苦參堿的提取

1、苦參堿的提取苦參堿的提取2022-7-51XXX1440XX班1440XXXX2022-7-52苦參堿來源理化性質(zhì)藥理用途分離方法苦參堿是由豆科植物苦參的干燥根、植株、果實經(jīng)苦參堿是由豆科植物苦參的干燥根、植株、果實經(jīng)乙醇等有機溶劑提取制成的，乙醇等有機溶劑提取制成的， 是生物堿。一般為苦是生物堿。一般為苦參總堿，其主要成分有苦參堿、槐果堿、氧化槐果參總堿，其主要成分有苦參堿、槐果堿、氧化槐果堿、槐定堿等多種生物堿，以苦參堿、氧化苦參堿堿、槐定堿等多種生物堿，以苦參堿、氧化苦參堿含量最高。其他來源為山豆根及山豆根地上部分，含量最高。其他來源為山豆根及山豆根地上部分，純品外觀為白色粉末。純品外觀

2、為白色粉末。2022-7-53苦參堿來源理化性質(zhì)2022-7-54物理性質(zhì)物理性質(zhì)顏色：純品外觀為白色粉末。久置露空氣顏色：純品外觀為白色粉末。久置露空氣中，有引濕性，并變?yōu)榈S色。中，有引濕性，并變?yōu)榈S色。氣味：無臭，味苦。氣味：無臭，味苦。性狀：多為晶型，在苦參堿的性狀：多為晶型，在苦參堿的、四種類型中分別有不同的性狀：四種類型中分別有不同的性狀：型，針狀型，針狀或棱柱狀結(jié)晶；或棱柱狀結(jié)晶；型，正斜方形棱柱狀結(jié)晶；型，正斜方形棱柱狀結(jié)晶；型，液體；型，液體；型，棱柱狀結(jié)晶。型，棱柱狀結(jié)晶。 熔沸點：熔沸點：型，熔點型，熔點76，型，熔點型，熔點87；型，液體，沸點型，液體，沸點223(8

3、00Pa)；型，熔點型，熔點84。溶解性：苦參堿既可溶于水，又能溶于氯溶解性：苦參堿既可溶于水，又能溶于氯仿、乙醚、苯、甲苯、二硫化碳等親脂性溶仿、乙醚、苯、甲苯、二硫化碳等親脂性溶劑。氧化苦參堿親水性更強，易溶于水，可劑。氧化苦參堿親水性更強，易溶于水，可溶于氯仿，難溶于乙醚。苦參中生物堿的極溶于氯仿，難溶于乙醚?？鄥⒅猩飰A的極性順序是：氧化苦參堿羥基苦參堿苦參性順序是：氧化苦參堿羥基苦參堿苦參堿。堿。2022-7-5藥理用途 （1）在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用：）在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用： 苦參堿對中樞神經(jīng)具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、穩(wěn)定神經(jīng)等作用苦參堿對中樞神經(jīng)具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、穩(wěn)定神經(jīng)等作用; 對心血

4、管系統(tǒng)具有明顯的負性頻率和正性肌力作用、能防治動脈粥樣硬對心血管系統(tǒng)具有明顯的負性頻率和正性肌力作用、能防治動脈粥樣硬化、減輕心肌損傷等作用化、減輕心肌損傷等作用;對消化系統(tǒng)具有杭肝損傷、抗纖維化、升高對消化系統(tǒng)具有杭肝損傷、抗纖維化、升高白細胞等作用白細胞等作用; 還具有抗腫瘤、抗肝癌等作用。還具有抗腫瘤、抗肝癌等作用。 （2）臨床應(yīng)用：）臨床應(yīng)用： 苦參素的制劑臨床主要用于慢性活動性肝炎和慢性遷延性肝炎，對急性苦參素的制劑臨床主要用于慢性活動性肝炎和慢性遷延性肝炎，對急性黃疸型肝炎也有作用；也用于慢性宮頸炎，老年性、滴蟲性、霉菌性陰黃疸型肝炎也有作用；也用于慢性宮頸炎，老年性、滴蟲性、霉菌

5、性陰道炎，附件炎，盆腔炎等，對子宮肌瘤及宮頸癌亦有較好的預(yù)防和治療道炎，附件炎，盆腔炎等，對子宮肌瘤及宮頸癌亦有較好的預(yù)防和治療作用；適用于腫瘤放、化療引起的白細胞低下及其它原因引起的白細胞作用；適用于腫瘤放、化療引起的白細胞低下及其它原因引起的白細胞減少癥；在心血管疾病中用于心率失常、心率衰竭、心肌炎、冠心病等；減少癥；在心血管疾病中用于心率失常、心率衰竭、心肌炎、冠心病等；還可用于濕疹等?？鄥A添加到視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞培養(yǎng)導(dǎo)致降低腫瘤還可用于濕疹等?？鄥A添加到視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞培養(yǎng)導(dǎo)致降低腫瘤細胞的有絲分裂增殖速率下降，并加快腫瘤細胞細胞凋亡，同時，調(diào)節(jié)細胞的有絲分裂增殖速率下降，并加快

6、腫瘤細胞細胞凋亡，同時，調(diào)節(jié)蛋白細胞或使凋亡周期發(fā)生相應(yīng)的變化蛋白細胞或使凋亡周期發(fā)生相應(yīng)的變化2022-7-5分離方法1 酸水提取法酸水提取法 苦參以稀酸水滲漉，酸水提取液通過強酸性陽離子交換樹脂提取總生物堿。苦參以稀酸水滲漉，酸水提取液通過強酸性陽離子交換樹脂提取總生物堿?？鄥A和氧化苦參堿的分離，利用二者在乙醚中的溶解度不同進行。氧化苦參堿和氧化苦參堿的分離，利用二者在乙醚中的溶解度不同進行。氧化苦參堿的苦參堿的NO半極性配位鍵，極性大，在水中溶解度較大，在乙醚中溶半極性配位鍵，極性大，在水中溶解度較大，在乙醚中溶解度較小。將總生物堿溶于氯仿，加入解度較小。將總生物堿溶于氯仿，加入10倍

7、量乙醚，氧化苦參堿沉淀析出倍量乙醚，氧化苦參堿沉淀析出. 具體操作流程實例：具體操作流程實例：1.1取粉碎的苦參樣品取粉碎的苦參樣品,用用80%的酸性乙醇的酸性乙醇(pH=24)滲漏提取至無生物堿反應(yīng)滲漏提取至無生物堿反應(yīng),提取液減壓濃縮后用適量的自來水溶解提取液減壓濃縮后用適量的自來水溶解,濾除不濾除不溶物溶物,上清液用氯仿反復(fù)萃取至無生物堿反應(yīng)上清液用氯仿反復(fù)萃取至無生物堿反應(yīng),回收氯仿后得到苦參總生物回收氯仿后得到苦參總生物堿。堿。1.2苦參總生物堿用硅膠柱層析分離苦參總生物堿用硅膠柱層析分離,溶劑溶劑:氯仿、甲醇、氨水氯仿、甲醇、氨水(9:1:0.3),在此在此溶劑下溶劑下,氧化苦參堿

8、氧化苦參堿Rf=0.28(與標(biāo)準(zhǔn)樣對照與標(biāo)準(zhǔn)樣對照),將相同組分合并將相同組分合并,濃縮至適量后濃縮至適量后按按1:1加入乙醚加入乙醚,濾除沉淀物濾除沉淀物,上清液繼續(xù)加入乙醚至氧化苦參堿全部沉淀上清液繼續(xù)加入乙醚至氧化苦參堿全部沉淀,次日過濾次日過濾,用丙酮重結(jié)晶得到氧化苦參堿單體用丙酮重結(jié)晶得到氧化苦參堿單體,120烘干烘干3h,mp.206.5,與與標(biāo)準(zhǔn)品混合后測熔點標(biāo)準(zhǔn)品混合后測熔點,熔點相同。熔點相同。2022-7-5分離方法2 浸泡超聲提取法生產(chǎn)工藝步驟浸泡超聲提取法生產(chǎn)工藝步驟2.1 將苦參根干燥粉碎，粒度將苦參根干燥粉碎，粒度60目，目，1：61：10的重量比例的重量比例與與6

9、0%乙醇溶液混合，乙醇溶液混合，25C攪拌過夜。攪拌過夜。2.2 以以19200kHz頻率超聲振蕩頻率超聲振蕩30min；過濾除去不溶物，提；過濾除去不溶物，提取液于取液于80C蒸干。蒸干。2.3 取上述干粉約取上述干粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入氯仿入氯仿25mL，濃氨試液，濃氨試液0.3mL，稱定重量，搖勻，室溫放置，稱定重量，搖勻，室溫放置過夜（過夜（16h以上），再稱定重量，補足損失的溶劑量，振搖后以上），再稱定重量，補足損失的溶劑量，振搖后放置，用濾紙濾過。精密量取濾液放置，用濾紙濾過。精密量取濾液10mL，置水浴蒸干，殘渣，置水浴

10、蒸干，殘渣加乙醚加乙醚5mL放置。精密加硫酸滴定液（放置。精密加硫酸滴定液（0.01moll-1）10 mL，搖勻，置水浴上加熱使殘渣完全溶解并除盡乙醚，放冷。加新?lián)u勻，置水浴上加熱使殘渣完全溶解并除盡乙醚，放冷。加新沸后放冷的蒸餾水沸后放冷的蒸餾水15mL與甲基紅指示液與甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定滴，用氫氧化鈉滴定液（液（0.02moll-1） 滴定至黃色，即得。每滴定至黃色，即得。每1mL的硫酸滴定液的硫酸滴定液（0.01moll-1） 相當(dāng)于相當(dāng)于4.967mg的苦參堿。的苦參堿。2022-7-5分離方法3 高溫浸泡提取法生產(chǎn)工藝步驟高溫浸泡提取法生產(chǎn)工藝步驟3.1 將苦參根干燥粉

11、碎，粒度將苦參根干燥粉碎，粒度60目，目，1：61：10的重量比例的重量比例與與60%乙醇溶液混合，乙醇溶液混合，80C攪拌過夜。攪拌過夜。3.2 過濾除去不溶物，提取液于過濾除去不溶物，提取液于80C蒸干。蒸干。3.3 取上述干粉約取上述干粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入氯仿入氯仿25mL，濃氨試液，濃氨試液0.3mL，稱定重量，搖勻，室溫放置，稱定重量，搖勻，室溫放置過夜（過夜（16h以上），再稱定重量，補足損失的溶劑量，振搖后以上），再稱定重量，補足損失的溶劑量，振搖后放置，用濾紙濾過。精密量取濾液放置，用濾紙濾過。精密量取濾液10mL，

12、置水浴蒸干，殘渣，置水浴蒸干，殘渣加乙醚加乙醚5 mL放置。精密加硫酸滴定液（放置。精密加硫酸滴定液（0.01moll-1） 10mL，搖勻，置水浴上加熱使殘渣完全溶解并除盡乙醚，放冷。加新?lián)u勻，置水浴上加熱使殘渣完全溶解并除盡乙醚，放冷。加新沸后放冷的蒸餾水沸后放冷的蒸餾水15mL與甲基紅指示液與甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定滴，用氫氧化鈉滴定液（液（0.02moll-1）滴定至黃色，即得。每）滴定至黃色，即得。每1mL的硫酸滴定液的硫酸滴定液（0.01moll-1）相當(dāng)于）相當(dāng)于4.967mg的苦參堿。的苦參堿。2022-7-5分離方法4 堿性醇提取法工藝步驟堿性醇提取法工藝步驟4.1

13、將苦參根干燥粉碎，粒度將苦參根干燥粉碎，粒度60目，目，1：61：10的重量比例的重量比例與與60%乙醇溶液（含有乙醇溶液（含有0.02%氨水）混合，氨水）混合，80C攪拌過夜。攪拌過夜。4.2 過濾除去不溶物，提取液于過濾除去不溶物，提取液于80C蒸干。蒸干。4.3取上述干粉取上述干粉0.5g，精密稱定，置于錐形瓶中，加入氯仿，精密稱定，置于錐形瓶中，加入氯仿25ml濃氨試劑濃氨試劑0.3ml，稱定重量，搖勻，室溫放置過夜，再稱，稱定重量，搖勻，室溫放置過夜，再稱定重量，補足損失的溶劑，搖勻。過濾。精密量取定重量，補足損失的溶劑，搖勻。過濾。精密量取10ml，置，置水浴蒸干，殘渣加水浴蒸干，

14、殘渣加5ml乙醚。置水浴上加熱至完全溶解并除盡乙醚。置水浴上加熱至完全溶解并除盡乙醚。加蒸餾水乙醚。加蒸餾水15ml，甲基紅指示液，甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02molL）滴定至黃色，即得。每毫升硫酸滴定液相當(dāng)于）滴定至黃色，即得。每毫升硫酸滴定液相當(dāng)于4.967mg的苦參堿。的苦參堿。2022-7-5檢測中的分離方法高效液相色譜法高效液相色譜法(HPLC)：以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，：以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相

15、的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。其用于液液分離時，流動相和固定相檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。其用于液液分離時，流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進流失），有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，服從于高效液相色譜計算公式：行分配。達到平衡時，服從于高效液相色譜計算公式：K=Cs/Cm=kVm/Vs.式中式中

16、,Cs溶質(zhì)在固定相中濃度；溶質(zhì)在固定相中濃度；Cm-溶質(zhì)在流動相中的濃度；溶質(zhì)在流動相中的濃度； Vs固定相固定相的體積；的體積；Vm流動相的體積。流動相的體積。LLPC與與GPC有相似之處，即分離的順有相似之處，即分離的順序取決于序取決于K,K大的組分保留值大；但也有不同之處大的組分保留值大；但也有不同之處,GPC中，流動相對中，流動相對K影響不大影響不大,LLPC流動相對流動相對K影響較大。影響較大?？鄥A的檢測分離方法主要有高效液相色譜法苦參堿的檢測分離方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法、薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法、氣相色譜法(GC)和毛細管電泳法和毛細管電泳法(cE) 。其中。其中HPLC是應(yīng)用最是應(yīng)用最多的一種。多的一種。離子液體沒有得到廣泛應(yīng)用之前，液相分離苦參堿，通常采