大鼠卵泡刺激素FSH酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠卵泡刺激素（FSH）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96TIU/L-24IU/L使用目的：/本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中卵泡刺激素（FSH）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠卵泡刺激素（FSH）水平。用純化的大鼠卵泡刺激素（FSH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入卵泡刺激素（FSH）,再與HRP標(biāo)記的卵泡刺激素（FSH）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的卵泡刺激素（FSH）呈正

2、相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠卵泡刺激素（FSH）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlx1瓶2酶標(biāo)試劑6mlx1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（48IU/L）X1瓶3酶標(biāo)包被板12孔X8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液X1瓶4樣品稀釋液6mlx1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6mlx1瓶11封板膜2張16顯色劑B液6mlx1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.不能檢測(cè)含NaN3勺樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步

3、驟.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。24IU/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150注的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150口標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12IU/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150M的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6IU/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150M的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150日標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3IU/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150M的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150日標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液IU/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150M的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150日標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50人待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40M,然后再加待測(cè)樣品10u（樣品最終稀

4、釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。.溫育:用封板膜封板后置37c溫育30分鐘。.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水30倍稀釋后備用.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 TOC o 1-5 h z 重復(fù)5次，拍干。/.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50空白孔除外。.溫育：操作同3。.洗滌：操作同5。.顯色:5每孔先加入顯色劑A50d,再加入顯色劑B50輕輕震蕩混勻，37c避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50人終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后

5、15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品.37七反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37c反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B,37c顯色10分鐘力叭終止就15分鐘之內(nèi)讀0D值計(jì)算計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng).試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶機(jī)洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 TOC o 1-5 h z .各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀