免疫學(xué)檢測技術(shù)以及應(yīng)用

1、關(guān)于免疫學(xué)檢測技術(shù)及應(yīng)用第一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫學(xué)檢測技術(shù)應(yīng)用： 1. 疾病的診斷、治療效果評價及發(fā)病機理探討： 如：感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)、腫瘤等 2. 免疫分子的定性、定量測定： 如：細(xì)胞因子、粘附分子、細(xì)胞受體、補體、抗體等第二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 3. 抗原物質(zhì)的定性、定量檢測： 如：病原微生物及其代謝產(chǎn)物，組織細(xì)胞、蛋白質(zhì)等 4. 免疫細(xì)胞的分離、鑒定及功能測定： 如：T細(xì)胞及其亞群等第三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可發(fā)生特異性結(jié)合，

2、呈現(xiàn)的某種反應(yīng)現(xiàn)象。 第四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)有以下幾個特點: 1.抗原與抗體結(jié)合是特異性結(jié)合 表位(抗原)超變區(qū)(抗體) 2.抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合 氫鍵、疏水鍵、靜電引力和范德華力(Van der waals force) 、電子云力的合力。 抗原和抗體可解離,性質(zhì)不變。 第五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 3.抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段 （1）特異性結(jié)合階段 此階段需時短,僅需幾秒到幾分鐘,無可見 反應(yīng)出現(xiàn) （2）可見反應(yīng)階段 需時較長,數(shù)分,數(shù)小時或數(shù)日出現(xiàn)可見現(xiàn) 象,表現(xiàn)為沉淀,凝集,細(xì)胞溶解等 4.抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)明

3、顯可見的反應(yīng)現(xiàn) 象,與兩者的分子比例密切相關(guān) 第六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素： 1.電解質(zhì): 在中性或堿性條件下,抗原抗體均帶負(fù)電荷,適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會使它們失去一部分負(fù)電荷而互相結(jié)合,出現(xiàn)明顯的沉淀或凝集現(xiàn)象。 2.溫度: 37 3. 酸堿度: pH6-8第八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)包括： 沉淀反應(yīng) 凝集反應(yīng) 溶解反應(yīng) 補體結(jié)合反應(yīng) 中和反應(yīng) 已知抗體 檢測未知抗原； 已知抗原 檢測未知抗體。第九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Sensitivity of vari

4、or immunoassays第十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、沉淀反應(yīng)(precipitation) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在條件下結(jié)合，出現(xiàn)沉淀物的現(xiàn)象。 沉淀反應(yīng)的試驗方法：環(huán)狀法 絮狀法 瓊脂中沉淀法 第十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月瓊脂中沉淀反應(yīng)法： 雙向免疫擴(kuò)散(double immunodiffusion) 單向免疫擴(kuò)散(single radial immunodiffusion) 對流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis) 火箭電泳(rocket electrophoresis) 免疫電泳(immunoel

5、ectrophoresis) 第十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、凝集反應(yīng)(agglutination) 顆粒性抗原或吸附于顆粒上的可溶性抗原(或抗體)于相應(yīng)抗體(或抗原)，在電解質(zhì)存在下出現(xiàn)凝集物的現(xiàn)象。第十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月凝集反應(yīng)包括： 直接凝集反應(yīng) (direct agglutination) 間接(被動)凝集反應(yīng)(indirect/passive agglutination) 間接凝集抑制試驗(indirect agglutination inhibition test) 協(xié)同凝集試驗(coag

6、glutination test) 抗球蛋白試驗(antiglobulin test，Coombs test)第十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三.免疫標(biāo)記技術(shù) 用熒光素、同位素、酶及發(fā)光等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體(或抗原)，與抗原(或抗體)進(jìn)行反應(yīng)，通過檢測示蹤物質(zhì)，分析被檢抗原(或抗體)的存在或含量的方法。 靈敏度：高，1X10-4 1X10-5ug抗體/ml 應(yīng)用：微量物質(zhì)的定性、定量或定位。第十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫標(biāo)記技術(shù)的基本類型：（一）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence techniq

7、ue) （二）免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) （三）同位素標(biāo)記技術(shù)(isotope labelling technique)（四）發(fā)光免疫測定(luminescent immuno-assay, LIA)（五）免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)(colloidal gold immunogold staining)第十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）免疫熒光技術(shù)(又稱熒光抗體技術(shù)) 原理：用熒光素(如異硫氰酸熒光素、羅丹明B200等) 標(biāo)記抗體(熒光抗體)，用熒光抗體浸染細(xì)胞或組織切片，抗原與熒光抗體結(jié)合，于熒光顯微鏡下觀察熒光，確定被檢抗原的存在。 免疫熒

8、光技術(shù)包括： 直接法 間接法 間接補體增強法 第十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Direct and indirect immunofluore-scence staining of membrane antigen (mAg). 第二十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques) 是將抗原抗體反應(yīng)與酶催化底物的作用相結(jié)合的一種方法。主要有兩種類型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫測定（enzyme immunoassay, EIA）第二十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1.免疫酶染色(又稱免疫組化技術(shù)

9、, immunohistochemistry technique) 原理：用酶(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等) 標(biāo)記抗體(酶標(biāo)抗體)，將酶標(biāo)抗體與抗原(細(xì)胞或組織切片)作用，抗原與酶標(biāo)記抗體結(jié)合，加底物，酶催化底物產(chǎn)生有色物質(zhì)，觀察結(jié)果。 應(yīng)用：細(xì)胞內(nèi)、組織內(nèi)抗原的定性、定量和定位檢測。第二十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.酶免疫測定 酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 原理：將抗原(或抗體)結(jié)合于固相載體；與抗體(或抗原)反應(yīng)；加酶底物，酶促反應(yīng)。 靈敏度：2X10-5 gml 應(yīng)用：廣泛，可檢測微量抗體和抗

10、原(如微生物成分、激素、細(xì)胞因子、粘附分子等）。 第二十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 ELISA法： 直接法 間接法 雙抗體夾心法(雙位點法) 競爭法第二十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月ELISA第二十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月(三) 同位素標(biāo)記技術(shù)(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA) 是一種用放射性同位素分析抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合方法。 優(yōu)點：靈敏度高, 可檢測0.001pgmL 特異性強 應(yīng)用：微量抗原和抗體檢測。 缺點：不穩(wěn)定，廢物處理麻煩等。第二十六張，PPT共

11、八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）發(fā)光免疫分析(luminescent immuno-assay, LIA) 原理：用發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗體(或抗原),再同抗原(或抗體)進(jìn)行反應(yīng)，以發(fā)光現(xiàn)象作為抗原抗體反應(yīng)的指示系統(tǒng)。 應(yīng)用：定量檢測抗原、抗體。 發(fā)光分為：化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence) 生物發(fā)光（bioluminescence）第二十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月化學(xué)發(fā)光原理： 發(fā)光物質(zhì) 激發(fā)態(tài)分子 基態(tài)分子 釋放光子(發(fā)光) 化學(xué)發(fā)光劑：魯米諾（luminol ） 反應(yīng)劑：過氧化陰離子反應(yīng)劑第二十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（五）免疫膠體金技術(shù)(c

12、olloidal goldimmunogold staining) 原理：膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)(如抗體) + 組織細(xì)胞(待測) 觀察結(jié)果(用電鏡、光鏡或肉眼) 應(yīng)用：免疫組織化學(xué)定位，測定細(xì)胞表面標(biāo)志和細(xì)胞內(nèi)成分。 優(yōu)點：易行、省時、價廉、靈敏度高。 膠體金：用還原法將四氯金酸(HAuCl4)制成特定大小的金顆粒，該顆粒由于靜電作用呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。第二十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月淋巴細(xì)胞的檢測技術(shù)一.淋巴細(xì)胞的分離 1.外周血單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞 90%)的分離 密度梯度離心法 (密度為1.077)(2000rpm,15min)第三十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于20

13、22年6月2.尼龍纖維分離法： 單個核細(xì)胞 通過尼龍纖維柱 B細(xì)胞和單核細(xì)胞(粘附特性) T細(xì)胞(非粘附性)。3.流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry, FCM）： 熒光素標(biāo)記抗體待檢細(xì)胞單列經(jīng)過FACS分離（熒光素不同）的細(xì)胞 * FACS：熒光激活細(xì)胞分類儀(fluore- scent activated cell sorter)第三十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月流式細(xì)胞儀第三十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月4.磁珠分離術(shù)： (1)直接法： 免疫磁珠(磁性微粒結(jié)合抗體) + 細(xì)胞 通過磁場 分離磁珠結(jié)合細(xì)胞

14、 +解離劑 獲純化細(xì)胞 (2)間接法： 免疫磁珠(磁性微粒結(jié)合第二抗體) + 細(xì)胞 + 抗體 通過磁場 分離磁珠結(jié)合細(xì)胞 +解離劑 獲純化細(xì)胞 第三十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 淋巴細(xì)胞的功能測定技術(shù)（一）體外法 1淋巴細(xì)胞增殖檢測3H-胸腺嘧啶核苷參入法（3H-TdR）: 間接觀察DNA合成含量。靈敏度高，具有放射性。四甲基偶氮唑鹽法（MTT）: MTT商品名為噻唑藍(lán)。原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶可將外源性MTT還原成藍(lán)紫色結(jié)晶-甲瓚（formazan）, DMSO使其溶解，酶標(biāo)分析儀檢測。簡便，靈敏度高，穩(wěn)定性差。第

15、三十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二甲氧唑黃比色法（XTT）：XTT是一種MTT類似的四唑氮衍生物，活細(xì)胞將其還原成橘黃色甲瓚產(chǎn)物，水溶性，可直接酶標(biāo)儀測定。加上電子耦合劑硫酸酚嗪甲酯（PMS）可提高其效率?？焖?、簡便靈敏。XTT水溶液不穩(wěn)定，現(xiàn)用現(xiàn)配，穩(wěn)定性差。第三十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月四唑單鈉鹽法（WST-1）: WAT-1是一種類似于MTT的水溶性四唑鹽，在PMS存在下被活細(xì)胞脫氫酶還原成橙黃色甲瓚產(chǎn)物，水溶性，直接酶標(biāo)儀測定。WAT-1的水溶液比MTT 和XTT穩(wěn)定。結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高。可多次用酶標(biāo)儀重復(fù)檢測結(jié)果。Cell-Counting Kit

16、-8（CCK-8）: CCK-8中含有WST-8，較WST-1更新的四唑鹽，檢測原理與WST-1類似。操作更簡便，檢測結(jié)果更穩(wěn)定、溶解性更高、靈敏度更高、保存時間更長。第三十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（放射性核素攝取法）第三十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.細(xì)胞毒試驗(1) NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性測定 放射性核素釋放法 放射性核素標(biāo)記靶細(xì)胞(K562細(xì)胞) + 效應(yīng)細(xì)胞 培養(yǎng) 靶細(xì)胞破壞，釋放放射性核素 測cpm值 NK細(xì)胞毒活性(%)= 100%實驗孔cpm值-自然釋放孔cpm值最大釋放孔cpm值-自然釋放孔cpm值第四十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年

17、6月 乳酸脫氫酶(LDH)釋放法 靶細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞) + 效應(yīng)細(xì)胞(小鼠脾胞)LDH釋放 + LDH底物(氧化型輔酶I、吩嗪二甲酯硫酸鹽和硝基氯化四氮唑藍(lán)) 形成甲基化合物(色) 測定OD570值 NK細(xì)胞毒活性(%)= 100%實驗孔OD值-自然釋放孔OD值最大釋放孔OD值-自然釋放孔OD值第四十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC）第四十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Generation of effector

18、 CTLs第四十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月MHC tetramers第四十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Two pathways of target-cell apoptosis stimulated by CTLs第四十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 In vitro cell-mediated lympholysis (CML) assay第四十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT) 抗原包被 B細(xì)胞 抗體產(chǎn)生并附著 第二抗體(酶標(biāo)記) 底物 顯色 抗體(抗細(xì)胞因子)包被 + T細(xì)胞 產(chǎn)生細(xì)胞因子并與

19、抗體結(jié)合 + 第二抗體(酶標(biāo)記) 底物 顯色第四十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）體內(nèi)法 抗原定量注入皮內(nèi)，4872小時后觀察結(jié)果。 結(jié)果判定： 陽性：注射局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)，直徑0.5cm 弱陽性：硬結(jié)直徑0.5cm 陰性：無變化 實際意義： 陽性 細(xì)胞免疫功能正常者 弱陽性或陰性 多為細(xì)胞免疫功能低下者 * 常用的抗原為結(jié)核菌素(OT) 、PHA第五十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月皮內(nèi)注射法第五十三張，PPT共八

20、十八頁，創(chuàng)作于2022年6月劃痕法第五十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子的檢測技術(shù)一、 生物學(xué)檢測技術(shù) 依賴細(xì)胞株測定法 二、 免疫學(xué)檢測技術(shù) ELISA法三、分子生物學(xué)檢測技術(shù) 分子雜交、PCR 等檢測mRNA 第五十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子檢測的特點 樣品含量低樣品具有時效性生物效應(yīng)特異性差第五十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Figure 14-12第五十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子的功能 Cell act

21、ivation Cell growth and differentiation Induction of MHC Induction of cytokine receptors Promotion of antibody class- switching 第六十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月影響細(xì)胞因子作用特異性的因素 Only antigen-activated lymphocytes express receptors Different combinations of receptor subunits result in low-, intermediate-, or hi

22、gh-affinity receptors Requirement of cell-cell interaction Short half-life of cytokines Cytokine antagonists Synergistic and antagonistic interactions among cytokines 第六十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月限制細(xì)胞因子臨床應(yīng)用的因素High local concentrations of cytokines during immune response cannot be mimicked clinically Sho

23、rt half-life of cytokines Pleiotropic effects can cause unpredictable side-effects第六十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子的生物學(xué)檢測檢測方法與原理 細(xì)胞增殖或增殖抑制試驗 細(xì)胞病變抑制試驗 細(xì)胞毒試驗 細(xì)胞趨化試驗第六十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 檢測中的操作注意要點 靶細(xì)胞的選擇與培養(yǎng) 檢測標(biāo)本的制備 顯示檢測結(jié)果2022/7/18第六十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月靶細(xì)胞的選擇與培養(yǎng) 1、對所測的細(xì)胞因子有特異的敏感性 2、易培養(yǎng)、保存、生物學(xué)特性穩(wěn)定 3、

24、有良好的生長狀態(tài) 4、種屬適配 2022/7/18第六十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 各類細(xì)胞因子檢測的常用靶細(xì)胞 細(xì)胞因子 實驗系統(tǒng) 干擾因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法 IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4 IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPO IL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2 IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4第六十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月各類細(xì)胞因子檢測的常用靶細(xì)胞 細(xì)胞因子 實驗系統(tǒng) 干擾因素

25、 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒細(xì)胞（M、H）趨化法 GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5 TNF/ L929 （M、H）細(xì)胞毒法 IFN wish（H）病變保護(hù)法 IFN- IFN- L929（M）病變保護(hù)法 IFN- IFN- 第六十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月檢測標(biāo)本的準(zhǔn)備 1、分離特定的產(chǎn)生細(xì)胞 2、對產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)、激活 3、選擇適當(dāng)?shù)氖占瘯r間2022/7/18第六十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月顯示檢測結(jié)果

26、1、細(xì)胞增殖狀態(tài)的顯示： 放射性核素?fù)饺敕ā?胞內(nèi)酶活性顯示法 活細(xì)胞染色法 細(xì)胞熒光測定法 2、細(xì)胞毒或細(xì)胞病變狀態(tài)的顯示 活細(xì)胞染色法 胞內(nèi)酶活性顯示法 DNA斷片測定法2022/7/18第六十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 依賴細(xì)胞株測定法PBMC + PHA 培養(yǎng) 取上清液 + CTLL-2細(xì)胞 培養(yǎng) + MTT 培養(yǎng) 測OD570值 第七十張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月TNF對靶細(xì)胞的細(xì)胞毒活性 TNF對小鼠L929成纖維細(xì)胞株具有細(xì)胞毒活性，細(xì)胞死亡率與TNF生物學(xué)活性成正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)晶紫染色死細(xì)胞 MTT檢測活細(xì)胞 如同時加用轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素D，可提

27、高靶細(xì)胞對TNF的敏感性10-100倍。第七十一張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 濾膜：計數(shù)受趨化細(xì)胞趨化因子細(xì)胞趨化試驗原理示意第七十二張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測 分泌型細(xì)胞因子的檢測 ELISA ELISPOT RT-PCR（分子生物學(xué)） 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測 免疫組化技術(shù)第七十三張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子受體的存在 形式 膜型細(xì)胞因子受體 分泌型細(xì)胞因子受體2022/7/18第七十四張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子受體的檢測方法 膜型細(xì)胞因子受體的檢測： 配體檢測法 抗體檢測法 分泌型細(xì)胞因子受體的

28、檢測： 標(biāo)記抗體檢測法2022/7/18第七十五張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 細(xì)胞因子檢測臨床意義細(xì)胞因子 正常對照 病人 疾病 年代及受體 （pg/ml） （pg/ml） IL-1 0.160.17 0.530.57 腎細(xì)胞癌 2003 0.3 18.8 心絞痛 1996 166.7 38.528.8 胰腺炎 1994 IL-2 2.40.8 10.81.8 急性缺血性綜合征 1999 IL-4 3.340.84 4.051.02 支氣管高反應(yīng)性 2003 IL-6 54.1 485.2 瘧疾 2004 1.792.03 8.9113.12 腎細(xì)胞癌 2002 42 1620

29、敗血癥 2001 2.10.1 101.6 風(fēng)濕 2000 2.55 4.29 非酒精性脂肪肝 2003 1.10.1 18.62.1 原發(fā)性甲狀旁腺功 1996 能亢進(jìn)癥 4.340.9 97.30.97 宮外孕 1996 12.30.8 9412.1 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 1999 0.39 16 關(guān)節(jié)炎 2004 1.20.6 10.81.8 急性缺血性綜合征 1999IL-6受體 25.11(ng/ml) 41.71.2(ng/ml) 原發(fā)性甲狀旁腺功能 1996（可溶性） 亢進(jìn)癥第七十六張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 續(xù)表細(xì)胞因子 正常對照 病人 疾病 年代及受體 （pg/ml）

30、 （pg/ml）IL -8 63 331 敗血癥 2001 3.8 43.68 非酒精性脂肪肝 2003 16.3 1078181.5 泌尿道感染 1993 1 17.6 肝癌 2003 4.80.5 27.52.6 輕度子宮內(nèi)膜異位癥 2003 530.265.1 重度子宮內(nèi)膜異位癥IL-10 14.1 1099.3 嚴(yán)重瘧疾 2004 9.21.5 17.74.4 非小細(xì)胞肺癌 2002 214.2 轉(zhuǎn)移癌IL-13 35.2012.70 92.699.87 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 2005IL-15 16.24 356 腹膜炎 2000IL-16 16323 28746 輕度子癇 2008 （正

31、常妊娠） 51558 嚴(yán)重子癇IL-18 2811 5121 充血性心力衰竭 2000IL-21 46690(ng/ml) 1051335(ng/ml) 原發(fā)性干燥綜合征 20072022/7/18第七十七張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第七十八張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的測定技術(shù)（ICS） 激活細(xì)胞：多克隆激活劑，如佛波酯（PMA）和離子霉素（ionomycin）等或特定的抗原； 抑制細(xì)胞因子釋放：阻斷胞內(nèi)高爾基體介導(dǎo)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運，用布雷菲德菌素A（Brefeldin, BFA）與莫能霉素（Monensin）等藥物； 增加細(xì)胞膜通透性：多聚甲醛固定和皂角苷破膜； 熒光標(biāo)記的抗細(xì)胞因子的特異抗體與細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子結(jié)合，通過流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry,FCM）進(jìn)行檢測。第七十九張，PPT共八十八頁，創(chuàng)作于2022年6月Principle of Plate-Based ICS AssaysAntigenic stimulus + brefeldin AIncubate 6-24 h Fix cells Permeabilize Stain20 ml PBMC/WB sampleGate on cellsof interest第八十張，PPT共八十八頁，