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文檔簡介

1、免疫電泳試驗免疫電泳是一種將區(qū)帶電泳和雙向免疫擴散相結(jié)合的免疫化學分析技術。實驗原理實驗原理先將抗原樣品在瓊脂平板上進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而被分離成肉眼不可見的區(qū)帶。停止電泳后，在與電泳方向平行的槽內(nèi)加入相應抗血清，使抗原和抗體呈雙向擴散，已分離的各抗原與相應抗體在瓊脂中擴散而相遇，在二者比例合適處形成肉眼可見的沉淀弧。實驗原理根據(jù)沉淀弧的數(shù)量、位置和形狀與已知標準抗原進行比較，可分析、鑒定樣品中所含的抗原成分及其性質(zhì)。人全血清兔抗人全血清1.5瓊脂、0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液移液管玻片、刀片、打孔器電泳槽、電泳儀、水浴箱主要的試劑和器材制板 將潔凈玻片置

2、于水平臺面上，用移液管吸取4-4.5ml熔化的1.5瓊脂加于載玻片上，待冷凝。實驗步驟2-5mm打孔及開槽，挑去孔內(nèi)的瓊脂，槽內(nèi)瓊脂暫不挑出。（打一個孔即可） 45mm10mm中央偏右2mm3mm加樣 用微量進樣器吸取10l稀釋的正常人全血清于小孔中。 電泳 以0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液為電泳緩沖液，將加樣后的瓊脂板置于電泳槽上，樣品孔靠近陰極端，用緩沖液浸濕的雙層紗布搭橋電泳。一般穩(wěn)定端電壓100V，電泳1h，即可終止電泳。雙擴散 取出電泳后的瓊脂板，挑出中間槽內(nèi)的瓊脂，取100l兔抗人全血清充滿槽內(nèi)，注意勿外溢。將瓊脂板放于濕盒內(nèi)，水平置于37恒溫培養(yǎng)箱中進行雙擴散，24h后觀察結(jié)果。 觀察沉淀弧的位置和條數(shù)，并畫出沉淀弧。實驗結(jié)果抗原與抗體濃度比例應適當，否則會使某些成分不出現(xiàn)沉淀線。當?shù)鞍踪|(zhì)抗原濃度高于20g/L，應用緩沖液稀釋后再進行電泳和擴散。所用抗血清最好用兩只或兩只以上免疫動物的混合血清，增加抗血清的抗體譜。澆板時要求厚度均勻，無氣泡。打孔挖槽時要求外壁整齊，防止瓊脂破裂。擴散過程中需要在不同時間進行結(jié)果觀察，做好記錄。注意事項應用粗略分

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