微生物 菌種分離、馴化

1、保羅微生物發(fā)酵飼料高效復合降解菌的分離、馴化1.天然菌種的分離純化1.1天然菌種的獲得 取健康動物（豬、牛、羊）及水產(chǎn)品魚蝦的新鮮排泄物，分別投入生理鹽水中制成菌懸液，用稀釋平板法進行分離。分離培養(yǎng)時細菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，37培養(yǎng)12天；放線菌用高氏一號培養(yǎng)基，28培養(yǎng)35天；霉菌用查氏培養(yǎng)基，28培養(yǎng)34天1。在平板上分離得到的菌株中選擇較大、健壯、飽滿的菌落，采用平板劃線法繼續(xù)純化，直到在線條較疏處出現(xiàn)單個菌落。1.2菌種初篩 由于飼料中含有大量的蛋白質、淀粉、纖維素等有機物質，這些是動物營養(yǎng)物的主要來源，為了使動物有效利用飼料，本實驗從分純所得菌中以能夠高效降解蛋白質、淀粉、纖維素、

2、木聚糖、葡聚糖、植酸、油脂的細菌、真菌菌株為目標菌株，利用菌的生理生化特性對分純所得菌株進行初篩。 篩選時分別用淀粉水解培養(yǎng)基、明膠培養(yǎng)基、油脂水解培養(yǎng)基、赫氏（Dubos）纖維菌基礎培養(yǎng)基、桑塔氏培養(yǎng)基、BPY瓊脂培養(yǎng)基、YEPD固體培養(yǎng)基、2菌種馴化2.1分解發(fā)酵能力馴化 本實驗采用在選擇性培養(yǎng)基上測溶解圈的方式來馴化初篩所得優(yōu)勢菌群，以提高對飼料原料降解的能力和降解性能。2.2發(fā)酵飼料適口性馴化 同時對各菌種發(fā)酵產(chǎn)物的氣味進行感官檢定，有惡臭、或其他不良氣味的舍去。2.3食品營養(yǎng)學、毒理學馴化 采用異常毒性試驗方法，制品2g加入8mL滅菌生理氯化鈉溶液中，用體重18-22g健康小鼠5只，

3、每只經(jīng)口灌胃0.5mL，每天一次，連續(xù)3天。從第一天灌胃起，連續(xù)觀察7天，小鼠應健康活存，體重增加，判為合格。如不符合上述規(guī)定，則該菌株舍棄。3復配菌種效果檢測3.1產(chǎn)酶能力測定 將以上研究所得菌種分別測定在特定底物發(fā)酵過程中的產(chǎn)酶酶活。確定各菌株產(chǎn)酶能力。補充酶活測定方法（GB？）3.2飼喂效果測定 將以上研究所得的高效復合降解菌參考國外微生物飼料淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶等的酶活比例投放到飼料中，飼料配方、每餐飼喂量由畜牧專家提供。 具體飼喂情況見下表。不同品種飼喂情況 4、結果與討論4.1菌種分離結果 分純共得到繁殖能力、降解能力、適應能力都較好的菌株細菌137株、真菌63株。4.2菌種初

4、篩結果 將分純所得菌株經(jīng)過大量生理生化實驗初篩得到： 可高效降解淀粉的細菌有10株，真菌4株；蛋白質降解菌中細菌有9株，真菌6株；油脂降解菌中細菌有5株，真菌9株；纖維素降解菌中細菌有4株，真菌8株； 最后共篩選出高效降解菌株有細菌24株，真菌13株。4.3菌種馴化結果 將初篩選所得的所有菌通過產(chǎn)酶能力、飼喂適口性、營養(yǎng)學、毒理學馴化得細菌20株，真菌12株。選定生產(chǎn)用菌株細菌5株，真菌3株。其他菌株作為公司將來繼續(xù)深入研究的資源菌株。表2 高效降解菌株及形態(tài)特征（細菌）菌株編號菌株顏色菌落形態(tài)革蘭氏染色X1乳白色圓形，形大，表面濕潤，粘性，半透明X2淺橙色圓形，形小，表面濕潤，粘性，不透明+

5、X3土黃色圓形，形小，表面濕潤，粘性，不透明+X4白色圓形，形較大，表面干燥，邊緣皺起，粘性，不透明+X5乳白色圓形，形較大，表面濕潤，不透明日X4白色圓形，形較大，表面干燥，不透明日X5淺黃色圓形，形較大，表面干燥，邊緣皺起，不透明+日X6無色圓形，形小，表面濕潤，透明日X10白色圓形，形較大，表面濕潤，粘性，不透明+日X22黃白色圓形，形大，表面濕潤，粘性，不透明表3 高效降解菌株及形態(tài)特征（真菌）菌株編號菌株顏色菌落形態(tài)F3灰色圓形，形較小，干燥，不透明，表面有水珠F8淺橘色圓形，形較小，干燥，不透明F11白色圓形，形小，干燥，不透明日F23淺灰色圓形，形較小，干燥，不透明，表面有水珠M1深綠色圓形，形大，干燥，表面毛絨狀，菌落厚M2黃色圓形，形很大，干燥，表面粉末狀，有凹凸，菌落厚M3灰黑色圓形，形很大，干燥，表面粉末狀，菌落厚M4白色不規(guī)則，長在其他菌落周圍，干燥，菌落薄日M1棕色圓形，形大，干燥，表面粉末狀，菌落厚日M4棕黃色圓形，形大，干燥，表面粉末狀，菌落厚日M5灰色菌落不規(guī)則，成片生長，表面干燥，有很長絲毛狀日M6棕紅色圓形，形較大，干燥，表面粉末狀，菌落厚日M8磚紅色圓形，形較大，干燥，表面粉末狀，菌落厚日M11黑色圓形，形大，干燥，表面毛絨狀，菌落厚注：革蘭氏染色為陽性用“+”表示，陰性用“”表示