免疫細(xì)胞分離以及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)

1、關(guān)于免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)第一張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離 一、 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 二、 淋巴細(xì)胞的分離 三、 T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離 四、 T細(xì)胞亞群的分離第二張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 一、 細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群 二、 B細(xì)胞表面標(biāo)志 三、 NK細(xì)胞表面標(biāo)志第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用 一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法 二、 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義思考題小結(jié) 第三張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分

2、離 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 淋巴細(xì)胞的分離 T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離 T細(xì)胞亞群的分離第五張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral mononuclear cells, PMNC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte）。 Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。 第六張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞分離基本原理不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同第七張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月不同細(xì)胞密度不同人的紅細(xì)胞密度為1.093 粒細(xì)胞密度

3、為1.092 單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為1.075-1.090 第八張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月不同細(xì)胞密度不同第九張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月用1.0770.001的分層液可將細(xì)胞分離 第十張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月密度梯度離心(Ficoll)離心第十一張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二 、淋巴細(xì)胞分離貼壁粘附法 吸附柱過(guò)濾法 磁鐵吸引法 Percoll 分離液法 （連續(xù)密度梯度離心）（去單核細(xì)胞）第十二張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月E花環(huán)沉降法 尼龍毛柱分離法 三、T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離第十三張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于20

4、22年6月四、T細(xì)胞亞群的分離 親和板結(jié)合分離法 磁性微球分離法 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 第十四張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 第十五張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月磁珠大小可以選擇第十七張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目大磁珠小磁珠對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。對(duì)流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光?？芍苯由狭魇郊?xì)胞儀檢測(cè)，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡(jiǎn)單，分離可在試管

5、中完成。需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分離細(xì)胞。 收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時(shí)間分離速度快。分離速度慢。分離成本成本低。需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分離細(xì)胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行。第十八張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二十張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月免疫磁珠法細(xì)胞分選過(guò)程第二十一張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月免疫磁珠細(xì)胞分選裝置第二十二張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)第二十三張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流式細(xì)胞分析儀第二十四張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二

6、節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 常用于鑒定和檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。 第二十五張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞表面分化抗原（CD抗原）適用于T、B細(xì)胞的分離已知CD抗原細(xì)胞亞群的分離未知CD抗原細(xì)胞亞群的分離（陰性分選）第二十六張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、T細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性T細(xì)胞 （help T cell,Th）CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞 （cytotoxic T cell,Tc or CTL）CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 （regulatory T

7、 cell,Tr or Treg）第二十七張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、B細(xì)胞表面標(biāo)志 SmIg、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體，部分CD分子是B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以SmIg為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。 CD19/CD5分子：可將B細(xì)胞區(qū)分為B1細(xì)胞和B2細(xì)胞，B1細(xì)胞為CD19和CD5雙陽(yáng)性，而B(niǎo)2細(xì)胞僅為CD19陽(yáng)性，B2細(xì)胞為通常所指的B細(xì)胞。 第二十八張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、NK細(xì)胞表面標(biāo)志 人類NK細(xì)胞表面標(biāo)志主要以CD16、CD56來(lái)認(rèn)定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NK細(xì)胞。 第二十九張，PPT共四十頁(yè)，

8、創(chuàng)作于2022年6月T細(xì)胞及NK細(xì)胞第三十張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志第三十一張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義第三十二張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法 第三十三張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)是評(píng)價(jià)免疫功能的重要指標(biāo)。 對(duì)CD4+和CD8+T細(xì)胞的測(cè)定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性

9、疾病和移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測(cè)。 第三十四張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月臨床常見(jiàn)疾病中的T 淋巴細(xì)胞的變化 第三十五張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月思考題1.免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離純化？2.淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？3.將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？4.形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？5.T細(xì)胞和B細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？第三十六張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6.什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？7.細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法有哪些？8.利用細(xì)胞表面標(biāo)志（CD抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾種？9.T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)志是什么？10.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義是什么？第三十七張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月小 結(jié)淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對(duì)其表面標(biāo)志的檢測(cè)。常用于鑒定和檢測(cè)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志是CD抗原。第三十八張，PPT共四十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月進(jìn)一步區(qū)分淋