植物組織石蠟切片的制作222

1、植物組織石蠟切片的制作植物組織石蠟切片的制作 一、實驗?zāi)康?1熟練掌握石蠟切片的方法。 2掌握永久制片的制作過程，為研究植物的內(nèi)部結(jié)構(gòu)奠定基礎(chǔ)。 3學(xué)會植物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的比較研究方法。 二、實驗器具與試劑 1器具 石蠟切片機、烘箱、顯微鏡、染色缸、小培養(yǎng)皿、鑷子、毛筆、吸水紙、紗布、載玻片、蓋玻片等。 2試劑 10%番紅水溶液、0.5%固綠（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸餾水、甘油、中性樹膠等。 三、實驗材料 幼嫩植物各部分，根據(jù)季節(jié)選擇材料。 四、實驗內(nèi)容與方法 石蠟切片法是顯微技術(shù)上最重要、最常用的一種方法。它是把材料封埋在石蠟里面，用旋轉(zhuǎn)切

2、片機切片，可以切出很薄的切片。凡是精細的工結(jié)構(gòu)，大都用石蠟切片。全都過程如下： 1固定 2洗滌 3脫水與硬化 4脫酒精 2封埋 6切片 7粘片 8脫蠟 9染色 10脫水 11. 透明 12膠封 實驗二實驗二 1、石蠟切片技術(shù)、石蠟切片技術(shù)固定、染色固定、染色 一、實驗?zāi)康模阂?、實驗?zāi)康模?掌握制作石蠟切片中固定、染色、返藍的基本操作技術(shù) 二、實驗原理：二、實驗原理： 石蠟切片法：是用石蠟浸透到組織中，并包埋組織，然后用旋轉(zhuǎn)切片機將蠟塊切成切片。只是切片中最常用的一種方法。 三、實驗用品：三、實驗用品： 1實驗材料：瓜葉菊葉柄，長壽花幼莖。 2實驗試劑：卡諾固定液、FAA固定液、35%酒精、50

3、%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、中性樹膠、2% 氨水、愛氏蘇木精染液。 3實驗器具：解剖器，雙面刀片，青霉素小瓶。 四、實驗步驟：四、實驗步驟： 1取材：依據(jù)生物組織取材的各項注意事項。 2固定：卡諾固定液、FAA固定液固定24小時。 3復(fù)水：卡諾固定液（1h）50%酒精（1h）愛氏蘇木精染液 FAA固定液愛氏蘇木精染液 4染色（整染）：愛氏蘇木精染液染色，染色時間視材料不同而有所不同，總之使材料最后染指紅棕色為止，且內(nèi)外均染色均勻。對于染不好的材料，可加長染色時間，還可通過負壓，超聲波加注浸劑等方法提高染色效率。時間為1-2天。 5返藍：染好的材料，用自來水

4、沖洗，加2% 氨水使材料變?yōu)樗{色，時間也因材料的不同而有所不同，好返藍的材料用水一洗就藍。 附：分染：番紅與固綠色法番紅用l的水溶液，固綠用0.5的酒精液(用95的酒精配制)，染色步驟如下： 討論和注意點： (1) 用番紅和固綠這個組合染成的切片，木化、栓化和角質(zhì)的細胞壁，被番紅染成鮮紅色，纖維素的細胞璧，被固綠成綠色。就維管束來講，木質(zhì)部染紅，韌皮部染綠，區(qū)別極清楚。 (2) 在50酒精中脫色，需經(jīng)實踐，如脫色不夠，綠色難得染好，脫色太過分，做出來的切片，紅色太淡，甚至于全是綠色，失掉了二色染法的用意。 實驗二實驗二 2、石蠟切片技術(shù)、石蠟切片技術(shù)脫水、透明、脫水、透明、浸蠟、包埋浸蠟、包埋

5、 一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康模?掌握制作石蠟切片中脫水、透明、浸蠟、包埋的基本操作技術(shù)。 二、實驗用品：二、實驗用品： 1實驗試劑：35%酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蠟。 2實驗器具：電光紙、電熱恒溫箱、烤片機、解剖器、盆。 三、實驗步驟：三、實驗步驟： 1脫水：35%酒精50%酒精70%酒精83%酒精95%酒精100%酒精100%酒精。每級1-2h。70%酒精處可長期保存。 2透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精 (1-2h) 純二甲苯(1h) 純二甲苯(1h) 3浸蠟：石蠟先置于60的溫箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于38溫箱中，放置2

6、-4小時。 4包埋：先提升恒溫箱的溫度至60，換純蠟3次，每次1-2h，用硬的電光紙、牛皮紙疊紙盒，置于45-60的燙板上，倒入材料，擺放好材料，把標簽（正面向外置于底部），補足石蠟，倒好后輕輕的置于冷水盆中，注意底面要接觸盆中涼水，待石蠟全部凝固后可取出晾干，也可在涼水盆中放置過夜。 實驗二實驗二 3、石蠟切片技術(shù)、石蠟切片技術(shù)切片、粘片、切片、粘片、脫蠟、透明、封藏脫蠟、透明、封藏 一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康模?掌握制作石蠟切片中切片、粘片、脫蠟、透明、封藏的基本操作技術(shù)。 二、實驗用品：二、實驗用品： 1實驗試劑： 95%酒精、100%酒精、二甲苯、蒸餾水、加拿大樹膠。 2實驗器具：切片機

7、、烤片機、解剖器、載玻片、蓋玻片、酒精燈、木筷、染色缸。 三、實驗步驟：三、實驗步驟： 1修塊、粘塊、整修的步驟： 選取所要切片的材料，從包埋的石蠟塊上用單面刀片切割下來，注意不可損傷包埋的組織。 確定切面的方位，用刀片將石蠟塊的四面作初步的整修。保證材料四周都有石蠟包圍。但不可太多。切面的上、下邊平行。 點燃酒精燈，并準備一把舊的解剖刀。 左手大拇指與食指間持整修好的石蠟塊，材料向上用其余三指夾住臺木。此時將解剖刀在酒精燈上加溫后，即放在臺木與石蠟塊之間，因解剖刀已加溫，遇上兩面的石蠟都會融化，可立即將解剖刀抽出，石蠟塊迅速壓在臺木上。 再將解剖刀蘸取少許石蠟碎屑，放在剛才固定的石蠟四周。此

8、時，解剖刀再加溫，并迅速將石蠟塊四周的碎屑燙平。使石蠟塊牢固地粘在臺木上。 修石蠟塊上下面平行，是切成的蠟帶呈一直線，不彎曲。每個切片中組織的距離接近。 2切片的方法： 準備下列用具：毛筆、黑色亮光紙 將已固著和整修好的石蠟塊和臺木裝在切片機的夾物部分. 安裝切片刀，將刀片夾在刀夾上，并調(diào)整好刀的角度。刀的斜度，非常重要，最好先切除的蠟塊試刀，以確定刀的斜度，一經(jīng)調(diào)度適合后，就不要隨便變動，以免每次試刀的麻煩。 移動刀片固定器，使夾刀部與夾物部之間的距離調(diào)整好，以石蠟塊的表面剛貼近刀口為度，在旋緊切片固定器的螺旋。 調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置。修整蠟塊，將刀片移近蠟塊，使小蠟塊的下邊與刀

9、鋒平行，如不平行，可調(diào)夾物部上的螺旋。然后把它固定，再轉(zhuǎn)下蠟塊呈矩形才行。只有平整的蠟塊，才能切出平整的蠟帶。最后根據(jù)需要，調(diào)整控制切片厚度的機制。調(diào)度后，把它固定下來。上述四步驟完成后，就可進行切片， 開始切片。右手握旋轉(zhuǎn)輪的手柄，搖動一轉(zhuǎn)就可切下一片，切下的蠟片粘在刀口上，待第二片切下時粘在一起，所以連續(xù)搖動就可將切下的蠟片連成一條蠟帶。這時左手就可持毛筆將蠟帶提起，邊搖邊移動蠟帶。轉(zhuǎn)速為每分鐘40-50為宜。 切成的蠟帶到20-30厘米時，即以右手用另一只毛筆輕輕將蠟帶挑起，平放在黑電光紙上。靠刀的一面較光滑，應(yīng)向下，較皺的一面向上。 切下的蠟片是否良好，此時應(yīng)先行檢查。 切片工作結(jié)束后

10、，仍將刀片用具擦拭干凈。 3貼片：貼附牢固，在染色時不易脫落；是皺褶的蠟片伸展平整。 用具：載玻片、粘片劑、解剖刀、蒸餾水、展片機及銬片機。 材料切成薄片后，須將切片粘在玻璃片上，加熱展開，這叫粘片。 所用載玻片必須清潔才能使用。粘片時，需把膠液(或稱粘貼劑)置簿玻片上，再取切片，浮置膠液上，然后置烘片臺上，使切片展開燙平，材料不現(xiàn)皺紋為度。最后將切片依次排好，用濾紙吸去多余水分，同時以記號筆在玻片上編號，放入溫箱中烘干，溫度3040約1小時即干。常用的膠液有下列三種： (1) 明膠液：這是粘片最常用的膠液，簡便優(yōu)良，配法是100毫升純水中，加明膠4毫克，加熱熔化，過濾即得。 (2) 梅氏蛋白

11、質(zhì)： 雞蛋清 50ml 甘 油 50m1 水楊酸納 1g 用蛋白與甘油攪拌，同時加入水楊酸納，調(diào)勻過濾，應(yīng)用時以濾液15滴，放入純水50毫升中即得。 (3) Land氏液： 阿拉伯膠 1克 重鉻酸鉀 0.2克 純 水 100毫升方法 將展片機溫度調(diào)整到35，保持恒定。 在載玻片上涂蛋白甘油粘片劑。其法是用細玻璃棒蘸取一小滴粘片劑，加在載玻片的中央，然后用洗凈的手指（無名指）加以涂抹，范圍不要太廣，也不要太多，以能貼足夠的蠟片為度。蛋白甘油粘片劑的配方：（不適宜用作蛋白觀察） 將涂粘片劑的載玻片放在展片機上，滴加蒸餾水數(shù)滴，此時若發(fā)現(xiàn)水不均勻分散而聚成滴狀，即表示玻片不清潔，有殘留油脂等物在上面

12、。 用解剖刀將蠟帶切成小段，每段的長度應(yīng)以蓋玻片的長度為準，一般應(yīng)比蓋玻片短約1/5-2/5。分片應(yīng)從蠟帶交界處分。 將蠟帶輕輕移到涂有水的載玻片上，蠟片光面應(yīng)向下貼在載玻片上，依次排列整齊。留出右端貼標簽處。 材料展平后，從展片機上取下，稍稍傾斜留出多余的水分，用吸水紙吸干背面及周圍多余水分，放于烤片機（35）上烤干水分。 4.脫蠟：玻片烘干后，須將蠟脫去，才能染色，脫蠟用二甲苯，把烤好的載玻片放于盛二甲苯的染缸中純二甲苯(5-10min) 純二甲苯(5-10min) 若分染需再經(jīng)酒精入水中，而后染色，其順序如下：二甲苯1/2 二甲苯十1/2純酒精100%酒精95酒精85酒精70酒精50酒精30酒精水染色以上各級約需510分鐘。 5.滴加加拿大樹膠封藏。 6鏡檢：石蠟切片的異常及處理 一張理想