫外必須從單色器來(lái)說(shuō)，如果用棱鏡做單色器，則紫外必須使用石英棱鏡，可

19、見(jiàn)則石英棱鏡或玻璃棱鏡均可使使用石英棱鏡，可見(jiàn)則石英棱鏡或玻璃棱鏡均可使用，而光柵則二者均可使用，這主要是由于玻璃能用，而光柵則二者均可使用，這主要是由于玻璃能吸收紫外光的緣故。吸收紫外光的緣故。從吸收池來(lái)看，紫外只能使用從吸收池來(lái)看，紫外只能使用石英石英吸收池，而可見(jiàn)吸收池，而可見(jiàn)則則玻璃、石英玻璃、石英均可使用。均可使用。 從檢測(cè)器來(lái)看，可見(jiàn)區(qū)一般使用氧化銫光電管，它從檢測(cè)器來(lái)看，可見(jiàn)區(qū)一般使用氧化銫光電管，它適用的波長(zhǎng)范圍為（適用的波長(zhǎng)范圍為（625-1000）nm，紫外用銻銫光，紫外用銻銫光電管，其波長(zhǎng)范圍為（電管，其波長(zhǎng)范圍為（200-625）nm. 二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光光

20、度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成n紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)主要部件包括光源、單紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)主要部件包括光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器、訊號(hào)處理和顯示器。色器、吸收池、檢測(cè)器、訊號(hào)處理和顯示器。n紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光源、比色皿不同紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光源、比色皿不同n雙光束分光光度計(jì)可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)雙光束分光光度計(jì)可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。分析。 n單色器通過(guò)使用單色器通過(guò)使用“濾光片、棱鏡、光柵、準(zhǔn)濾光片、棱鏡、光柵、準(zhǔn)直鏡等將復(fù)合光分成單色光。直鏡等將復(fù)合光分成單色光。二、紫外二、紫外- -可見(jiàn)吸光

21、光度原理及儀器構(gòu)成可見(jiàn)吸光光度原理及儀器構(gòu)成回回顧顧GBZ/T 210.4-2008職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定指南職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定指南 第第4部分部分:工作場(chǎng)所空氣中化學(xué)物質(zhì)測(cè)定方法工作場(chǎng)所空氣中化學(xué)物質(zhì)測(cè)定方法三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇1. 入射光波長(zhǎng)的選擇入射光波長(zhǎng)的選擇2. 吸光度讀數(shù)范圍的選擇吸光度讀數(shù)范圍的選擇3. 參比溶液參比溶液(空白溶液空白溶液)的選擇的選擇4. 顯色反應(yīng)條件的選擇顯色反應(yīng)條件的選擇5. 狹縫寬度的選擇狹縫寬度的選擇6.6. 溶液的酸度溶液的酸度7. 比色時(shí)間比色時(shí)間8. 顯色溫度顯色溫度9. 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的要求對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的要求10.對(duì)檢出限的

22、要求對(duì)檢出限的要求1、入射光波長(zhǎng)的選擇、入射光波長(zhǎng)的選擇maxAmax此處：靈敏度此處：靈敏度高高吸收曲線吸收曲線：吸光度隨波長(zhǎng)變化的曲線。：吸光度隨波長(zhǎng)變化的曲線。不同的物質(zhì)因其不同的物質(zhì)因其分子結(jié)構(gòu)分子結(jié)構(gòu)不同而具有不同不同而具有不同的吸的吸收曲線；收曲線；同一物質(zhì)同一物質(zhì)，濃度不同，其吸收曲線的形狀和，濃度不同，其吸收曲線的形狀和max的位置的位置不變不變，但在同一波長(zhǎng)下吸光度隨濃，但在同一波長(zhǎng)下吸光度隨濃度的增大而增大度的增大而增大。三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇 KMnO4溶液的吸收溶液的吸收曲線曲線 吸收曲線吸收曲線 以入射光波長(zhǎng)以入射光波長(zhǎng)作橫坐標(biāo)，用分

23、光光作橫坐標(biāo)，用分光光度計(jì)測(cè)量每一波長(zhǎng)下度計(jì)測(cè)量每一波長(zhǎng)下物質(zhì)對(duì)光的吸光度作物質(zhì)對(duì)光的吸光度作縱坐標(biāo)所繪制的曲線縱坐標(biāo)所繪制的曲線，稱為，稱為吸收曲線吸收曲線。其。其作用是：選擇入射光作用是：選擇入射光波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下測(cè)波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度，則分析的量吸光度，則分析的靈敏度最高。因此，靈敏度最高。因此，吸收曲線是吸光光度吸收曲線是吸光光度法中選擇測(cè)定波長(zhǎng)的法中選擇測(cè)定波長(zhǎng)的重要依據(jù)。重要依據(jù)。 三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇2、吸光度、吸光度讀數(shù)范圍的選擇讀數(shù)范圍的選擇A=0.20.8最適宜，誤差小最適宜，誤差小暗噪音暗噪音與檢測(cè)器與檢測(cè)器和放大電路不確切性和放

24、大電路不確切性有關(guān)，與光訊號(hào)無(wú)關(guān)有關(guān)，與光訊號(hào)無(wú)關(guān)訊號(hào)噪音訊號(hào)噪音與與光訊號(hào)有關(guān)光訊號(hào)有關(guān)儀器噪音儀器噪音(暗噪音、暗噪音、訊號(hào)噪音訊號(hào)噪音)三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇控制吸光度在合理范圍的方法控制吸光度在合理范圍的方法包括包括 ：控制溶液的濃度，如改變?cè)嚇拥姆Q量，或改控制溶液的濃度，如改變?cè)嚇拥姆Q量，或改變?nèi)芤旱南♂尪鹊?；變?nèi)芤旱南♂尪鹊龋贿x擇不同厚度的比色皿，以改變光程的長(zhǎng)度；選擇不同厚度的比色皿，以改變光程的長(zhǎng)度；采用示差法。采用示差法。三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇3、參比溶

25、液、參比溶液(空白溶液空白溶液)的選擇：的選擇：目的：目的： 采用采用空白對(duì)比消除因溶劑和容器空白對(duì)比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射的吸收、光的散射和界面和界面反射等反射等因素對(duì)透光率的干擾因素對(duì)透光率的干擾 （1）若）若僅僅待測(cè)物（待測(cè)物（M）與顯色劑（）與顯色劑（R）的反應(yīng)產(chǎn)物（）的反應(yīng)產(chǎn)物（MR）有吸收，可用）有吸收，可用蒸餾水蒸餾水作參比溶液。作參比溶液。 （2）若待測(cè)物（）若待測(cè)物（M）無(wú)吸收）無(wú)吸收 ，而顯色劑（，而顯色劑（R）或其）或其它試劑（它試劑（R）有吸收）有吸收 ，則用不加試樣的，則用不加試樣的空白溶液空白溶液作參比作參比溶液。溶液。 （3）若試樣中的其它組分有吸收（待

26、測(cè)物）若試樣中的其它組分有吸收（待測(cè)物M之外的之外的組分，如組分，如N），但不與顯色劑反應(yīng)：），但不與顯色劑反應(yīng)： 當(dāng)顯色劑無(wú)吸收時(shí)，可用當(dāng)顯色劑無(wú)吸收時(shí)，可用試樣溶液試樣溶液作參比溶液；作參比溶液； 當(dāng)顯色劑有吸收時(shí)，可在試液中加入適當(dāng)當(dāng)顯色劑有吸收時(shí)，可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑掩蔽劑將將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。 總之，總之，選擇參比溶液的原則是：應(yīng)使測(cè)得的試液的選擇參比溶液的原則是：應(yīng)使測(cè)得的試液的吸光度能真正反映吸光度能真正反映待測(cè)物待測(cè)物的濃度的濃度。 三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇參比溶液的選

27、擇方法參比溶液的選擇方法參比溶液的使用方法參比溶液的使用方法樣參調(diào)節(jié)光路光學(xué)性質(zhì)和厚度相同樣品池樣品溶液，參比池空白溶液樣品池參比池配制樣品的溶劑空白溶液ATA %1000三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)：將被測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的化學(xué)反應(yīng)：將被測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的化學(xué)反應(yīng)被測(cè)組分被測(cè)組分中間生成物中間生成物顯色劑顯色劑有色化合物有色化合物+試劑試劑顯色劑顯色劑有色化合物有色化合物+顯色劑：顯色劑：能與被測(cè)組分能與被測(cè)組分反應(yīng)生成反應(yīng)生成有色化合物的試劑有色化合物的試劑 4、顯、顯色色反應(yīng)條件的選擇反應(yīng)條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇三、分

28、光光度法分析條件的選擇Fe2+NOl 反應(yīng)生成物反應(yīng)生成物須在紫外須在紫外-可見(jiàn)光區(qū)有較強(qiáng)吸光能可見(jiàn)光區(qū)有較強(qiáng)吸光能力，即摩爾吸光系數(shù)較力，即摩爾吸光系數(shù)較大大。l反應(yīng)有較高的選擇性，即被測(cè)組分生成的化合反應(yīng)有較高的選擇性，即被測(cè)組分生成的化合物吸收曲線應(yīng)與共存物質(zhì)的吸收光譜有明顯的物吸收曲線應(yīng)與共存物質(zhì)的吸收光譜有明顯的差別。如差別。如顯色劑顯色劑（R）在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)吸收）在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)吸收 ，即即盡可能盡可能小小。l反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)足夠穩(wěn)定，反應(yīng)產(chǎn)物組成反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)足夠穩(wěn)定，反應(yīng)產(chǎn)物組成恒定恒定，以，以保證測(cè)量過(guò)程中溶液的吸光度保證測(cè)量過(guò)程中溶液的吸光度不變不變。顯色顯色反應(yīng)必須滿足的條件反應(yīng)必須

29、滿足的條件三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇5、狹縫寬度的選擇、狹縫寬度的選擇 以減少狹縫寬度時(shí)樣品的吸光以減少狹縫寬度時(shí)樣品的吸光度不再增加為準(zhǔn)，一般來(lái)說(shuō)，狹度不再增加為準(zhǔn)，一般來(lái)說(shuō)，狹縫寬度是樣品吸收峰半寬度的十縫寬度是樣品吸收峰半寬度的十分之一分之一。三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇 溶液的酸度對(duì)被測(cè)組分存在狀態(tài)的影響溶液的酸度對(duì)被測(cè)組分存在狀態(tài)的影響 （大多數(shù)被測(cè)金屬離子易水解，當(dāng)溶液 pH 增大時(shí)，可能生成各種類型的氫氧基配合物，甚至生成氫氧化物沉淀，使顯色反應(yīng)不能進(jìn)行完全。）6 6、溶液、溶液的酸度的酸度對(duì)顯色劑的平衡濃度和顏色的對(duì)顯色

30、劑的平衡濃度和顏色的影響影響（影響顯色反應(yīng)的完全程度）溶液酸度對(duì)有色化合物組成的影響溶液酸度對(duì)有色化合物組成的影響： （在不同 pH 的溶液中，顯色劑與待測(cè)離子形成的有色化合物的組成往往不同，其顏色也不同）三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇顯色反應(yīng)速率顯色反應(yīng)速率快：立即比色快：立即比色慢：溶液顏色穩(wěn)定后慢：溶液顏色穩(wěn)定后（鹽酸反應(yīng)（鹽酸反應(yīng)20分鐘）分鐘）7、比、比色時(shí)間色時(shí)間樣品或有色化樣品或有色化合物穩(wěn)定性合物穩(wěn)定性穩(wěn)定穩(wěn)定（SO2）不穩(wěn)定不穩(wěn)定（氮氧化物、（氮氧化物、氨等）氨等）三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇有色化合物的有色化合物的穩(wěn)定穩(wěn)

31、定（高溫分解）高溫分解）對(duì)光吸收的對(duì)光吸收的影響影響（標(biāo)樣和試樣的顯色溫度一致）標(biāo)樣和試樣的顯色溫度一致）顯色反應(yīng)需要一定的溫度（顯色反應(yīng)需要一定的溫度（P2S5）顯色反應(yīng)的進(jìn)行顯色反應(yīng)的進(jìn)行8、顯、顯色溫度色溫度三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)曲線：在在 （特定波長(zhǎng)特定波長(zhǎng)）、b固定的情況下，測(cè)定固定的情況下，測(cè)定一系列不同濃度一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，作溶液的吸光度，作Ac圖，在相同條件下測(cè)定圖，在相同條件下測(cè)定樣品溶液的吸光度，從樣品溶液的吸光度，從曲線上可查出被測(cè)樣品曲線上可查出被測(cè)樣品的濃度。的濃度。9、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的要求、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

32、的要求濃度（濃度（c c）A5 5個(gè)個(gè)濃度點(diǎn)濃度點(diǎn)線性范圍，線性范圍，相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù)三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇0.5倍倍2倍倍容許濃度容許濃度濃度濃度 c c 正偏離正偏離負(fù)偏離負(fù)偏離吸光度吸光度曲線偏離的情況曲線偏離的情況 依據(jù)依據(jù)BeerBeer定律，定律，A A與與C C關(guān)系關(guān)系應(yīng)為經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的直線應(yīng)為經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的直線 偏離偏離BeerBeer定律的主要因素定律的主要因素表現(xiàn)為表現(xiàn)為 （一）（一）光學(xué)因素光學(xué)因素 （二）（二）化學(xué)因素化學(xué)因素 三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇 非單色光的影響：非單色光的影響： Beer定律應(yīng)用的重要前提

33、定律應(yīng)用的重要前提入射光為入射光為單色光單色光 三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇 Beer定律適用的另一個(gè)前提：定律適用的另一個(gè)前提：稀溶液稀溶液 濃度濃度過(guò)高和化學(xué)變化會(huì)過(guò)高和化學(xué)變化會(huì)使使C與與A關(guān)系偏離關(guān)系偏離定律定律三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇溶液濃度溶液濃度過(guò)高引起的偏離過(guò)高引起的偏離 若吸光物質(zhì)溶液的濃度較高時(shí)，吸光粒子之間的相互作用較強(qiáng)，改變了吸光粒子對(duì)光的吸收能力，使溶液的吸光度與溶液濃度之間的線性關(guān)系發(fā)生了偏離?；瘜W(xué)變化所引起的偏離化學(xué)變化所引起的偏離( (溶質(zhì)和溶劑的作用溶質(zhì)和溶劑的作用) ) 溶液中吸光物質(zhì)常因解離、締合

34、、形成新的化合物或在光照射下發(fā)生互變異構(gòu)等，從而破壞了平衡濃度與分析濃度之間的正比關(guān)系，也就破壞了吸光度A與分析濃度之間的線性關(guān)系。產(chǎn)生對(duì)朗伯-比爾定律的偏離。三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇介質(zhì)不均勻性介質(zhì)不均勻性如果被測(cè)試液不均勻，是膠體溶液、乳濁液或懸浮液，則入射光通過(guò)溶液后，除了一部分被試液吸收，還會(huì)有反射、散射使光損失，導(dǎo)致透光率減小，使透射比減小，使實(shí)際測(cè)量吸光度增大，使標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向吸光度軸彎曲，造成對(duì)朗伯-比爾定律的偏離。（加入適量的表面活性劑等來(lái)改善溶質(zhì)的均勻度）三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇10、對(duì)檢出限的要求、對(duì)檢出限

35、的要求重復(fù)多次重復(fù)多次(至少至少6次次)測(cè)定的試劑空白吸光度測(cè)定的試劑空白吸光度的的3倍倍標(biāo)準(zhǔn)差處對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度或標(biāo)準(zhǔn)差處對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度或含量。含量。吸光度吸光度0.02處對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度或處對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度或含量。含量。1)(12nxxsniiS:S:標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)準(zhǔn)差 x xi i: :測(cè)定測(cè)定值值 n:n:測(cè)定值測(cè)定值個(gè)數(shù)個(gè)數(shù)在相同條件下多次檢測(cè)結(jié)果之間的接近程度，稱為重復(fù)性在相同條件下多次檢測(cè)結(jié)果之間的接近程度，稱為重復(fù)性氯氣三、分光光度法分析條件的選擇三、分光光度法分析條件的選擇1. 入射光波長(zhǎng)的選擇入射光波長(zhǎng)的選擇2. 吸光度讀數(shù)范圍的選擇吸光度讀數(shù)范圍的選擇3. 參比溶液參比溶液(

36、空白溶液空白溶液)的選擇的選擇4. 顯色反應(yīng)條件的選擇顯色反應(yīng)條件的選擇5. 狹縫寬度的選擇狹縫寬度的選擇6.6. 溶液的酸度溶液的酸度7. 比色時(shí)間比色時(shí)間8. 顯色溫度顯色溫度9. 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的要求對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的要求10.對(duì)檢出限的要求對(duì)檢出限的要求回回顧顧靈敏度較高靈敏度較高：試樣中：試樣中1%-0.001%微量成分微量成分準(zhǔn)確度較高：相對(duì)誤差準(zhǔn)確度較高：相對(duì)誤差2%-5%適用于幾乎適用于幾乎所有的無(wú)機(jī)所有的無(wú)機(jī)離子和許多離子和許多有機(jī)化有機(jī)化合物合物操作簡(jiǎn)便、快速、儀器價(jià)格適中、用途操作簡(jiǎn)便、快速、儀器價(jià)格適中、用途廣廣分光光度法特點(diǎn)分光光度法特點(diǎn)四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)

37、用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 除主要可用于物質(zhì)的定量分析外，還可以除主要可用于物質(zhì)的定量分析外，還可以用于物質(zhì)的定性分析、純度鑒定、結(jié)構(gòu)分析。用于物質(zhì)的定性分析、純度鑒定、結(jié)構(gòu)分析。 1.定性分析定性分析 每一種化合物都有自己的特征光譜。測(cè)出每一種化合物都有自己的特征光譜。測(cè)出未知物的吸收光譜，原則上可以對(duì)該未知物作未知物的吸收光譜，原則上可以對(duì)該未知物作出定性鑒定，但對(duì)復(fù)雜化合物的定性分析有一出定性鑒定，但對(duì)復(fù)雜化合物的定性分析有一定的困難。定的困難。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用2.純度的鑒定純度的鑒定 用紫外吸收光譜確定試樣的純度是比較方便的。用紫外吸收光譜確定

38、試樣的純度是比較方便的。 如蛋白質(zhì)與核酸的純度分析中，可用如蛋白質(zhì)與核酸的純度分析中，可用A280/A260的的比值，鑒定其純度。比值，鑒定其純度。 3.結(jié)構(gòu)分析結(jié)構(gòu)分析 紫外紫外-可見(jiàn)吸收光譜一般不用于化合物的結(jié)構(gòu)可見(jiàn)吸收光譜一般不用于化合物的結(jié)構(gòu)分析，但利用紫外吸收光譜鑒定化合物中的共軛結(jié)分析，但利用紫外吸收光譜鑒定化合物中的共軛結(jié)構(gòu)和芳環(huán)結(jié)構(gòu)還是有一定價(jià)值。構(gòu)和芳環(huán)結(jié)構(gòu)還是有一定價(jià)值。例如，某化合物在近紫外區(qū)內(nèi)無(wú)吸收，說(shuō)明該物質(zhì)例如，某化合物在近紫外區(qū)內(nèi)無(wú)吸收，說(shuō)明該物質(zhì)無(wú)共軛結(jié)構(gòu)和芳香結(jié)構(gòu)。無(wú)共軛結(jié)構(gòu)和芳香結(jié)構(gòu)。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用目視比色法目

39、視比色法標(biāo)準(zhǔn)系列標(biāo)準(zhǔn)系列待測(cè)樣品待測(cè)樣品操作簡(jiǎn)單方便操作簡(jiǎn)單方便主觀誤差較大主觀誤差較大不能排除其它有色物質(zhì)干擾不能排除其它有色物質(zhì)干擾視線視線四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用消除輕度色盲、眼睛疲勞消除輕度色盲、眼睛疲勞等造成的主觀誤差，提高分等造成的主觀誤差，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度析結(jié)果的準(zhǔn)確度通過(guò)選擇濾光片和參比溶通過(guò)選擇濾光片和參比溶液消除共存的其它有色物質(zhì)液消除共存的其它有色物質(zhì)使用標(biāo)準(zhǔn)曲線，分析大批使用標(biāo)準(zhǔn)曲線，分析大批試樣時(shí)，簡(jiǎn)化手續(xù)，加快分試樣時(shí)，簡(jiǎn)化手續(xù)，加快分析速度析速度與目視比色法相比與目視比色法相比測(cè)標(biāo)測(cè)標(biāo)ccAA標(biāo)標(biāo)測(cè)測(cè)CcAA四、紫外四、紫

40、外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用標(biāo)標(biāo)bcA測(cè)測(cè)bcA有有毒毒物物質(zhì)質(zhì)金屬金屬元素單元素單質(zhì)及化合物質(zhì)及化合物非金屬非金屬元素單元素單質(zhì)及化合物質(zhì)及化合物有機(jī)有機(jī)化合物化合物（聯(lián)苯、苯酚等（聯(lián)苯、苯酚等20多種物質(zhì)）多種物質(zhì)）（堿金屬、堿土金屬（堿金屬、堿土金屬鎘鉍銻鎳鉈鈷銅等元素鎘鉍銻鎳鉈鈷銅等元素除外，大約一半左右）除外，大約一半左右）（碳碲氟等元素除外）（碳碲氟等元素除外）吸收液吸收液 分分光光度光光度濾膜濾膜原子原子吸收吸收吸附劑吸附劑管管色色譜譜四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用無(wú)機(jī)無(wú)機(jī)化合物化合物（N、S、P） 可見(jiàn)分光光度計(jì)四、紫外四、紫

41、外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用NO2NONO+NO2NO2采樣泵采樣泵采樣泵采樣泵采樣方法1采樣方法2一氧化氮和二氧化氮的鹽酸萘乙二胺分光光度法一氧化氮和二氧化氮的鹽酸萘乙二胺分光光度法GBZ/T160.29-2004四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用采樣器流采樣器流量量程的量量程的選擇選擇式式中：中：C 空氣中氧化氮的濃度，空氣中氧化氮的濃度，mg/m3； m 測(cè)得樣品溶液中氧化氮的含量，測(cè)得樣品溶液中氧化氮的含量，g； 1.32 由氣態(tài)氧化氮換算成液態(tài)氧化氮的系

42、數(shù)；由氣態(tài)氧化氮換算成液態(tài)氧化氮的系數(shù)； Vo 標(biāo)準(zhǔn)采樣體積，標(biāo)準(zhǔn)采樣體積，L。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用32. 10VmC 吸收液應(yīng)避光保存，吸收管在采樣、運(yùn)送吸收液應(yīng)避光保存，吸收管在采樣、運(yùn)送和存放過(guò)程中，都應(yīng)采取避光措施。和存放過(guò)程中，都應(yīng)采取避光措施。 消除臭氧二氧化硫等的干擾消除臭氧二氧化硫等的干擾 應(yīng)及時(shí)更換氧化管應(yīng)及時(shí)更換氧化管 計(jì)算問(wèn)題計(jì)算問(wèn)題四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 采樣后應(yīng)盡快測(cè)量樣品的吸光度，若不采樣后應(yīng)盡快測(cè)量樣品的吸光度，若不能及時(shí)分析，應(yīng)將樣品于低溫暗處存放能及時(shí)分析，應(yīng)將樣品于低溫暗處存放

43、 樣品于樣品于30暗處存放，可穩(wěn)定暗處存放，可穩(wěn)定8h； 20暗處存放，可穩(wěn)定暗處存放，可穩(wěn)定24h； 于于04冷藏，至少可穩(wěn)定冷藏，至少可穩(wěn)定3d。 氣溫超過(guò)氣溫超過(guò)25時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸及存放樣品時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸及存放樣品應(yīng)采取降溫措施。應(yīng)采取降溫措施。 四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 三氧化鉻三氧化鉻-石英砂氧化管適合在空氣相石英砂氧化管適合在空氣相對(duì)濕度對(duì)濕度30%70時(shí)使用，空氣相對(duì)濕時(shí)使用，空氣相對(duì)濕度大于度大于70%時(shí)，應(yīng)勤換氧化管，以免氧時(shí)，應(yīng)勤換氧化管，以免氧化管因吸濕引起板結(jié)；當(dāng)空氣相對(duì)濕度化管因吸濕引起板結(jié)；當(dāng)空氣相對(duì)濕度小于小于30%時(shí)，氧化效

44、率降低，使用前應(yīng)時(shí)，氧化效率降低，使用前應(yīng)將氧化管放在水面上方的潮濕空氣中平將氧化管放在水面上方的潮濕空氣中平衡衡1h；當(dāng)氧化管變?yōu)榫G色時(shí)，應(yīng)及時(shí)更；當(dāng)氧化管變?yōu)榫G色時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換。換。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 氨的納氏試劑比色法氨的納氏試劑比色法GB/T160.29-2004GB/T160.29-2004 主要問(wèn)題：在樣品和標(biāo)準(zhǔn)系列中易出現(xiàn)紅棕色或者主要問(wèn)題：在樣品和標(biāo)準(zhǔn)系列中易出現(xiàn)紅棕色或者黃色沉淀黃色沉淀 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：NH3與與NH4+ 加入酒石酸鉀鈉溶液或加入酒石酸鉀鈉溶液或EDTAEDTA掩蔽掩蔽 CaCa2+2+，MgMg2+2+，F(xiàn)e

45、Fe3+ 3+ 等等 溶液顯色的溶液顯色的pH pH 適宜范圍為適宜范圍為11.8-12.411.8-12.4 錯(cuò)誤更正：錯(cuò)誤更正：GBZ/T160.29-2004GBZ/T160.29-2004中，中，“將將26.6mL26.6mL硫酸硫酸緩緩加入到緩緩加入到1000mL1000mL水中水中”應(yīng)為應(yīng)為“2.66mL2.66mL. . ” ”四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 氰化氫和氰化物的菸酸鈉氰化氫和氰化物的菸酸鈉巴比妥酸鈉分光光度法巴比妥酸鈉分光光度法GBZ/T160.29-2004GBZ/T160.29-2004 錯(cuò)誤更正：錯(cuò)誤更正：“吸收液：氫氧化鈉溶液

46、吸收液：氫氧化鈉溶液(40g/L)(40g/L)”應(yīng)為應(yīng)為“4.0g/L4.0g/L ” ”，也有報(bào)道用，也有報(bào)道用5.0g/L5.0g/L。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用磷酸的鉬酸銨分光光度法磷酸的鉬酸銨分光光度法GBZ/T160.30-2004 標(biāo)準(zhǔn)系列沒(méi)有梯度變化，標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品的吸光度均標(biāo)準(zhǔn)系列沒(méi)有梯度變化，標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品的吸光度均大于大于1; 空白不穩(wěn)定空白不穩(wěn)定; 溶液有時(shí)顯藍(lán)色，有時(shí)顯黃色。溶液有時(shí)顯藍(lán)色，有時(shí)顯黃色。 改進(jìn)：還原劑，酸度，試劑濃度，吸收波長(zhǎng)改進(jìn)：還原劑，酸度，試劑濃度，吸收波長(zhǎng)錯(cuò)誤更正：錯(cuò)誤更正： “14.4mL硫酸慢慢注入水中硫

47、酸慢慢注入水中”， 應(yīng)為應(yīng)為“55.6mL”.四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用三氯化磷的鉬酸銨分光光度法三氯化磷的鉬酸銨分光光度法GBZ/T160.30-2004 三氯化磷用吸收液采集，生成的磷酸與三氯化磷用吸收液采集，生成的磷酸與鉬酸銨和氯化亞錫反應(yīng)生成磷鉬藍(lán)，在鉬酸銨和氯化亞錫反應(yīng)生成磷鉬藍(lán)，在680nm 波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度，進(jìn)行定量。波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度，進(jìn)行定量。 共存的三價(jià)磷不干擾五氧化二磷的測(cè)定共存的三價(jià)磷不干擾五氧化二磷的測(cè)定，但五價(jià)磷則有干擾。在測(cè)定三氯化磷，但五價(jià)磷則有干擾。在測(cè)定三氯化磷時(shí)，采用氧化與不氧化，可以消除正磷時(shí)，采用氧化與不氧化，可以消除

48、正磷酸、正磷酸鹽和五氯化磷水解生成的磷酸、正磷酸鹽和五氯化磷水解生成的磷酸的干擾。酸的干擾。 四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用鉬酸藍(lán)氧化后氧化后五價(jià)磷五價(jià)磷氧化管氧化管三氯化磷三氯化磷五價(jià)磷五價(jià)磷溴水溴水五價(jià)磷五價(jià)磷顯色劑顯色劑不氧化管不氧化管三氯化磷三氯化磷五價(jià)磷五價(jià)磷顯色劑顯色劑鉬酸藍(lán)鉬酸藍(lán)三氯化磷三氯化磷樣樣 品品四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 C =2 mVo1.4 C空氣中三氯化磷的濃度，空氣中三氯化磷的濃度，mg/ m3； 1.4 由磷酸換算為三氯化磷的系數(shù)；由磷酸換算為三氯化磷的系數(shù)； m測(cè)得樣品溶液中磷酸（減去不氧測(cè)

49、得樣品溶液中磷酸（減去不氧化化 管管后后）的）的含量，含量，g； Vo標(biāo)準(zhǔn)采樣體積，標(biāo)準(zhǔn)采樣體積，L。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 乙酸鉛棉花晾干裝入玻璃導(dǎo)管時(shí)注意個(gè)人防護(hù)，乙酸鉛棉花晾干裝入玻璃導(dǎo)管時(shí)注意個(gè)人防護(hù)，乙酸鉛棉花適量，棉花變黑色說(shuō)明硫化氫氣體存乙酸鉛棉花適量，棉花變黑色說(shuō)明硫化氫氣體存在，應(yīng)及時(shí)更換乙酸鉛棉花。在，應(yīng)及時(shí)更換乙酸鉛棉花。 還原劑碘化鉀溶液和氯化亞錫溶液要密閉保存，還原劑碘化鉀溶液和氯化亞錫溶液要密閉保存，防止被空氣中氧氣氧化?？涩F(xiàn)用現(xiàn)制，加入碘化防止被空氣中氧氣氧化。可現(xiàn)用現(xiàn)制，加入碘化鉀溶液后溶液顏色變黃鉀溶液后溶液顏色變黃,再

50、加入氯化亞錫溶液后溶再加入氯化亞錫溶液后溶液應(yīng)變無(wú)色，若溶液仍顯黃色，說(shuō)明砷元素沒(méi)有液應(yīng)變無(wú)色，若溶液仍顯黃色，說(shuō)明砷元素沒(méi)有被還原完全，應(yīng)加大還原劑用量。被還原完全，應(yīng)加大還原劑用量。砷化合物的二乙氨基二硫代甲酸銀分光光度法砷化合物的二乙氨基二硫代甲酸銀分光光度法GBZ/T160.31-2004 四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 樣品處理：取樣品處理：取4.0ml于具塞比色管中，加于具塞比色管中，加入入6ml吸收液，混勻，供測(cè)定。吸收液，混勻，供測(cè)定。 計(jì)算公式計(jì)算公式中的系數(shù)中的系數(shù):乘以乘以2.5。二氧化硫的甲醛緩沖液鹽酸副玫瑰苯胺二氧化硫的甲醛緩沖液鹽酸副

51、玫瑰苯胺分光光度法分光光度法GBZ/T160.33-2004 四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用 主要問(wèn)題：氯化氫空白值偏高，標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品主要問(wèn)題：氯化氫空白值偏高，標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品吸光度偏低。吸光度偏低。 樣品應(yīng)在樣品應(yīng)在48h 內(nèi)測(cè)定內(nèi)測(cè)定。 在測(cè)定過(guò)程中在測(cè)定過(guò)程中,顯色劑的加入量必須十分準(zhǔn)確。顯色劑的加入量必須十分準(zhǔn)確。 溴化物、碘化物、硫化氫和氰化氫的干擾也可使溴化物、碘化物、硫化氫和氰化氫的干擾也可使空白值偏高?？瞻字灯?。 比色皿可使用比色皿可使用20mm。氯化氫和鹽酸的硫氰酸汞分光光度法氯化氫和鹽酸的硫氰酸汞分光光度法GBZ/T160.37-2004

52、 四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用按苯可溶物計(jì)的項(xiàng)目按苯可溶物計(jì)的項(xiàng)目 焦?fàn)t逸散物焦?fàn)t逸散物 煤焦油瀝青揮發(fā)物煤焦油瀝青揮發(fā)物 石油瀝青煙石油瀝青煙四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用焦?fàn)t逸散物焦?fàn)t逸散物GB 170541997車間空氣中焦?fàn)t逸散物車間空氣中焦?fàn)t逸散物(苯溶物苯溶物)測(cè)定方法測(cè)定方法 各種化學(xué)成分的氣體和顆粒物。各種化學(xué)成分的氣體和顆粒物。 包括煤焦油瀝青揮發(fā)物（苯包括煤焦油瀝青揮發(fā)物（苯,蒽，苯并蒽，苯并芘芘,菲菲,芘芘, -萘胺萘胺）,痕量金屬痕量金屬(鈹鉻鎘鉛鎳鈹鉻鎘鉛鎳等等)和氣體和氣體(如氮氧化物和二氧化硫等如氮

53、氧化物和二氧化硫等)。主要成分是多環(huán)芳烴化合物，主要致癌主要成分是多環(huán)芳烴化合物，主要致癌成分為苯并成分為苯并a芘（芘（GBZ/T160.44-2004 ）。四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用煤焦油瀝青揮發(fā)物煤焦油瀝青揮發(fā)物(焦炭工業(yè)分析測(cè)定方法，稱取小于焦炭工業(yè)分析測(cè)定方法，稱取小于0.2mm樣品樣品1g于坩堝于坩堝中，在中，在90010下連續(xù)加熱下連續(xù)加熱7min后取出冷卻至室溫后取出冷卻至室溫稱量稱量) 從煤、石油從煤、石油(石油瀝青外石油瀝青外)、木材和其他有、木材和其他有機(jī)物的蒸餾殘?jiān)袚]發(fā)出來(lái)的稠合多環(huán)機(jī)物的蒸餾殘?jiān)袚]發(fā)出來(lái)的稠合多環(huán)芳烴。芳烴。 包括

54、蒽，苯并包括蒽，苯并芘芘,菲菲,芘等芘等四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用石油瀝青煙石油瀝青煙(GB 18553-2001車間空氣中石油瀝青（煙）職業(yè)接觸限值車間空氣中石油瀝青（煙）職業(yè)接觸限值) 成份復(fù)雜成份復(fù)雜,不同的瀝青成份之間變化很大。不同的瀝青成份之間變化很大。因而瀝青煙的成份也相當(dāng)復(fù)雜因而瀝青煙的成份也相當(dāng)復(fù)雜,總體上講瀝總體上講瀝青煙的組分與瀝青近似青煙的組分與瀝青近似,主要是多環(huán)芳烴及主要是多環(huán)芳烴及少量的氧、氮、硫的雜環(huán)化合物。少量的氧、氮、硫的雜環(huán)化合物。 苯可溶物與苯并苯可溶物與苯并芘的識(shí)別及檢測(cè)芘的識(shí)別及檢測(cè)四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度

55、法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用有毒有毒物質(zhì)物質(zhì)金屬、非金屬金屬、非金屬元素元素單質(zhì)單質(zhì)及化合物及化合物無(wú)機(jī)無(wú)機(jī)化合物化合物有機(jī)有機(jī)化合物化合物回回顧顧四、紫外四、紫外- -可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，需等數(shù)分鐘后才能大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，需等數(shù)分鐘后才能正常工作（光電管響應(yīng)較慢）正常工作（光電管響應(yīng)較慢）靈敏度調(diào)至靈敏度調(diào)至1 1（放大倍率最?。?，儀器穩(wěn)定（放大倍率最?。?，儀器穩(wěn)定靈敏度改變后要重新調(diào)節(jié)靈敏度改變后要重新調(diào)節(jié)A A為為0 0或或T T為為100100接通電源接通電源前檢查儀器安全性，電源接線牢固，前檢查儀器安全性，電源接線牢固，接地線通地良好，旋

56、鈕起始位置正確接地線通地良好，旋鈕起始位置正確接通電源后預(yù)熱接通電源后預(yù)熱20-3020-30分鐘分鐘五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)1 1、分光光度計(jì)的保養(yǎng)與維護(hù)、分光光度計(jì)的保養(yǎng)與維護(hù)安置在干燥、無(wú)污染的地方；安置在干燥、無(wú)污染的地方；儀器內(nèi)的防潮硅膠應(yīng)定期更換或再生；儀器內(nèi)的防潮硅膠應(yīng)定期更換或再生；儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源，應(yīng)按開(kāi)關(guān)機(jī)儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源，應(yīng)按開(kāi)關(guān)機(jī)順序關(guān)閉主機(jī)和穩(wěn)流穩(wěn)壓電源開(kāi)關(guān)；順序關(guān)閉主機(jī)和穩(wěn)流穩(wěn)壓電源開(kāi)關(guān)；比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水或有機(jī)溶劑比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗干凈，并用柔軟清潔的紗布把水漬擦凈；沖洗干凈，并用柔

57、軟清潔的紗布把水漬擦凈；儀器經(jīng)過(guò)搬動(dòng)，應(yīng)及時(shí)檢查并糾正儀器經(jīng)過(guò)搬動(dòng)，應(yīng)及時(shí)檢查并糾正波長(zhǎng)波長(zhǎng);期間核查期間核查：核查的指標(biāo)、要求、核查步驟、數(shù)核查的指標(biāo)、要求、核查步驟、數(shù)據(jù)處理方法、結(jié)果如何判斷等。據(jù)處理方法、結(jié)果如何判斷等。五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)2、比色皿的配套性問(wèn)題、比色皿的配套性問(wèn)題 比色皿必須配套使用，否則將使測(cè)量結(jié)果失去意義，比色皿必須配套使用，否則將使測(cè)量結(jié)果失去意義， 在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。 比色皿內(nèi)注入同樣的液體比色皿內(nèi)注入同樣的液體 石英比色皿：石英比色皿：220nm、700nm裝蒸餾水裝蒸餾水 玻璃比色皿：玻璃比

58、色皿：700nm裝蒸餾水，裝蒸餾水， 將其中一池的透射比調(diào)至將其中一池的透射比調(diào)至100%，測(cè)量其他各池，測(cè)量其他各池 記錄其示值之差及通光方向記錄其示值之差及通光方向 如透射比之差在如透射比之差在0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，的范圍內(nèi)則可以配套使用， 若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng) 3、采樣誤差的來(lái)源：、采樣誤差的來(lái)源： 收集器選擇不合適；收集器選擇不合適； 采樣時(shí)機(jī)不當(dāng)；采樣時(shí)機(jī)不當(dāng)； 采樣點(diǎn)選擇不當(dāng)；采樣點(diǎn)選擇不當(dāng)； 采樣高度選擇不當(dāng)；采樣高度選擇不當(dāng)； 采樣對(duì)象選擇不當(dāng)；采樣對(duì)象選擇不當(dāng)； 個(gè)體

59、采樣器佩戴不當(dāng)；個(gè)體采樣器佩戴不當(dāng)； 采樣時(shí)間不合要求。采樣時(shí)間不合要求。正常生產(chǎn)狀態(tài)下，正常生產(chǎn)狀態(tài)下，非正常（意外事非正常（意外事故、防護(hù)設(shè)施失故、防護(hù)設(shè)施失效、人為影響因效、人為影響因素等）時(shí)不能采素等）時(shí)不能采樣樣五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng) 采樣裝置漏氣；采樣裝置漏氣； 采樣過(guò)程污染；采樣過(guò)程污染； 采樣吸收液損失；采樣吸收液損失； 采樣量超過(guò)收集器的吸收容量或吸附采樣量超過(guò)收集器的吸收容量或吸附容量；容量； 使用了錯(cuò)誤的采樣流量。使用了錯(cuò)誤的采樣流量。揮發(fā)性大的吸收揮發(fā)性大的吸收液采樣要補(bǔ)充吸液采樣要補(bǔ)充吸收液至原來(lái)體積收液至原來(lái)體積五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)

60、題及注意事項(xiàng) 氣象因素帶來(lái)的誤差氣象因素帶來(lái)的誤差 在高溫（在高溫（40以上）或低溫（以上）或低溫（10 以下）以下）條件采樣，要事先測(cè)試采樣效率；條件采樣，要事先測(cè)試采樣效率； 在高溫（在高溫（35以上）或低溫（以上）或低溫（5 以下）以下）條件采樣，要進(jìn)行體積換算條件采樣，要進(jìn)行體積換算； 濕度的影響；濕度的影響； 風(fēng)向的影響風(fēng)向的影響; 氣壓影響，氣壓低于氣壓影響，氣壓低于96.8kPa或高于或高于103.4kPa要進(jìn)行體積換算要進(jìn)行體積換算。五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)五、常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng) 空氣收集器的類型、性能與規(guī)格；空氣收集器的類型、性能與規(guī)格； 采樣前檢查采樣系統(tǒng)的采樣前檢查采樣系統(tǒng)