重金屬鉛誘發(fā)機體氧化應激效應的研究進展10400字

1、重金屬鉛誘發(fā)機體氧化應激效應的研究進展10400字 摘要：盡管各國政府已經(jīng)采取多項措施限制和減少鉛的使用，鉛污染引發(fā)的安康問題照舊非常突出，仍是當前社會高度關注的環(huán)境污染與安康問題之一。研究說明，氧化應激是幾乎所有疾病發(fā)生的誘因，而且鉛類污染物對生命體的危害與氧化應激效應親密相關。鉛暴露使機體產(chǎn)生過量的活性氧物質(zhì)導致體內(nèi)氧化復原平衡態(tài)被打破，造成蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物大分子的氧化損傷，從而導致細胞凋亡或壞死和組織器官代謝紊亂，引發(fā)機體病變甚至癌癥的發(fā)生。因此，有必要從生物大分子、細胞和實驗動物三個層面系統(tǒng)綜述鉛暴露誘發(fā)機體氧化損傷的作用機理，闡述重金屬鉛誘發(fā)機體氧化應激效應的研究進展。關鍵詞

2、：重金屬鉛；氧化應激；毒性效應中圖分類號：Q89 文獻標識碼：AAbstract：Lead still possesses great threats to human health owing to its widespread distribution in the environment caused by human activities， although various actions have been taken to cut down the use and distribution of lead by the governments. Abundant evidence

3、has indicated oxidative stress is a trigger of many varied diseases， which has still been one of the biggest concerns on environmental pollution and health. Multiple studies have shown that lead toxicity is related to oxidative stress because it generates reactive oxygen species ROS， interferes with

4、 antioxidant enzyme activities， and breaks the balance of the pro-oxidant/antioxidant defense system， resulting in oxidative damage of proteins， nucleic acids and lipid pounds， cell apoptosis and necrosis， and metabolic disorders of tissues and organs of humans， and causes harmful diseases or cancer

5、s. Therefore， it is of great importance to review mechanisms of oxidative damage caused by lead bined at the molecular， cellular and organismal levels to understand harmful effects of lead exposure to human health.Keywords： lead； oxidative stress； toxic effects2022年11月下旬，國家環(huán)保部公布的?重金屬污染綜合防治十二五;規(guī)劃?202

6、2年度考核結(jié)果顯示，盡管國家重點監(jiān)控的重金屬污染物鉛、汞、鎘、鉻和類金屬砷減排成效顯著，但由于涉重金屬產(chǎn)業(yè)的快速擴張造成重金屬污染物排放總量仍處于高位程度，重金屬環(huán)境風險隱患仍然突出。根據(jù)美國地質(zhì)調(diào)查局United States Geological Survey最新公布的2022年全球鉛行業(yè)市場分析數(shù)據(jù)，中國仍然是精鉛產(chǎn)量和消費量最多的國家，均遠遠高于歐洲第二位和美國第三位之和。宏大的鉛消耗量中僅有約1/4的鉛被回收再利用，其余大局部以三廢;形式排入環(huán)境介質(zhì)中，經(jīng)食物鏈傳遞或呼吸道等途徑進入人體并蓄積于肝臟、腎臟等靶器官中，進而侵入組織細胞誘發(fā)氧化應激、細胞凋亡等毒性作用損傷其生理功能。因此

7、研究鉛污染治理及鉛污染引發(fā)的安康問題，已經(jīng)成為環(huán)境污染與安康領域亟需解決的重要科學問題。本論文從動物程度、細胞程度和功能大分子程度系統(tǒng)綜述鉛暴露誘發(fā)氧化應激效應與機理的研究進展，為開展鉛污染損傷人體安康的早期預警及防治技術提供借鑒。1鉛引發(fā)的毒性效應及與氧化應激的關系1.1鉛的毒性作用簡介鉛是地殼中含量最多的重金屬元素。由于鉛具有密度大，柔軟性，耐腐蝕，延展性強等特點，在古代就有廣泛應用。在古羅馬時代就有鉛制作的水管和酒器；我國在各個朝代都有使用鉛制作的錢幣。鉛以工業(yè)規(guī)模消費和開發(fā)是19世紀才開場的，在19世紀中葉煉鉛工業(yè)獲得迅猛開展。據(jù)統(tǒng)計目前鉛在有色金屬消費中占第四位2。在工業(yè)開采、加工和

8、制作過程中，鉛會通過水、空氣、食物鏈等途徑與人類和動物體廣泛接觸，進而通過消化道、呼吸道和皮膚等吸收進入機體3。進入消化道的鉛吸收率僅為1%-2%，嬰幼兒吸收率較高，鈣缺乏可進步吸收率主要在十二指腸吸收，經(jīng)門靜脈到達肝臟，一局部進入血液循環(huán)，一局部由膽汁分泌進入腸道，而后排出體外；進入呼吸道的鉛25%-30%被吸收，粒徑大于10 mu;m的含鉛顆粒主要沉積于鼻腔和咽喉部，2.5mu;m以下者可以到達肺泡。鉛吸收后進入血液，約96%迅速與紅細胞結(jié)合，只有4%留在血漿中，然后經(jīng)血液循環(huán)分布到肝、腎、脾、肺和腦等組織器官中4，其中以肝臟和腎臟濃度最高5，最終蓄積到骨骼、牙齒和毛發(fā)中，以磷酸鉛的形式沉

9、積下來6，引發(fā)多種多系統(tǒng)性、多器官性的機體損傷7。鉛的吸收和分布示意圖見圖1所示2。1.2 氧化應激效應介紹在正常的生理條件下，人體內(nèi)存在著氧化活性物質(zhì)和抗氧化防御體系的動態(tài)平衡，作用形式見圖2所示。一旦體內(nèi)氧化活性物質(zhì)含量增加或者體內(nèi)抗氧化防御體系被干擾和破壞，致使這種動態(tài)平衡產(chǎn)生紊亂和失調(diào)，引起一系列新陳代謝失常和免疫功能降低，形成氧自由基連鎖反響而導致各組織發(fā)生氧化損傷，這就是氧化應激效應8。所說的氧化物質(zhì)主要包括活性氧物質(zhì)Reactive Oxygen Species， ROS和活性氮物質(zhì)Reactive Nitrogen Species， RNS，其中ROS是主要的氧化活性物質(zhì)，主要

10、包括過氧化氫H2O2、超氧陰離子O2“-和羥基自由基HO“等9， 10。正常條件下，人體內(nèi)存在一定量的ROS，作為體內(nèi)多種代謝和信號通路的信使，通過激活和調(diào)控各種轉(zhuǎn)錄因子參與體內(nèi)多種基因的轉(zhuǎn)錄及相關功能蛋白的表達，參與細胞的增殖、分化及遷移及促進和維護細胞、組織和機體的新陳代謝11， 12。但是ROS具有較強的反響活性和氧化性，當ROS濃度較高時，會直接或間接對DNA、蛋白質(zhì)及脂類物質(zhì)發(fā)生氧化損傷，造成細胞凋亡apoptosis、衰老senescence和死亡death13-16。大量體外和體內(nèi)實驗的研究說明，輻射和外源化學物包括重金屬類物質(zhì)是ROS介導的細胞損傷的主要環(huán)境誘導因子。電離輻射會

11、通過氧化H2O產(chǎn)生HO“17，皮膚受到紫外線290-400 nm照射會產(chǎn)生大量ROS，進而干擾了調(diào)控細胞增殖和分化的主要信號通路，影響了細胞的正常生理功能18。外源化學物如乙醇和苯巴比妥類物質(zhì)通過改變細胞色素P450的途徑，導致細胞色素P450的4A過氧化物酶體增殖，而導致了過氧化氫的產(chǎn)生19。重金屬類污染物被認為是外源化學物中毒性較強的一類物質(zhì)，它們發(fā)揮毒性效應的關鍵因素就是誘發(fā)機體產(chǎn)生氧化應激20-23。首先，重金屬類物質(zhì)可以參與類Fenton反響產(chǎn)生更多的ROS，是誘發(fā)氧化應激的直接因素24；其次，重金屬類物質(zhì)易與體內(nèi)抗氧化物質(zhì)如復原型谷胱甘肽GSH發(fā)生共價結(jié)合而使其喪失消除ROS的才能

12、25， 26；另外，重金屬類物質(zhì)可以與抗氧化酶及谷胱甘肽相關酶發(fā)生互相作用，影響酶的活性和濃度，從而干擾體內(nèi)的氧化復原反響27-29。后面這兩種情況是重金屬產(chǎn)生氧化損傷效應的非直接因素。同時，體內(nèi)存在著抗氧化防御系統(tǒng)，由抗氧化物質(zhì)、抗氧化酶及非酶抗氧化蛋白組成30。抗氧化物質(zhì)主要包括GSH、維生素C、維生素E、黃酮類物質(zhì)、尿酸等；抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、谷胱甘肽過氧化物酶GPX、谷胱甘肽復原酶GR、谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶GST及溶菌酶Lysozyme等；非酶抗氧化蛋白是指不直接參與分解代謝ROS物質(zhì)，卻能起到維持體內(nèi)氧化復原平衡作用的蛋白，主要包括血紅蛋白、肌紅蛋白等含

13、有鐵/亞鐵離子的傳輸?shù)鞍?、各種金屬硫蛋白及人絨毛膜促性腺激素HCG等可以抑制氧化應激過程中細胞凋亡等損傷的功能蛋白31-33。體內(nèi)抗氧化防御體系的存在，催化去除或分解代謝了過量產(chǎn)生的ROS，保障了各組織器官的正常生理功能。1.3 鉛引發(fā)的毒性效應與氧化應激的關系E. D. Willis于1965年最先發(fā)現(xiàn)鉛毒性與氧化應激相關34。鉛的致病機理是較為復雜的，它可以與抗氧化酶發(fā)生直接作用35-38，競爭性抑制重要微量礦物質(zhì)的吸收，還能與體內(nèi)含巰基物質(zhì)發(fā)生共價結(jié)合使其失去抗氧化作用22。鉛誘發(fā)的氧化損傷作用主要通過兩種獨立而又具有相關性的機理。首先，鉛可以直接誘導機體產(chǎn)生單線態(tài)氧、過氧化氫及超氧化物

14、等活性氧物質(zhì)；第二種機制為鉛可以消耗細胞內(nèi)的抗氧化物質(zhì)，其中鉛影響GSH代謝途徑是最主要的機理39。GSH是由半胱甘酸Cys、谷氨酸Glu和甘氨酸Gly組成的三肽，在淋巴細胞間質(zhì)產(chǎn)生，是人體中最主要、含量最高的巰基類抗氧化物質(zhì)40。GSH除了可以去除體內(nèi)的活性氧之外，還可以與毒性重金屬發(fā)生結(jié)合，削弱其毒性效應41。在鉛暴露動物實驗的研究中，血液、肝臟和腎臟等器官中GSH的濃度明顯低于未暴露組42-44。鉛可以直接與含有巰基的抗氧化酶發(fā)生共價結(jié)合，使這些酶失活，從而破壞了氧化復原平衡狀態(tài)。Ahamed等人報道在印度勒克瑙市一個鉛工業(yè)暴露的地區(qū)，血鉛程度為11.39 mu;g/dL左右的兒童，血液

15、中羥基乙酰丙酸脫氫酶ALAD和GSH的含量明顯低于血鉛程度在7.11 mu;g/dL左右的兒童35。ALAD可以催化亞鐵血紅素heme的生成，從而維持血紅蛋白的攜氧才能，因此鉛對ALAD活性的抑制作用是鉛發(fā)揮毒性很關鍵的一個方面45。Hunaiti等發(fā)如今約旦伊爾比德市的從事鉛行業(yè)工人的血液中，GR、GPX和GST的含量均與血鉛程度呈反比，說明鉛暴露使上述三種谷胱甘肽相關酶含量均發(fā)生下降，從而干擾了GSH代謝途徑46。目前，鉛的毒性效應與氧化應激的相關性研究已有大量報道，因此本文將從動物、細胞和分子三個程度上分別綜述鉛暴露誘發(fā)氧化應激的研究進展，并從中找到尚未搞清楚的科研問題，作為后續(xù)工作的研

16、究重點。2 動物、細胞和分子程度上鉛暴露誘發(fā)氧化應激的研究進展2.1動物程度上鉛暴露誘發(fā)氧化應激的研究進展研究說明，長期鉛暴露可導致肝臟、腎臟、生殖系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)的病變。對于鉛毒性效應的研究大局部集中在流行病學領域，通過研究人群血鉛程度、與身體各器官相關病變的生物學效應之間的關系來評價鉛的毒性，為提出有效的治療方案提供數(shù)據(jù)支持47-49。但是流行病學研究并不能實現(xiàn)鉛暴露劑量變化與氧化應激相關生物學效應關系的研究，因此不能提醒鉛誘發(fā)氧化應激的毒性作用機理。因此很多學者從動物程度上研究了鉛毒性與氧化應激的關系。實驗動物經(jīng)鉛暴露后，其抗氧化防御體系的變化情況是動物程度研究中主要關注的問題。Farma

17、nd等人研究了雄性Sprague-Dawley鼠經(jīng)不同劑量鉛染毒后主要抗氧化酶Cu/Zn SOD、CAT及GPx活性及含量的變化，結(jié)果顯示鉛暴露導致鼠胸動脈中Cu/Zn SOD活性升高，CAT和GPx活性沒有變化，而且這三種酶的含量均未發(fā)生變化；在鼠腎臟和髓質(zhì)中Cu/Zn SOD和CAT活性升高，而GPx活性沒有變化。因此Farmand認為鉛暴露后抗氧化酶活性升高是實驗動物在氧化應激狀態(tài)下的一種反響抵抗機制50。但是Sivaprasad課題組的研究結(jié)果卻與上述報道相反：他們在鉛暴露后的小鼠血液紅細胞中發(fā)現(xiàn)Cu/Zn SOD、CAT和GPx活性下降，因此解釋為酶活性下降是鉛誘發(fā)氧化應激的標志51

18、。以上不同的實驗結(jié)果說明，在不同的暴露劑量、暴露時間和靶器官等實驗條件下，鉛暴露過程中抗氧化酶活性變化規(guī)律不具有確定性，而且目前的研究并未說明由于鉛暴露導致酶活性的變化，引起體內(nèi)氧化復原狀態(tài)的失衡造成氧化損傷的發(fā)生；還是鉛暴露誘發(fā)機體氧化損傷，導致了酶活性變化52。針對這一問題，我們研究了斑馬魚程度上鉛暴露誘發(fā)氧化應激過程中SOD活性變化的機理：鉛暴露打破了斑馬魚肝臟中的氧化復原穩(wěn)態(tài)，導致SOD酶活性下降，谷胱甘肽相關酶GPx、GR和GST活性受到抑制， GSH/GSSG比率下降，并對細胞膜構(gòu)造產(chǎn)生了氧化損傷，導致脂質(zhì)過氧化物MDA含量增加；然后利用多種光譜學方法、ITC法及分子對接模擬等方法

19、從生物大分子層面上深化討論了鉛暴露誘發(fā)斑馬魚氧化應激過程中CAT活性降低的機理。研究發(fā)現(xiàn)鉛通過靜電作用Delta;H0與酶催化關鍵氨基酸殘基Arg 141發(fā)生了直接作用，使鉛結(jié)合到SOD的活性通道內(nèi)，阻礙了底物O2-“進入酶活性中心的途徑，破壞了SOD的骨架構(gòu)造和二級構(gòu)造，并使活性中心的Cu2+和Zn2+釋放出來，從而導致了SOD活性的下降53。當鉛暴露導致機體各組織氧化損傷程度較深時，產(chǎn)生的ROS會進攻膜構(gòu)造中的磷脂層，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反響31。脂質(zhì)過氧化程度取決于膜構(gòu)造中脂肪酸的飽和程度，不飽和程度越高不飽和鍵越多，越容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反響。脂質(zhì)過氧化將使細胞膜的流動性和通透性改變，導致細胞

20、構(gòu)造和功能的異變，最終導致多器官損傷的發(fā)生54。Gerber和Rehman發(fā)如今鉛暴露的小鼠大腦勻漿液中脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生量隨著鉛染毒濃度的升高而增多55， 56。而且Rehman還研究了小鼠大腦不同區(qū)域鉛的含量，他發(fā)現(xiàn)鉛富集量大的區(qū)域，脂質(zhì)過氧化程度高57。Adanaylo和Oteiza 也證實鉛暴露干擾了小鼠大腦中抗氧化防御體系，作為脂質(zhì)過氧化的生物標志物MDA含量升高58。劉芳麗等人在鉛暴露后的小鼠肝臟和腎臟中均發(fā)現(xiàn)了MDA含量的升高，且參加抗氧化物質(zhì)白藜蘆醇后減輕了鉛的脂質(zhì)過氧化程度59。2.2細胞程度上研究鉛誘發(fā)氧化應激的研究進展動物程度的研究結(jié)果分析了鉛暴露引發(fā)毒性效應與氧化應激的

21、相關性，說明了鉛暴露導致組織器官損傷及引發(fā)各種疾病的重要機理是鉛破壞了體內(nèi)氧化復原狀態(tài)，是機體發(fā)生氧化損傷所致。但是動物程度上的鉛毒性評價并不能解釋鉛暴露誘發(fā)細胞毒性的微觀機制，也就無法研究細胞內(nèi)發(fā)生氧化應激作用機理。因此，很多研究者開場從細胞程度上研究鉛誘發(fā)氧化應激的機理及其與細胞凋亡等細胞毒性的關系。已有研究說明鉛毒性引起細胞損傷與細胞內(nèi)氧化復原狀態(tài)異常有關。Yedjou和Tchounwou研究發(fā)現(xiàn)鉛引起HepG2細胞活力下降與細胞內(nèi)ROS含量升高有關，同時鉛暴露引起細胞內(nèi)MDA含量顯著升高；當鉛暴露同時參加抗氧化物質(zhì)N-乙酰-L-半胱氨酸NAC，會使細胞內(nèi)ROS含量顯著降低，而且顯著進步

22、了細胞成活率。說明NAC抑制了鉛暴露引發(fā)細胞產(chǎn)生的氧化應激效應60。Stacchiotti等人選取小鼠腎臟近曲小管細胞NRK-52E為靶細胞進展鉛暴露后，引起了細胞凋亡和壞死、線粒體損傷等細胞損傷作用，而且伴隨著細胞內(nèi)ROS和RNS含量的升高61。Navarro-Moreno等人同樣在小鼠腎臟近曲小管細胞中發(fā)現(xiàn)了細胞損傷與氧化影響的相關性62，評價了鉛對PC 12細胞的細胞毒性。Jadhav等發(fā)現(xiàn)低濃度鉛急性暴露0.01 mu;M，24 h可激活細胞內(nèi)蛋白激酶CPKC的活性，PKC的活化調(diào)節(jié)了鈣傳輸相關的NMDA受體通道，從而進步了細胞內(nèi)Ca2+含量；而NMDA受體激活將促進興奮型氨基酸谷氨酸

23、鹽的釋放，進而引發(fā)細胞內(nèi)ROS含量上升，產(chǎn)生氧化應激效應。他們進一步研究了鉛與谷氨酸鹽對PC12細胞的結(jié)合暴露效應，發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)ROS含量大幅升高，細胞成活率顯著降低，說明鉛可以通過調(diào)節(jié)PCK活性進而引發(fā)細胞產(chǎn)生氧化損傷63。在鉛暴露誘發(fā)細胞氧化損傷的過程中，細胞內(nèi)有著動力車間;之稱的線粒體起著至關重要的調(diào)節(jié)作用。線粒體的功能與ROS的產(chǎn)生及代謝親密相關，一方面線粒體在氧化代謝制造ATP過程中會伴隨大量ROS的產(chǎn)生，在正常生理條件下其生成速率與線粒體膜電位程度MMP有直接關系64。Suski等人證實線粒體膜電位降低直接導致ROS的產(chǎn)生量增大65；另一方面線粒體內(nèi)的抗氧化防御體系可以有效消除過量的

24、ROS，使自身免受氧化損傷而繼續(xù)發(fā)揮其重要生理功能66。當細胞內(nèi)氧化應激程度較嚴重時，過量蓄積的ROS可氧化浸透性轉(zhuǎn)運通道上的敏感位點，會導致線粒體發(fā)生形態(tài)腫脹、膜電位降低等氧化損傷效應，產(chǎn)生嚴重的細胞毒性67。同時，線粒體在細胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用。Oluwole等人于1998年在science雜質(zhì)上詳細分析了線粒體參與細胞凋亡的相關機理：1線粒體功能的紊亂導致細胞凋亡的產(chǎn)生，包括電子傳遞、氧化磷酸化和ATP產(chǎn)量的紊亂；2線粒體通過釋放細胞色素C等信號因子激活Caspase家族，從而導致細胞凋亡的產(chǎn)生；3線粒體內(nèi)氧化復原電位的改變，導致MMP值變化及調(diào)控Bcl-2家族的磷酸化程度，從而到達

25、調(diào)控細胞凋亡的目的68。王林等人研究了鉛暴露對大鼠腎小管上皮細胞MMP值與ROS含量的關系，發(fā)現(xiàn)鉛染毒使腎細胞內(nèi)ROS大量產(chǎn)生，且伴隨著MMP數(shù)值下降。這是由于蓄積的ROS會直接靶性損傷線粒體膜構(gòu)造，引起MMP值下降，進而導致了細胞凋亡69。徐進等人研究發(fā)現(xiàn)鉛暴露可導致PC 12細胞DNA損傷及細胞凋亡，同時伴隨著凋亡信號通路Bax表達量上升、Bcl-2表達量下降、P53表達量增加且Caspase-3被激活。說明鉛誘發(fā)DNA損傷與P53表達量上調(diào)有關，導致Bax/Bcl-2狀態(tài)失衡和線粒體損傷，從而激活了Caspase-3，進一步引起了細胞凋亡70。2.3 分子程度上研究鉛誘發(fā)氧化應激的研究進

26、展研究說明，重金屬引發(fā)生物體毒性效應是從生物大分子開場的，比方各種酶、非酶功能性蛋白、DNA和RNA等，然后逐步在細胞層面、組織器官層面和個體層面反映出來71，因此研究重金屬與生物大分子的互相作用，能從分子層面上解釋重金屬引發(fā)毒性效應的機理，為與重金屬相關疾病的早期診斷及治療提供根據(jù)。但目前從分子層面上研究鉛與生物大分子的互相作用研究很少。Belatik等人利用FTIR、紫外可見吸收光譜、圓二色譜、熒光光譜儀和X射線光電子能譜等技術從分子程度上比照研究了鉛II與HSA與BSA的結(jié)合形式。Vega等人通過研究鉛與人魚精蛋白HP2的直接作用來解釋鉛的生殖毒性。他們通過多種光譜學手段研究了鉛對HP2

27、構(gòu)造的影響，結(jié)果顯示鉛結(jié)合到HP2的兩個結(jié)合位點處，從而破壞了HP2的生理構(gòu)造，并認為由于HP2對鉛和鋅的親和力類似，因此鉛暴露會競爭性抑制鋅與HP2的結(jié)合從而引發(fā)生殖毒性效應。但分子程度的研究中存在一些方法學問題。首先上述研究中都未考慮熒光內(nèi)濾效應對體系熒光變化的影響。熒光內(nèi)濾效應是指溶液在激發(fā)波長和發(fā)射波長處的光發(fā)生吸收或色散而導致熒光信號減弱的現(xiàn)象。針對這一問題，我們課題組已經(jīng)提出利用內(nèi)濾校正公式和外濾校正裝置來消除內(nèi)濾效應影響的方法72， 73，但是內(nèi)濾校正公式的適用性有待進一步研究。因此最好的校正內(nèi)濾的方法應該是防止內(nèi)濾效應的產(chǎn)生74。一般認為，讓溶液在激發(fā)波長到掃描的發(fā)射波長范圍內(nèi)

28、的吸光度小于0.1時，可以忽略內(nèi)濾效應的影響。由于沒有校正內(nèi)濾效應，利用Stern-Volmer方程判別熒光猝滅機理的類型就存在問題。事實上，最準確的熒光猝滅類型判別方法是考察反響體系熒光壽命的變化75。另一個問題是利用雙對數(shù)Stern-Volmer方程 計算結(jié)合位點數(shù)和結(jié)合常數(shù)，并進一步通過熱力學常數(shù)的計算確定結(jié)合作用力類型。但這個方程當且僅當配體與受體的結(jié)合屬于無限協(xié)同反響infinite cooperativity，受體的結(jié)合位點全空或者全滿時才能用來計算結(jié)合常數(shù)及結(jié)合位點數(shù)75。近幾年等溫滴定微量熱技術ITC的開展為研究配體與受體互相作用過程的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點數(shù)及作用力類型成為可能7

29、6， 77。針對上述問題，我們利用熒光分析法、紫外可見吸收光譜、圓二色譜、等溫滴定微量熱技術、分子對接模擬等方法，并考慮內(nèi)濾效應對反響體系的干擾，分別研究了鉛與SOD、溶菌酶、人絨毛膜促性腺激素以及DNA的互相作用機理，糾正了鉛與生物大分子互相作用研究中的方法學問題53， 78-80。分子程度上研究鉛的氧化應激效應，就是要通過研究鉛與氧化應激相關酶的直接作用，說明酶活性變化的分子機理，提醒氧化應激過程中細胞內(nèi)活性氧程度發(fā)生變化的原因，從而更加準確解釋鉛暴露誘發(fā)氧化應激引發(fā)的相關病變，為開發(fā)有效拮抗鉛毒性、保障安康的治療方案提供實驗數(shù)據(jù)支持。目前從分子程度上研究鉛與氧化應激相關酶的直接作用機理研究較少。前文已經(jīng)提及，我們從斑馬魚程度研究了鉛誘發(fā)氧化應激過程中SOD活性降低的分子機理，并比照分析了SOD在體內(nèi)和體外鉛暴露實驗后酶活性變化的相關性。該研究為從分子程度上準確評價重金屬鉛對氧化應激相關酶的毒性效應機理提供了方法學參考。3. 展望根據(jù)世界衛(wèi)生組織WHO2002年的世界安康報告，鉛暴露是威脅人類安康的全球前20位疾病風險因素之一。目前很多科研工作者關注新型環(huán)境污染物如納米材料、阻燃劑等的毒理學研究，但包括重金屬鉛在內(nèi)的毒性更強的傳統(tǒng)持久性有毒環(huán)境污染物，其引發(fā)的安康問題更需值得關注，而且在鉛的毒理學研究中仍然存在很多尚未說明的根底科學問題，需要進展深化的研究。重金屬鉛通過各種