白芍總苷的研究報告進展綜述

1、-. z.白芍總苷研究進展的綜述目 錄摘要1關鍵詞1白芍化學成分研究1.1 單萜及其苷類成分21.2 黃酮及其苷類化合物2 1.3 鞣質類2 1.4 多糖3二、提取工藝2.1 回流提取法32.2 煎煮法42.3 超聲提取法4三、精制工藝3.1 大孔樹脂純化法5 3.2 聯(lián)合技術純化6四、檢識4.1 liebermann-burchard反響64.2 薄層色譜檢識74.3 指紋圖譜檢識7五、含量測定的方法5.1 高效液相法測白芍中白芍總苷的含量85.2 其他方法測白芍中白芍總苷的含量8 藥理作用6.1 TGP對心血管系統(tǒng)作用96.2TGP對神經(jīng)系統(tǒng)作用96.3TGP對內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)作用96.4T

2、GP對消化系統(tǒng)作用96.5TGP對泌尿生殖系統(tǒng)作用106.6TGP對皮膚及骨骼系統(tǒng)作用10七、展 望10八、參考文獻10-. z.【摘要】：白芍來源于毛茛科植物芍藥的枯燥根，含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等單萜類化合物, 合稱白芍總苷。近年來由于提取工藝以及檢測方法的提高，對白芍中的白芍總苷的研究越來越深入，本文就白芍中的白芍總苷的提取別離、含量等研究作綜述。 【關鍵詞】：白芍總苷，提取，純化，含量測定 白芍來源于毛茛科植物芍藥Paeonia lactif loraPa ll1 的枯燥根, 別名金芍藥, 主產(chǎn)于*、*等地。白芍性微寒, 味微苦、酸, 歸肝、脾經(jīng), 具有平肝止痛、

3、養(yǎng)血調經(jīng)、斂陰止汗等成效。白芍中主要含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等單萜類化合物, 合稱白芍總苷( TGP)1，也是白芍的有效部位, 具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調節(jié)等作用。因此對于白芍總苷的提取別離、含量測定的研究很有必要性?！?abstract 】: the root of herbaceous peony from ranunculaceae plant peony dry root, including paeoniflorin, paeonia lactiflora lactone glycosides, o*idation paeoniflorin, benzoyl p

4、aeoniflorin and single terpenoids, root of herbaceous peony are total glycosides. In recent years due to the e*traction technology and the improvement of detection method, the root of herbaceous peony root of herbaceous peony total glycosides research more and more thorough, in this paper the root o

5、f herbaceous peony root of herbaceous peony total glycosides e*traction separation, content and research review.【 key words 】: root of herbaceous peony total glycosides, e*traction, purification, the content determinationRoot of herbaceous peony from ranunculaceae plant peony Paeonia lactif loraPa l

6、l1 dry root, alias gold peony, mainly produced in zhejiang, anhui, sichuan, etc. Root of herbaceous peony se* small cold, taste slightly bitter, acid to the liver, spleen, liver pain with flat, keep blood to regulate the menstrual function, gathered Yin hidroschesis effect and so on. The main root o

7、f herbaceous peony contain peony glucoside, paeonia lactiflora lactone glycosides, o*idation paeoniflorin, benzoyl paeoniflorin and single terpenoids, root of herbaceous peony are total glycosides (TGP) 1, is also the root of herbaceous peony effective parts, have posed analgesic, anti-inflammatory

8、and immune regulation effect. So for the root of herbaceous peony total glycosides in the e*traction and separation of the content determination, the research is a necessity-. z.一白芍化學成分研究1.1 單萜及其苷類成分1963 年, Shibata S. 等首次從白芍的根中別離得到一種蒎烷單萜苷,命名為芍藥苷paeoni-florin2。在1972年,Kaneda M.等用*射線單晶衍射法確定了它的構造,并同時別離得

9、到了羥基芍藥苷o*ypaeoniflorin,苯甲酰芍藥苷benzoylpaeoniflorin和白芍苷albiflorin 3 。 隨后,Kitagawa等從牡丹皮中別離得到苯甲酰羥基芍藥苷benzoylo*ypaeoniflorin4， Murakami N.等別離出了氧化苯甲酰芍藥苷5 等成分。1981 年,日本學者Shimizu M.等從芍藥的根中別離得到了新的單萜芍藥苷元酮 paeoniflorigenone 6, 此外，Shibutani S. 也得到了gallotan-nin 7。1983 年,郎惠英等從白芍的根中別離得到兩個單萜苷,分別是 -10-蒎烯基-巢菜苷Z-(1S,5R

10、)-pinen-10-yl-vicianoside8和藥新苷lactiflorin9。在1990年，Jin Yu等修正了郎惠英等人會出的該化合物的構造式10。1985 年, Hayashi T 等人從芍藥根中別離得到Paeonilacto-neA、B和C11 。20世紀90年代初, Kadota S.等人又得到一新的單萜palbinone12,并采用2D-NMR技術確定了它的構造。1996年日本學者Murakami N. 等人從日本芍藥根甲醇提取物中別離得到了一種具有生物活性的單萜苷6-O-D-glucopyranosyl-lactinolide和兩個新的單萜lactinolide. paeo

11、nilactinone以及新的單萜苷1-O-D-gluc-opyranosyl-paeonisuffrone13。1.2 黃酮及其苷類化合物 1997年K.Kamiya等從芍藥中別離得到2個黃酮類化合物，分別是：kaempferol-3-O-D-glucoside和Kaempferol-3,7-di-O-D-glucoside。161.3 鞣質類 1980年，Nishizawa等從芍藥根中別離得到了沒食子酰鞣質類化合物penta-,he*a-,hepta-,octa-,nona-,and decagalloylglucose,1983年，他們用13C-NMR的方法確定了其中的1,2,3,6-O

12、-四沒食子?；咸烟呛?，2，3，4，6-O-五沒食子?；咸烟?，2，3，6-tetra-和1，2，3,4,6-penta-O-galloyl-D-glu-cose)的構造。1998年，*繼振等17從杭白芍中別離得到-谷甾醇、沒食子酸、苯甲酸等化合物，其中，沒食子酸是首次從白芍中分得。 1.4 多糖 1993年，Tomoda等18從白芍中別離得到了2個具有免疫活性的多糖。1994年，他們又從白芍中別離得到了另一個酸性多糖PA19。-. z.二提取工藝 白芍總苷的提取過程，系指溶劑進入藥材細胞組織溶解其有效成分后變成浸出液的全過程，它的實質就是溶質由藥材固相轉移到液相中的傳質過程。很多學者們一

13、般采用的提取方法為回流提取法、煎煮法、超聲提取法。-. z.2.1 回流提取法 高秀強、*敏彥等20以白芍總苷為考察指標，采用了乙醇溶劑的加熱回流提取方法。對影響乙醇回流提取的三個因素：提取次數(shù)、提取時間、加醇量進展試驗，確定了優(yōu)化的工藝為加10倍量的70%乙醇溶液提取兩次，每次提取兩個小時。吳英華、任鳳蓮等21用正交試驗的方法，考察乙醇體積量、固液比、提取時間對白芍總苷提取的影響。結果得到，在浸漬3次的條件下，得到最正確工藝條件：乙醇濃度為85%，固液比為1:5，提取時間為3小時。在此條件下，白芍總白芍總苷的提取率為1.366%。王爽、侯立強22研究白芍的提取精制工藝。通過正交試驗來判定何種

14、工藝提取白芍的收膏率高，結果：以70% 乙醇提取3 次，時間為90min，90min，90min加醇量為8 倍，8 倍，8 倍收膏率最高。2.2 煎煮法 在實際生產(chǎn)中常用一定濃度的乙醇或水提取, 通過對芍藥苷的溶出率進展比擬, 發(fā)現(xiàn)以7 0 %乙醉提取白芍測得芍藥昔含量最高, 但考慮到在大生產(chǎn)過程中乙醇價格昂貴, 故采用水提法提取白芍中白芍總苷，具有簡單、易行、提取完全等優(yōu)點。李衫, 王亞楠等23采用正交試驗設計, 采用水浸提, 以加水量、提取時間、提取次數(shù), 作為主要考慮因素。確定了白芍總苷的最正確提取工藝為: 參加12 倍量的水煎煮三次, 每次3 h 。其中提取次數(shù)經(jīng)過試驗確定為主要影響因

15、素。2.3 超聲提取法 超聲提取法具有簡單，省時，高效等優(yōu)點。貴永光、李申平等24探討了用超聲提取白芍總苷的工藝。通過正交試驗對溶劑的體積和超聲提取時間、超聲功率進展考察；優(yōu)選超聲提取工藝的條件，實驗說明：溶劑對白芍總苷的提取影響較小，超聲提取溫度和時間對其影響較大。最終確定了條件為超聲提取溫度為60度，溶劑體積為25ml，超聲時間為40min ,超聲功率為320w。在此條件下，白芍總苷的提取率為1.945%.-. z.三.精制工藝-. z.3.1 大孔樹脂純化法 對白芍中白芍總苷的純化精制一般采用色譜的方法，其中大孔樹脂純化方法最為常用。大孔吸附樹脂作為一類多孔性有機高聚物, 對化學物質的別

16、離作用主要由其吸附性產(chǎn)生。目前吸附樹脂逐步應用于中草藥提取液的別離純化25, 其吸附性能與其外表吸附、外表電性或形成氫鍵等有關, 常用比上柱量、比吸附量等指標來評價26。薛建國，狄留慶等27考察了上樣工藝，以AB- 8 型大孔樹脂來別離芍藥總苷, 對采用動態(tài)上樣方式, 以10 倍量20%乙醇洗脫, 滴速2.0ml/(mincm2) 別離效果最正確。吳德玲，*偉等28篩選了影響白芍總苷別離的主要因素。稱取白芍飲片100 g, 打碎成粗顆粒,以70%乙醇加熱回流提取兩次, 第1次加8倍量回流提取60m in, 第2次加6倍量回流提取30 m in, 過濾, 合并濾液, 回收乙醇至無醇味, 加水定容

17、至一定體積, 即得上柱溶液。用大孔樹脂吸附別離純化白芍總苷, 選用了均勻設計法,使影響因素多水平實驗的每個試驗點有充分的代表性，對洗脫工藝參數(shù)進展優(yōu)選。結果確定最正確上柱工藝為藥液濃度1 g 生藥材/m l ，2倍AB-8樹脂量吸附, 柱徑高比為1 ：12, 吸附時間30 m in后，以3倍的蒸餾水去糖，收集70%乙醇洗脫液。結論得到，大孔樹脂可較好地富集白芍中的總苷, 其膏中總苷含量達60%以上。金繼曙29利用DA201 樹脂、硅膠及乙酸乙酯等多種載體及試劑進展別離純化, 得到的提取物白芍總苷含量為70%。聶曉玉，尚城等30在前人用大孔樹脂純化白芍總苷的研究根底上，實驗比擬了4 種大孔吸附樹

18、脂對白芍提取液的別離效果, 即*、D101、D301、HPD8 型大孔吸附樹脂。最后選用* 型大孔吸附樹脂別離純化。利用*型樹脂一次吸附與解吸附過程, 提取物中的芍藥苷即可在30%以上, 白芍總苷在70%以上, 整個工藝流程短, 污染少,本錢降低。3.2 聯(lián)合技術純化舒心瑩，孟憲生等31研究乙醇梯度處理和吸附樹脂聯(lián)用對白芍中白芍總苷的純化工藝, 確定最正確工藝條件和參數(shù)。方法: 采用正交試驗法考察乙醇梯度處理對白芍總苷含量的影響, 從靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附兩方面對9 種不同型號的大孔吸附樹脂進展綜合評價, 篩選出效果最正確的樹脂型號, 考察并確定別離純化條件。結果得到: 最正確醇沉條件為1 g生藥

19、/mL的藥液用95%乙醇沉至醇濃度為90%, 冷藏10 h;以H PD300為最優(yōu)型號樹脂用于別離純化白芍中白芍總苷, 以5倍量50%乙醇洗脫藥材樹脂用量比2：1( 2 g藥材：1 mL濕樹脂)為最正確工藝。-. z.四檢識 實驗所提取的有效成分或有效部位，需經(jīng)過檢識鑒定才能進展下一步的研究。一般采用的檢識方法包括理化檢識和色譜檢識。其中理化檢識操作簡單、初步判定；然后在進展色譜檢識加以確定，具有準確、專屬性高等特點。-. z.4.1 liebermann-burchard反響 取白芍總苷提取物12mg，加醋酐1ml與硫酸45滴，顯紅色至紫紅色。 4.2 薄層色譜檢識 取白芍總苷提取物2mg，

20、加甲醇1ml，振搖使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版二部附錄 B)試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(5:1)為展開劑，展開后，取出，晾干，噴以硫酸溶液(110)，于100加熱約5分鐘使顯色。供試品色譜圖中，在與對照品相應的位置上，應顯一樣顏色的斑點。4.3 指紋圖譜檢識 謝培山等32建立了薄層指紋圖譜來考察白芍總苷的質量，以硅膠60預制板；展開劑采用氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2;顯色劑為5%香草醛硫酸溶液，80度加熱至斑點清晰。用此種方法提高了

21、白芍總苷各成分的別離度，所得到的指紋圖譜特征性強，極易觀察、識別和比擬。-. z.五.含量測定的方法 白芍總苷是從白芍中提取別離的蒎烷單萜苷類成分, 其中包括芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷等。文獻多報道把含量最高的芍藥苷這一單一成分作為白芍的質控標準, 而白芍總苷是由一類構造相近的單萜苷類化合物組成的混合物, 難以控制其內(nèi)在質量。也有報道測定其中的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷來表征白芍總苷, 這需要多種對照品并且也難全面表達其內(nèi)在質量，以此對于白芍總苷的含量測定具有很大意義。文獻報道白芍總苷各成分都具有苯甲酸酯鍵構造, 將其水解可生成苯甲酸，通過苯甲酸的含量推算出白芍總苷的含量。

22、近年來對白芍中白芍總苷的含量測定方法越來越多，大多采用高效液相法和分光光度法。-. z.5.1 高效液相法測白芍中白芍總苷的含量 高效液相色譜法(HPLC法)具有別離度高,分析速度快,應用*圍廣,檢測靈敏度高,流動相選擇*圍寬,流出組分易收集,色譜柱可反復使用等優(yōu)點。 軼娟，浦錦寶等33建立白芍藥材中白芍總苷的HPLC含量測定方法。以苯甲酸為對照品,采用堿水解- HPLC法,測定白芍中白芍總苷的含量。通過公式白芍總苷含量% =苯甲酸含量% 480. 27 /122. 12計算出白芍總苷的含量;色譜條件: YMC- Pack ODS - A (5m, 150mm 4. 6mm) HPLC色譜柱,

23、甲醇- 0. 05mol/L磷酸- 異丙醇- 冰乙酸(8515546)為流動相,檢測波長230nm。結果得到，苯甲酸在進樣量0. 1 2g(r=1.0000)*圍內(nèi)呈良好的線性關系,平均加樣回收率為101. 12% , RSD是21.49%。該方法準確、簡便、快速,重現(xiàn)性好。*敏彥，高秀強等34同樣是采用堿水解高效液相色譜法，采用了乙腈-磷酸25:75為流動相，苯甲酸的進樣線性*圍為20.016-500.4ng，平均回收率為98.58%。RSD為0.95%，實驗說明該法適用于為白芍總苷的含量測定。一般高效液相法白芍總苷都是以苯甲酸為對照品，但是*玉紅，陳燕等35考慮到白芍總苷在水解的過程可能有

24、各種因素干擾，故考慮采用芍藥苷為對照品與樣品平行堿水解，并對不同的對照品進展了比擬，說明以苯甲酸和芍藥苷為對照品對測定結果無明顯影響，得到以芍藥苷為對照品測得的含量略高，驗證了該方法的可行性。對于測量中的供試品準備，幾乎都采用堿水解法：文獻報道36采用三因素三水平正交試驗對水解條件進展了選擇。結果說明用5%氫氧化鈉的溶液，在100度下水解120min為最正確水解條件。5.2 其他方法測白芍中白芍總苷的含量 英華等37研究了白芍總皂苷的紫外吸收特性, 建立了以苯甲酸為對照品, 用紫外分光光度法測定白芍總皂苷含量的方法。方法的回歸方程為: Y= 0.003 24+ 0.107 63 c, 相關系數(shù)

25、0.998 85, 加標回收率為95.7% 102.0%, RSD =2. 57% ( n= 9)。方法簡便易行、快速、準確。對最大吸收波長和溶劑進展選擇，結果得到，用85% 乙醇作為溶劑,測定波長為227 nm。瞿白露等38基于白芍總苷可被50 g .L- 1氫氧化鈉溶液水解產(chǎn)生苯甲酸, 并在pH 2. 72 的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中, 苯甲酸經(jīng)激發(fā)光照射產(chǎn)生熒光, 提出了熒光光度法測定中藥白芍中白芍總苷含量的方法。在激發(fā)波長280 nm, 發(fā)射波長310 nm 處, 反響體系的$F( 即F0 與F值之差) 與苯甲酸的質量濃度在1.0 10.0 mg.L- 1*圍內(nèi)呈線性關系。試驗選擇50g

26、.L- 1 氫氧化鈉溶液25mL, 100度條件下水解120 min為最正確的水解條件。此方法可用于白芍總苷的質控與半定量測定, 與高效液相色譜法或高效毛細管電基團和母體構造的物質含量提供了方法。-. z.六.藥理作用 近年來白芍及其化學成分的抗炎、免疫調節(jié)、抗病毒、抗氧化、抗驚厥、胃腸道疾病、護肝和心血管疾病等的藥理研究已取得顯著進展。以下就白芍的現(xiàn)代藥理研究做一簡要概述。-. z.6.1 TGP對心血管系統(tǒng)作用增加心肌血流量,降低血流阻力。心肌缺血最根本原因在于能量供應障礙,心肌缺血再灌注損傷作為一種應激源可引發(fā)心肌細胞內(nèi)質網(wǎng)應激,導致葡萄糖調控蛋白。(GRP78)大量表達,對細胞起保護作

27、用38；抗血栓形成,抗動脈粥樣硬化。TGP能抑制靜脈血栓模型大鼠血小板聚集和血栓形成的作用39 40；抗心肌重構。白芍總苷和卡托普利能降低不完全結扎腹主動脈造成壓力超負荷型心肌重構模型大鼠左心室指數(shù)、全心指數(shù)41。6.2TGP對神經(jīng)系統(tǒng)作用抗腦缺血/再灌注損傷作用，TGP對腦缺血/再灌注傷大腦皮層、海馬、紋狀體等缺血性腦組織病理組織學改變具有保護作用,提高病變組織超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)含量42；TGP同時具有抗抑郁作用 43 44。6.3TGP對內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)作用TGP具有治療糖尿病腎病的作用 4546； TGP治療胰島素抵抗相關疾病(代謝綜合征)的作用機制可能與其

28、提高胰島素敏感性、降低血脂和抑制肝損傷以及增強抗氧化能力等效應有關 47。6.4TGP對消化系統(tǒng)作用TGP治療肝損傷、肝纖維化TGP降低肝損傷小鼠ALT、AST活性和肝勻漿中MDA的含量,升高SOD活力,保護急性肝損傷,其機制與TGP抵抗自由基、提高抗氧化物酶的活性等有關49 50；TGP具有治療結腸炎的作用51。6.5TGP對泌尿生殖系統(tǒng)作用TGP治療狼瘡性腎炎，對經(jīng)雷公藤多苷治療的狼瘡性腎炎的腎臟病理改變有改善,有減毒增效的作用52； TGP具有治療前列腺炎作用53。6.6TGP對皮膚及骨骼系統(tǒng)作用TGP具有治療皮膚病的作用54；TGP治療骨骼病變TGP可能通過直接促進成骨細胞活性,抑制破

29、骨細胞存活,從而調節(jié)骨吸收-骨重建動態(tài)平衡來防治RA骨質破壞55。-. z.七展望 白芍作為一種傳統(tǒng)的中藥具有極大地開發(fā)利用前景。但是白芍中白芍總苷的含量受到了產(chǎn)地、氣候、品種、采收時間等諸多因素的影響，建議建立白芍總苷的指紋圖譜加以控制白芍的質量。另外，白芍總苷藥理作用研究的不斷深入，應提高和創(chuàng)新白芍總苷的提取工藝，在提取率和提取質量的研究方面不斷深入，以推進白芍中白芍總苷藥劑的研究進展，為充分利用白芍提供更多的科學依據(jù)。參考文獻：1.*曉燕，李銑.白芍的化學研究進展J.*藥科大學校報，2002,191：70-742. Shibata S , Nakahara M. Paeonoflorin

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