PDPA測(cè)定乙酰膽堿和維庫溴銨對(duì)NmR的親和力測(cè)定

1、乙酰膽堿和維庫溴銨對(duì)Nm-R親和力測(cè)定（ pA2、 pD2的測(cè)定） 1【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?學(xué)習(xí)蟾蜍腹直肌標(biāo)本的制備方法和受體激動(dòng)劑量-效曲線的測(cè)定方法。2掌握藥物的 pD2及pA2的定義。3.掌握乙酰膽堿和競爭性肌松藥（維庫溴銨）對(duì)骨骼肌Nm-R的pD2和pA2值的測(cè)定和計(jì)算方法及其意義2【實(shí)驗(yàn)原理】 1. pD2為激動(dòng)劑激動(dòng)受體產(chǎn)生50%最大效應(yīng)所需的摩爾濃度的負(fù)對(duì)數(shù)值 2. pA2為 競爭性拮抗劑摩爾濃度的負(fù)對(duì)數(shù)值，在此濃度下，激動(dòng)劑要產(chǎn)生原有效應(yīng)其濃度必須增大1倍。3乙酰膽堿能激動(dòng)腹直肌上的Nm受體，使腹直肌收縮；維庫溴銨是競爭性Nm受體拮抗劑，與乙酰膽堿競爭Nm受體，阻遏乙酰膽堿對(duì)腹直肌的收

2、縮作用。本實(shí)驗(yàn)預(yù)先加入一定量的Nm受體競爭性拮抗劑維庫溴銨，乙酰膽堿要達(dá)到原有效應(yīng)必須增加劑量。由此出現(xiàn)維庫溴銨 使 乙酰膽堿 的量效曲線平行右移，根據(jù)曲線右移情況，可求得乙酰膽堿對(duì)Nm受體的pA2值。4【動(dòng)物】 蛙或蟾蜍【方法】1. 制備長約1.5 cm寬約3-4mm的上腹直肌。 2. 標(biāo)本安裝、固定同前腹直肌實(shí)驗(yàn)，水浴管營養(yǎng)液體積10ml，充入空氣（1-3個(gè)/秒）。打開BL-410系統(tǒng)，選擇藥理實(shí)驗(yàn)?zāi)K，肌張力測(cè)定（或pA2和pD2測(cè)定），給予大約2g前負(fù)荷，平衡10min。 53. 描記正常張力曲線后，依次給藥，觀察張力的變化 以累加量效曲線法獲得Ach激動(dòng)Nm受體的量效曲線。加入順序和

3、量如下：Ach10-5mol/L 0.1ml， Ach10-5mol/L 0.2ml ， Ach10-4mol/L 0.07ml， Ach10-4mol/L 0.2 ml， Ach 10-3mol/L 0.07ml， Ach 10-3mol/L 0.2ml， ， Ach終濃度分別是10-7, 310-7, 10-6，310-6，10-5, 310-5，10-4, 310-4 mol/L。6累加次序Ach濃度（mol/L）Ach的毫升數(shù)（ml）終濃度（mol/L）110-50.110-7210-50.2310-7310-40.0710-6410-40.2310-6510-30.0710-5610

4、-30.2310-5710-20.0710-4810-20.2310-47用任氏液沖洗3次，待基線基本恢復(fù)正常后，加入0.267%維庫溴銨溶液（10-7mol/L）0.1ml，5-10min后重復(fù)(1)步驟，記錄維庫溴銨對(duì)Ach量效曲線的影響。4. 以Ach效應(yīng)為縱坐標(biāo)，濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)作圖，初步估計(jì)Ach對(duì)Nm-R的pD2值。85. 直線回歸法求Ach pD2值：E/D = Emax/KD E/KDE為對(duì)應(yīng)Ach濃度D產(chǎn)生的效應(yīng)。令E/D為Y, E為X，上式為直線方程。其中截距（a）為Emax/KD，斜率（b）為-1/KD。以BL-420分析系統(tǒng)或3600P計(jì)算器求出pD2，a、b和r值。96. 計(jì)算維庫溴銨的pA2值： 按下述公式計(jì)算維庫溴銨對(duì)Nm-R的pA2值。維庫溴銨的pA2值 = 維庫溴銨摩爾濃度負(fù)對(duì)數(shù)值 + Log(無維庫溴銨時(shí)AchpD2/有維庫溴銨時(shí)Ach