同型半胱氨酸測定試劑(盒)技術(shù)審評規(guī)范

1、 PAGE 66 PAGE 29 同型半胱氨酸測定試劑（盒）技術(shù)審評規(guī)范（2016版）本規(guī)范旨在指導(dǎo)注冊申請人對同型半胱氨酸測定試劑（盒）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。本規(guī)范是對同型半胱氨酸測定試劑（盒）的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化，并依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。本規(guī)范是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本規(guī)范。本規(guī)范是在現(xiàn)

2、行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本規(guī)范相關(guān)內(nèi)容也將進行適時調(diào)整。一、適用范圍同型半胱氨酸測定試劑（盒）用于體外定量測定人血清或血漿中同型半胱氨酸的濃度。從方法學(xué)考慮，本規(guī)范主要指基于分光光度法原理，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學(xué)實驗室采用酶循環(huán)法進行同型半胱氨酸定量檢驗所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑。本規(guī)范不適用于干式同型半胱氨酸測定試劑（盒）。依據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知（食藥監(jiān)械管2013242號）同型半胱氨酸測定試劑盒管理類

3、別為類，分類代號為6840。二、注冊申報資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法（以下簡稱辦法）和關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）相關(guān)要求。下面著重介紹與同型半胱氨酸測定試劑（盒）預(yù)期用途有關(guān)的臨床背景情況。體內(nèi)的同型半胱氨酸（HCY)來源于蛋氨酸，蛋氨酸主要來源于食物。蛋氨酸分子含有甲基，在ATP作用下生成S腺苷蛋氨酸后，可通過各種轉(zhuǎn)甲基作用為體內(nèi)已知的50多種具有重要生理活性的物質(zhì)提供甲基

4、。血漿中同型半胱氨酸分為結(jié)合型和游離型兩種，以四種分子形式存在。我們通常測定的是血漿中總同型半胱氨酸。國外，1995年Bouskey等匯集分析了27個研究單位、總?cè)藬?shù)為4666例的臨床研究結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)10%的冠心病患者是由高同型半胱氨酸血癥所致。血漿HCY每增加5mol/L，相當于血清膽固醇增加0.5mol/L（20mg/dl）造成的對血管危害。一項對587例血管造影確診的冠心病患者進行的4.6年隨訪研究，共有64例死亡。四年時間里，同型半胱氨酸水平9mol/L者死亡率為3.8%，而相比同型半胱氨酸水平15mol/L者死亡率為24.7%。在分析中，去除其它可能的影響因素（年齡、性別、吸煙史和

5、高膽固醇血癥等），同型半胱氨酸水平為9-14.9mol/L患者病死率是血清水平9mol/L患者的1.9倍（p0.05）；而同型半胱氨酸水平為15-19.9mol/L患者病死率則是血清水平9mol/L患者的2.8倍（p0.05）；同型半胱氨酸水平為20mol/L患者病死率則是血清水平9mol/L患者的4.5倍（p0.02）。上述研究表明，高同型半胱氨酸血癥是冠心病有力的危險預(yù)測因子。（二）主要原材料研究資料（如需提供）主要原材料（例如抗體、膠乳顆粒及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗驗證研究資料；質(zhì)控品、校準品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗

6、方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；2.反應(yīng)原理介紹；3.確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準品、樣本、抗體、膠乳顆粒等）的研究資料；4.確定反應(yīng)最適條件研究；5.其他：如基質(zhì)效應(yīng)等。（四）分析性能評估資料申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。申請人應(yīng)按以下要求提供體外診斷試劑性能評估資料：1.申請人名稱；2.性能評估方法、要求；3.性能評估所使用試劑（包括校準品、質(zhì)控品）的名稱、批號、有效期；4.應(yīng)提供使用的儀器型號、序列號（SN）；5.性能評

7、估的時間、地點、檢驗人員；6.性能評估的具體數(shù)據(jù)及分析判定；7.性能評估審批人簽字、審批時間。對于本試劑盒，建議著重對以下分析性能進行研究：準確度對測量準確度的評價依次包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。（1）國家（國際）標準品的偏差分析如果研究項目有相應(yīng)國家（國際）標準品，則使用國家（國際）標準品進行驗證，重點觀察對相應(yīng)標準品檢測結(jié)果的偏差情況。（2）方法學(xué)比對采用普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差

8、范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。（3）回收率使用擬申報試劑（盒）在人源樣本中加入質(zhì)量較好的純品物質(zhì)或其溶液，計算回收率。（使用試劑（盒）測試純品在人源樣本的測值變化，重點關(guān)注純品的情況。） 2.空白吸光度用指定空白樣品測試試劑（盒），在說明書規(guī)定參數(shù)下，記錄測試反應(yīng)完成(T)后的吸光度（A），測試結(jié)果即為試

9、劑空白吸光度測定值。注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準液等。3.分析靈敏度用試劑（盒）測試同型半胱氨酸已知濃度在（515）mol/L的樣本，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下的吸光度差值。（1）對于終點法測試的試劑，10.0mol/L樣本的吸光度變化（A）應(yīng)不小于0.02。（2）對于速率法測試的試劑，10.0mol/L樣本的吸光度變化率（A/min）應(yīng)不小于0.01。4.重復(fù)性測量批內(nèi)精密度的評估應(yīng)包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)，通常選用該檢測指標的正常參考值（范圍）附近和異常樣本，建議采用與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進行試驗。選擇重復(fù)測試濃度為（10.02.0）m

10、ol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5%和（20.04.0）mol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于3%。5.批間差用（10.02.0）mol/L的血清樣品或質(zhì)控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值，計算相對極差。6.線性范圍建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度達到預(yù)期測定上限的混合人血清，制備低濃度樣本時應(yīng)充分考慮稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇711個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減

11、少數(shù)據(jù)點（最終不得少于7個水平）直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。驗證線性范圍時可選擇57個濃度水平。7.干擾試驗對樣本中常見的干擾物質(zhì)進行檢測，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等。方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。8.校準品、質(zhì)控品賦值應(yīng)參照GB/T 214152008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。9.其他需注意問題對于適用多個機型的

12、產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。如有多個包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證，如不同包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品的分析性能評估。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，申請人應(yīng)對不同的抗凝劑進行研究以確認最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。（五）參考區(qū)間確定資料應(yīng)提交驗證參考值（范圍）

13、所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于120例。若引用針對中國人群參考值范圍研究的相關(guān)文獻，應(yīng)明確說明出處，并進行驗證。參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究主要包括效期穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于效期穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。應(yīng)對樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限進行研究，并在說明書中樣本要求處明示。（注

14、：若有相關(guān)文獻中已明確說明，亦可作為依據(jù)。）（七）臨床評價資料體外診斷試劑臨床評價是指申請人或者備案人通過臨床文獻資料、臨床經(jīng)驗數(shù)據(jù)、臨床試驗等信息對產(chǎn)品是否滿足使用要求或者預(yù)期用途進行確認的過程。無需進行臨床試驗的體外診斷試劑，申請人應(yīng)當通過對涵蓋預(yù)期用途及干擾因素的臨床樣本的評估、綜合文獻資料等非臨床試驗的方式對體外診斷試劑的臨床性能進行評價。申請人應(yīng)當保證評價所用的臨床樣本具有可追溯性。免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄由國家食品藥品監(jiān)督管理總局制定、調(diào)整并公布。臨床試驗（包括與已上市產(chǎn)品進行的比較研究試驗）是指在相應(yīng)的臨床環(huán)境中，對體外診斷試劑的臨床性能進行的系統(tǒng)性研究。所申報產(chǎn)品不符

15、合免于臨床試驗情形的，應(yīng)參照體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則、北京市第二類體外診斷試劑臨床試驗指導(dǎo)原則及下述要求進行臨床試驗。1.研究方法選擇境內(nèi)已批準上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。2.臨床研究單位的選擇應(yīng)選擇至少兩家獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認可的醫(yī)療機構(gòu)，臨床研究單位實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。3.倫理要求臨床試驗必須符合赫爾辛基

16、宣言的倫理學(xué)準則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗用樣本，如血液、羊水、胸水、腹水、組織液、胸積液、組織切片、骨髓等的獲得或試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見及受試者的知情同意書。對于例外情況，如客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床試驗對受試者幾乎沒有風(fēng)險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準后免于受試者的知情同意。4.臨床試驗方案臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)

17、的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用臨床金標準對額外的樣本類型進行驗證。5.研究對象選擇臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究

18、對象。申請人在建立病例納入標準時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。研究總體樣本數(shù)不少于200例，應(yīng)充分考慮對病理值樣本的驗證，異常值樣本數(shù)建議不少于80例，其中高、低值各40例。血清/血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。如果聲稱同時適用于血清/血漿樣本，那么血清/血漿的試驗例數(shù)參照上述要求，并應(yīng)同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性（采用考核試劑評價），其

19、中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少兩家臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。6.統(tǒng)計學(xué)分析對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結(jié)

20、合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述 = 1 * GB3 臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡

21、介等基本情況介紹。 = 2 * GB3 病例納入/排除標準、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。 = 3 * GB3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。 = 4 * GB3 統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。（2）具體的臨床試驗情況 = 1 * GB3 考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。 = 2 * GB3 對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。 = 3 * GB3 質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。 = 4 * GB3 具體試驗過程，樣本

22、檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。（3）統(tǒng)計學(xué)分析 = 1 * GB3 數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。 = 2 * GB3 定量值相關(guān)性和一致性分析用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R20.95），計算回歸系數(shù)及截距的95%可信區(qū)間（對于理想的可信區(qū)間，回歸系數(shù)應(yīng)涵蓋“1”, 截距應(yīng)涵蓋“0”）。給出考核試劑與參比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）及比值（相對偏倚/偏差）散點圖，觀察并分析各點的偏倚分布情況。分別計算

23、醫(yī)學(xué)決定水平處相對偏倚/偏差及95%置信區(qū)間。醫(yī)學(xué)決定水平上限相對偏倚應(yīng)不大于10%。（4）討論和結(jié)論對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316-2008 醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用的要求。（九）產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)

24、原則的通告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于其相關(guān)要求。下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的相關(guān)內(nèi)容進行簡要敘述。1. 產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明1.1應(yīng)明確產(chǎn)品包裝規(guī)格；1.2應(yīng)明確試劑各組成成分。2.性能指標：2.1 外觀a) 試劑盒各組分應(yīng)齊全、完整，液體無滲漏；b) 包裝標簽文字符號應(yīng)清晰。2.2 裝量液體試劑的凈含量應(yīng)不少于標示值。2.3 試劑空白吸光度上升反應(yīng)的試劑初始吸光度0.05；下降反應(yīng)的試劑初始吸光度0.8。2.4 分析靈敏度測試10.0mol/L樣本吸光度變化（A）應(yīng)符合下列要求：終點法：吸光度變化率（

25、A）應(yīng)不小于0.02。速率法：吸光度變化率（A/min）應(yīng)不小于0.01。2.5 線性范圍2.5.1試劑（盒）線性區(qū)間應(yīng)覆蓋3.0，45.0mol/L：2.5.2線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.995；2.5.33.0，45.0mol/L區(qū)間內(nèi)，線性偏差應(yīng)不超過1.0mol/L或線性偏差應(yīng)不超過10。2.6 精密度2.6.1 重復(fù)性2.6.1.1重復(fù)測試（10.02.0）mol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV%）應(yīng)不大于5%；2.6.1.2重復(fù)測試（20.04.0）mol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV%）應(yīng)不大于3%。2.6.2 批間差測試（10.02.0）mol/L的樣本，所得結(jié)果的批間

26、相對極差（R）應(yīng)不大于10%。2.7 準確度2.7.1相對偏差應(yīng)不超過10%。2.7.2回收率:應(yīng)在（10015）%范圍內(nèi)。2.8 穩(wěn)定性2.8.1效期穩(wěn)定性：取到效期后一定時間內(nèi)的樣品檢測試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、重復(fù)性、準確度應(yīng)符合要求。2.8.2復(fù)溶穩(wěn)定性（干粉或凍干試劑適用）：干粉試劑開瓶后（復(fù)溶后）在規(guī)定的貯存條件下保存至預(yù)期時間內(nèi)，產(chǎn)品的性能應(yīng)至少符合線性范圍、準確度和重復(fù)性。2.9校準品和質(zhì)控品（如適用）2.9.1溯源及賦值說明：同型半胱氨酸尚無國家標準物質(zhì)，已有國際標準物質(zhì)，若試劑盒配套校準品和質(zhì)控品，應(yīng)參照GB/T 214152008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中

27、量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性的要求溯源至國家或國際標準物質(zhì)，并提供校準品溯源性說明及質(zhì)控品賦值說明。若有國家標準物質(zhì)發(fā)布，應(yīng)使用國家標準物質(zhì)進行驗證。2.9.2性能要求：外觀、裝量、含水量（凍干品適用）、質(zhì)控品賦值有效性、干粉或凍干品應(yīng)包含批內(nèi)瓶間差、復(fù)溶穩(wěn)定性。3.檢驗方法3.1 外觀目測檢查，應(yīng)符合2.1的要求。3.2裝量用通用量具測量，應(yīng)符合2.2的要求。3.3 試劑空白吸光度用試劑（盒）測試空白樣本，記錄試劑（盒）參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下的吸光度值（A），應(yīng)符合2.3 的要求。注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準液等。3.4分析靈敏度用試劑（盒）測試已知濃度在（5

28、15）mol/L的樣本，記錄在試劑（盒）參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點下的吸光度值（A），終點法計算10.0mol/L樣本的吸光度變化值 ()，速率法計算10.0mol/L樣本的吸光度變化率()，應(yīng)符合2.4要求。3.5 線性3.5.1用達到線性區(qū)間下限的低濃度樣本稀釋達到線性區(qū)間上限的高濃度樣本，混合成6個稀釋濃度（xi）。用試劑（盒）分別測試以上樣本，每個稀釋濃度測試3次，分別求出每個稀釋濃度檢測結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以檢測結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r），應(yīng)符合2.5的要求。 （1）3.5.2稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程

29、，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差，應(yīng)符合2.5的要求。3.6精密度3.6.1 重復(fù)性在重復(fù)性條件下，測試濃度在（10.02.0）mol/L和（20.04.0）mol/L的樣本，重復(fù)測試10次（n10），分別計算測量值的平均值（ ）和標準差（s）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.6.1的要求。3.6.2 批間差分別用3個不同批號的試劑（盒）測試濃度在（10.02.0）mol/L的樣本，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值(i=1,2,3)，按公式（2）、（3）計算相對極差（R）應(yīng)符合2.6.2的要求。 （2） （3）式中：中的最大值； 中的最小值3.7準確度3.7.1相對偏差:試劑

30、（盒）測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)(CRM)或其它公認的參考物質(zhì)3次，測試結(jié)果記為（Xi），按公式（4）分別計算相對偏差B，如果3次結(jié)果的相對偏差符合2.7a的要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（4）計算相對偏差，如果大于等于19次測試結(jié)果的相對偏差應(yīng)符合2.7.1的要求，即判為合格。B%(MT)T100% （4）式中：M為測試值；T為標準物質(zhì)標示值，或各濃度人血清定值。3.7.2回收試驗:在人源樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與人源樣本體積比應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標準溶液后樣本總濃

31、度必須在試劑（盒）檢測線性區(qū)間內(nèi)）或純品，所加標準溶液與人源樣本之間的體積比例為不大于1:20，每個濃度重復(fù)檢測3次，其回收率應(yīng)符合2.7.2的要求。 ( SEQ 標準自動公式 * ARABIC 1)式中：R：回收率；V：加入標準溶液的體積；V0：人源樣本的體積；C ：人源樣本加入標準溶液后的檢測濃度；C0：人源樣本的檢測濃度；Cs：標準溶液的濃度。3.8穩(wěn)定性3.8.1 效期穩(wěn)定性：取到效期后一定時間內(nèi)的樣品按照 3.3、3.4、3.5、3.6.1、3.7 方法進行檢測，應(yīng)符合2.8.1的要求；3.8.2復(fù)溶穩(wěn)定性（干粉或凍干試劑適用）：干粉試劑開瓶后（復(fù)溶后）在規(guī)定的貯存條件下保存至預(yù)期時

32、間內(nèi)，產(chǎn)品的性能應(yīng)至少符合2.5、2.6.1和2.7。4.附錄如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，應(yīng)在附錄中明確校準品、質(zhì)控品的賦值程序。（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告根據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行樣品的注冊檢測。對于已經(jīng)有國家標準品的檢測項目，在注冊檢測時應(yīng)采用相應(yīng)的國家標準品進行,對于目前尚無國家標準品的項目，申請人應(yīng)建立自己的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的校準品、質(zhì)控品。注冊申報資料中應(yīng)包括相應(yīng)的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。（十一）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗方法、檢驗結(jié)果解釋以及注意

33、事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求。結(jié)合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，下面對同型半胱氨酸測定試劑（盒）說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進行表述；如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認可的英文縮寫，可用括號在中文后標明；對于確實無適當中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。1.【產(chǎn)品名稱】（1）試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如

34、：同型半胱氨酸測定試劑（盒）（酶循環(huán)法）。（2）英文名稱應(yīng)當正確、完整、直譯，不允許只寫縮寫。2【包裝規(guī)格】（1）應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格一致。（2）注明裝量或可測試的樣本數(shù)，如mL、測試/盒。3.【預(yù)期用途】應(yīng)包括以下幾部分內(nèi)容：（1）說明試劑盒用于體外定量測定人血清和/或血漿中同型半胱氨酸的濃度。（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。4【檢驗原理】本規(guī)范適用于使用酶循環(huán)法對人血清或血漿中的同型半胱氨酸進行定量檢測的試劑（盒），下面介紹該產(chǎn)品的反應(yīng)原理：氧化型同型半胱氨酸經(jīng)三乙羧乙基膦(TCEP)還原成游離型同型半胱氨酸，游離型HCY與底物發(fā)生反

35、應(yīng)循環(huán)放大。通過檢測反應(yīng)中NADH轉(zhuǎn)化為NAD+吸光度降低的速率，可計算出待測物中HCY的濃度。5.【主要組成成分】（1）說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、濃度及其他特性；明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。 （2）試劑盒內(nèi)如包含校準品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源，校準品應(yīng)注明其定值及溯源性，溯源性至少應(yīng)寫明溯源到的最高級別，包括：標準物質(zhì)的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍。 6.【儲存條件及有效期】（1）對試劑盒的效期穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息作詳細介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。（

36、2）不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準。注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”，應(yīng)明確貯存溫度，如28，有效期12個月。穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日或小時為單位。7.【適用儀器】（1）說明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇。（2）應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。8.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：（1）樣本采集前對患者的要求：如采集時間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。（2）樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。當血清存在脂濁、嚴重黃疸、溶血時，對本方法有干擾，應(yīng)盡可

37、避免此類樣本。（3）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。對儲存樣本的添加劑要求等。9.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：（1）試驗具體操作步驟。（2）試劑配制方法、注意事項。（3）試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。（4）校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。應(yīng)注明推薦的儀器校準周期。（5）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等，如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。10.【參考區(qū)間】（1）應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，如成人同型半胱氨酸濃度：（5.015

38、.0）mol/L；并簡要說明參考值確定的方法。（2）簡單介紹設(shè)定該參考值所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。11.【檢驗結(jié)果的解釋】（1）說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；（2）說明在何種情況下需要進行確認試驗。12.【檢驗方法的局限性】（1）說明檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)。（2）說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結(jié)果產(chǎn)生偏離，或測量結(jié)果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等）等。13.【產(chǎn)品性能指標】產(chǎn)品性能指標應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求。說明該產(chǎn)品主要性能指標，應(yīng)至少包括：

39、外觀、裝量、試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、分析靈敏度、線性范圍、重復(fù)性、批間差、準確度等。14.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。（2）使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會存在差異。（3）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護措施。15.【標識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。16.【參考文獻】注明引用參考文獻，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。17.【基本信息】（1）注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息

40、：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱住所聯(lián)系方式售后服務(wù)單位名稱聯(lián)系方式生產(chǎn)地址生產(chǎn)許可證編號（2）委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱住所聯(lián)系方式售后服務(wù)單位名稱聯(lián)系方式受托企業(yè)的名稱住所生產(chǎn)地址生產(chǎn)許可證編號17.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】注明該產(chǎn)品的注冊證書編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。18.【說明書核準日期及修改日期】注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。（十二）標簽樣稿1外包裝標簽（1）注冊人名稱、住所、聯(lián)系方式。 （2）生產(chǎn)企業(yè)名稱、生產(chǎn)地址、聯(lián)系方式、生產(chǎn)許可證編號。（3）試劑（盒）名稱。（4）批號。如試劑（盒）包含

41、不同批號的組件，外包裝的批號應(yīng)能保證每個組件的批號可從生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)記錄中溯源。（5）規(guī)格型號。應(yīng)包含體積或復(fù)溶后的體積。（6）體外診斷用途。（7）儲存和處置條件。應(yīng)提供在未開封狀態(tài)下可保證試劑（盒）的穩(wěn)定狀態(tài)的必要儲存條件；應(yīng)規(guī)定影響穩(wěn)定性的其他條件（如適用）；應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品處置時所采取的所有其他特殊措施（如適用）。（8）失效期。應(yīng)明示在規(guī)定儲存條件下的失效期；失效期應(yīng)以年、月，適當時以日表示；如僅給出年月，失效期應(yīng)為指定月最后一天；外包裝標簽上明示的失效期應(yīng)為最早到期組件的失效期。（9）警告和預(yù)防措施。如體外診斷試劑（盒）被認為有危險性（例如：化學(xué)，放射性或生物危害性），外包裝應(yīng)標有適當?shù)木?/p>

42、危險的文字或符號，YY/T 0316的要求適用；對于化學(xué)危害，如試劑（盒）沒有隨帶含有適當?shù)奈ｋU和安全性說明的使用說明，則應(yīng)在外包裝的標簽上進行說明。（10）生產(chǎn)日期。（11）醫(yī)療器械注冊證/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。醫(yī)療器械標簽因位置或者大小受限而無法全部標明上述內(nèi)容的，至少應(yīng)當標注產(chǎn)品名稱、型號、規(guī)格、生產(chǎn)日期和使用期限或者失效日期，并在標簽中明確“其他內(nèi)容詳見說明書”。2初始包裝標簽如初始包裝同時也是外包裝，則外包裝標簽的要求也適用。（1）生產(chǎn)企業(yè)名稱或等同的商標或標志；（2）產(chǎn)品名稱；（3）批號；（4）規(guī)格型號；（5）體外診斷用途；（6）儲存和處置條件（參見外包裝標簽要求）；（7）失效期（參見

43、外包裝標簽要求）；（8）警告和預(yù)防措施（參見外包裝標簽要求）。（十三）出廠檢驗原則每批試劑（盒）出廠檢驗至少進行以下幾項內(nèi)容：外觀、裝量、試劑空白吸光度、準確度、重復(fù)性、賦值有效性（如適用）注：出廠檢驗生產(chǎn)企業(yè)可以使用具有溯源性的企業(yè)（工作）校準品或正確度質(zhì)控物質(zhì)進行準確度實驗，其相對偏差應(yīng)在10范圍內(nèi)。三、審查關(guān)注點技術(shù)要求中性能指標的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標準的要求；技術(shù)要求的格式是否符合醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年

44、第17號）的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。分析性能評估指標及結(jié)果是否滿足產(chǎn)品技術(shù)要求的規(guī)定；是否滿足本規(guī)范中各指標驗證的要求。參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。試劑盒的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)

45、內(nèi)容的規(guī)定。產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316-2008醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用的要求。四、名詞解釋1.最低檢測限/分析靈敏度（Lower detection limit）：樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測量的最低值。本規(guī)范中的最低檢測限為區(qū)別于零的不低于95%可信區(qū)間的最低濃度。 2.正確度質(zhì)控物質(zhì)（trueness control material）：用于評價測量系統(tǒng)測量偏倚的參考物質(zhì)。3.參考物質(zhì)（reference material）：一種或多種指定特性足夠均勻和穩(wěn)定，已被證明適合在測量過程中或名義特性檢驗中預(yù)期應(yīng)用的物質(zhì)。注：只有具有指定量值的參考物質(zhì)可用于校準或測量正確度控