高效液相色譜法及應(yīng)用(講授)

1、高效液相色譜法及應(yīng)用慢慢中等中等快快Temporal course淋洗液淋洗液液相色譜以液體為流動(dòng)相，固定相可以是固體或液體（擔(dān)載在固體表面），一般高效液相色譜的固定相粒度在210微米，因此流動(dòng)相通過(guò)這樣一段固定床時(shí)就產(chǎn)生了很高的反壓。因此，我們通常所說(shuō)的高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography)實(shí)際也是高壓液相色譜(High Pressure Liquid Chromatography),因?yàn)闆](méi)有很高的壓力就不可能產(chǎn)生很高的分離效率。鍵合相高效液相色譜算是一種色譜模式，因?yàn)橛玫氖擎I合相的固定相。一、液相色譜的分類 按溶質(zhì)在分離過(guò)程中的原理：吸

2、附色譜分配色譜離子交換色譜體積排阻色譜親和色譜2.按色譜固定相的形式：平板色譜（平面色譜）柱色譜3.按分離的壓力高壓液相色譜（高效液相色譜）中壓液相色譜常壓液相色譜Hdp關(guān)系圖二、液固色譜法一般也把吸附色譜法稱為液固色譜法。液固色譜法的固定相一般為固體吸附劑，常用的是：碳酸鈣、硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭等。其中硅膠最為常用。吸附色譜對(duì)中等分子量的油溶性樣品可獲得最佳的分離，而對(duì)強(qiáng)極性或離子型的樣品，有時(shí)會(huì)發(fā)生不可逆吸附，不能得到滿意的結(jié)果?；驹恚何絼┮话銥槎嗫仔缘奈镔|(zhì)，在它們的表明存在著分散的吸附中心，溶質(zhì)分子和流動(dòng)相分子在吸附劑表面的活性中心上進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，同時(shí)不同溶質(zhì)之間和同一溶質(zhì)的不

3、同官能團(tuán)之間液也存在競(jìng)爭(zhēng)。競(jìng)爭(zhēng)的綜合結(jié)果就是形成不同溶質(zhì)在吸附劑表面吸附、解吸平衡。吸附mssmnMXnMX解吸X表示溶質(zhì)分子，下標(biāo)m為流動(dòng)相，s為固定相M表示流動(dòng)相分子，下標(biāo)m為流動(dòng)相，s為固定相n為被溶質(zhì)分子取代的流動(dòng)相分子數(shù)目用一個(gè)式子表示如下：極性吸附劑上有機(jī)化合物的保留順序如下：氟碳化合物飽和烴 烯烴芳烴有機(jī)鹵化物醚硝基化合物腈叔胺酯醛酮醇伯胺酰胺羧酸磺酸三、鍵合相液相色譜鍵合相固定相：在硅膠的表明用鍵合反應(yīng)把官能基團(tuán)鍵合到表面上，解決固定相流失的問(wèn)題。正相色譜：流動(dòng)相極性比固定相極性小反相色譜：流動(dòng)相極性比固定相極性大一般認(rèn)為鍵合相色譜的機(jī)理分配色譜機(jī)理，也有人認(rèn)為它是吸附色譜機(jī)理

4、，其實(shí)應(yīng)該是有兩種成分在里面，現(xiàn)在又有疏溶劑理論等機(jī)理的提出。四、高效液相色譜儀器 儲(chǔ)存和輸送液體設(shè)備 進(jìn)樣系統(tǒng) 柱系統(tǒng) 檢測(cè)器 控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)選擇流動(dòng)相的原則：保持色譜柱的穩(wěn)定性化學(xué)惰性適合所用的檢測(cè)器對(duì)樣品有一定的溶解能力清洗、更換方便、毒性小沸點(diǎn)、粘度等物理性質(zhì)合適反相色譜最常用的流動(dòng)相：水、甲醇、乙腈、四氫呋喃、異丙醇等。水甲醇體系：大約50水的時(shí)候粘度最大水乙腈體系：35水的時(shí)候粘度最大。存放流動(dòng)相的容器一定要惰性的，并且有機(jī)溶劑要避光。輸液泵要求流量平穩(wěn),可以調(diào)節(jié)的流量范圍寬，耐高壓。一般是柱塞往復(fù)泵。進(jìn)樣系統(tǒng)包括手動(dòng)進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣無(wú)論手動(dòng)進(jìn)樣還是自動(dòng)進(jìn)樣，都要通過(guò)六通閥。六通

5、閥進(jìn)樣是高壓系統(tǒng)的需要，既不影響系統(tǒng)的正常運(yùn)行又能夠讓樣品進(jìn)到系統(tǒng)中去。柱系統(tǒng)包括色譜柱和柱溫箱反相鍵合相色譜柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。柱溫箱的溫度控制要求比較精確，因?yàn)榱黧w的粘度受溫度的影響較大。液相色譜檢測(cè)器測(cè)量原理不同分類：光學(xué)性質(zhì)檢測(cè)器電學(xué)和電化學(xué)性質(zhì)檢測(cè)器熱學(xué)性質(zhì)檢測(cè)器光學(xué)性質(zhì)檢測(cè)器：紫外可見光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器紫外吸收檢測(cè)器有三種類型：固定波長(zhǎng)紫外吸收檢測(cè)器：低壓汞燈提供固定254nm或280nm紫外光。可變多波長(zhǎng)檢測(cè)器：氘燈做光源，光柵分光光二極管陣列檢測(cè)器photodiodearray detector（PDAD，PDA,

6、 DAD）：鎢燈和氘燈組合光源，進(jìn)入檢測(cè)池的不是單色光，而是一段紫外波長(zhǎng)上的光。PDA 可以輔助定性。折光指數(shù)檢測(cè)器（refractive index detector RID）：也稱為示差折光檢測(cè)器。溶液的折射率等于溶劑及其中所含各組分溶質(zhì)的折射率與其各自的摩爾分?jǐn)?shù)的乘積之和。RID是通用型的檢測(cè)器，但是靈敏度不高。RID不能用于梯度洗脫。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器電學(xué)和電化學(xué)檢測(cè)器：安培檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器庫(kù)侖檢測(cè)器介電常數(shù)檢測(cè)器極譜檢測(cè)器工作站：完成數(shù)據(jù)采集和對(duì)儀器的控制的工作。五、高效液相色譜法的應(yīng)用和進(jìn)展1、在生物化學(xué)和生物工程中的應(yīng)用2、在醫(yī)藥研究中的應(yīng)用3、食品分析4、環(huán)境分析5、精細(xì)化工人有了知識(shí)，就會(huì)具備各種分析能力，明辨是非的能力。所以我們要勤懇讀書，廣泛閱讀，古人說(shuō)“書中自有黃金屋?！蓖ㄟ^(guò)閱讀科技書籍，我們能豐富知