凍干血小板再水化后聚集

1、凍干血小板再水化后聚攏劉景漢，盧發(fā)強(qiáng)*，莊遠(yuǎn)，車輯，陳麟鳳【摘要】本研究旨在不雅察凍干血小板再水化后聚攏反響性變革。以4種差異濃度的凝血酶、瑞斯托霉素、ADP、膠原作誘導(dǎo)劑，利用APAT2型血小板聚攏儀，檢測(cè)凍干再水化和奇怪血小板的最大聚攏率，以ADP為誘導(dǎo)劑，檢測(cè)胞表里海藻糖對(duì)再水化凍干血小板最大聚攏率的影響。效果表白：當(dāng)凝血酶、瑞斯托霉素、ADP、膠原濃度別離為1U/l、1.6g/l、20l/L、2g/l時(shí)，奇怪血小板最大聚攏率達(dá)100%擺布，凍干再水化血小板最大聚攏率別離達(dá)70.177.36%、15.32.81%、68.676.86%、64.6711.6%。胞表里海藻糖組、胞外海藻糖組、

2、空缺比較組凍干再水化血小板最大聚攏率別離達(dá)(66.04.69)%、(25.32.42)%、(11.51.87)%(P0.01)。結(jié)論：凝血酶、瑞斯托霉素、ADP、膠原濃度別離為1U/l、1.6g/l、20l/L、2g/l可作為血小板聚攏實(shí)行的符合濃度，胞表里海藻糖使凍干再水化血小板最大聚攏率明顯進(jìn)步?！娟P(guān)鍵詞】再水化;凍干血小板；海藻糖；血小板AggregatinafterRehydratinfLyphilizedPlateletsAbstratThisstudyasaiedtinvestigatetheaggregatinfrehydrated-lyphilizedplatelets.The

3、aggregatinrateffreshandrehydrated-lyphilizedplateletsereeasuredbyusingthrbin，ristetin，ADPandllagenasindutrsandAPAT2aggregaeter;theeffetsfintra-andextra-ellulartrehalsenaxiuaggregatinratefrehydrated-lyphilizedplateletseredetetedbyusingADPasanindutr.Theresultsshedthattheaggregatinrateffreshplateletsas

4、allabut100%，hileaggregatinratefrehydratedlyphilizedplateletsas70.177.36%，15.32.81%，68.676.86%，64.6711.6%respetively，henthenentratinfthrbin，ristetin，ADPandllagenas1U/l，1.6g/l，20l/Land2g/l.Theaxiuaggregatinratesfrehydrated-lyphilizedplateletsinintr-andextra-ellalartrehalse，extraellulartrehalseandblank

5、ntrlgrupsere(66.04.69)%、(25.32.42)%and(11.51.87)%(P0.01)，eanhilethereassignifiantdifferenefrehydrated-lyphilizedplateletaggregatinratebeteenintra-andextra-ellulartrehalseandextraellulartrehalsegrups(P0.01).Itisnludedthatthenentratinsfthrbin(1U/l)，ristetin(1.6g/l)，ADP(20l/L)andllagen(2g/l)areptialfrp

6、lateletsaggregatintests，theinternalandextraellulartrehalsesignifiantlyenhanetheaggregatinfrehydrated-lyphilizedplatelets.Keyrdsrehydratin;lyphilizedplatelet;trehalse;platelet血小板在37條件下，通過液相內(nèi)吞途徑，在4小時(shí)內(nèi)可將海藻糖有用負(fù)載入血小板胞內(nèi)1-3，負(fù)載海藻糖后的血小板便可進(jìn)入下一步的凍干、再水化歷程4，5。本研究對(duì)血小板凍干、再水化后聚攏反響特性做了開端研究，現(xiàn)將研究效果陳訴如下。質(zhì)料和要領(lǐng)重要試劑海藻糖tre

7、halse，10H2211.2H2，廣西南寧中諾生物科技產(chǎn)物，PBS緩沖液100l/LNal、9.4l/LNa2HP4、0.6l/LKH2P4、pH6.8，蒸餾水，4種血小板聚攏反響誘導(dǎo)劑別離為凝血酶、膠原、ADP、瑞斯托霉素。重要儀器ALPHA1-2凍干機(jī)德國(guó)產(chǎn)物，21-r恒溫水浴箱(北京長(zhǎng)安科儀產(chǎn)物)，HI9321微電腦型pH計(jì)(HANNA公司產(chǎn)物，闡發(fā)天平。蘭波APAT2型血小板聚攏儀美生實(shí)業(yè)產(chǎn)物。血小板泉源及制備血小板泉源于志愿無償獻(xiàn)血者，他們體檢及格，1周內(nèi)未服用阿司匹林等抗血小板藥物。在室溫條件下，用AD三聯(lián)采血袋網(wǎng)羅全血后，離心制備的奇怪富含血小板血漿FPRP，或用BESpetr

8、a血細(xì)胞分散機(jī)單采的濃縮血小板P。再水化凍干血小板聚攏反響以4種差異濃度的凝血酶、膠原、ADP、瑞斯托霉素作為誘導(dǎo)劑，利用APAT2型血小板聚攏儀，別離測(cè)定凍干前奇怪血小板、凍干再水化血小板的聚攏反響。調(diào)解血小板計(jì)數(shù)為250109/L，取調(diào)解好的PRP250l，參加25l誘導(dǎo)劑，記載最大聚攏率，遴選做血小板聚攏實(shí)行的最適誘導(dǎo)劑濃度。海藻糖對(duì)凍干再水化血小板聚攏反響的影響實(shí)行分3組?？杖北容^組：凍干前未負(fù)載海藻糖，凍干液未添加30l/L海藻糖組和1%人血明凈卵白；胞外海藻糖組：凍干前未負(fù)載海藻糖，在凍干液中添加30l/L海藻糖和1%人血明凈卵白；胞表里海藻糖組：凍干前負(fù)載海藻糖，凍干液添加30l

9、/L海藻糖和1%人血明凈卵白。統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰血小板凍干再水化后參數(shù)用(XSD)表現(xiàn)，兩均數(shù)間比力接納配對(duì)t查驗(yàn)，用HISS統(tǒng)計(jì)軟件錄入數(shù)據(jù)，舉行統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰。效果凝血酶濃度對(duì)奇怪和再水化凍干血小板最大聚攏率的影響效果別離見表1和圖1。在凝血酶生理濃度范疇內(nèi)，總體趨勢(shì)是：隨凝血酶濃度增長(zhǎng)，血小板最大聚攏率升高，當(dāng)凝血酶濃度為1.0U/l時(shí)，奇怪血小板最大聚攏率達(dá)1013.347%，復(fù)水血小板最大聚攏率為70.177.36%。Table1.Effetfthrbinnentratinnaggregatinffreshandrehydrated-lyphilizedplatelets(略)瑞斯托霉素

10、濃度對(duì)奇怪和再水化凍干血小板最大聚攏率的影響隨著瑞斯托霉素濃度增長(zhǎng)，血小板最大聚攏率升高，當(dāng)瑞斯托霉素濃度為1.6g/l時(shí)，奇怪血小板最大聚攏率達(dá)99.81.17%，復(fù)水后的血小板最大聚攏率為15.32.81%表2和圖2。Table2.Effetfristetinnentratinnaggregatinffreshandrehydrated-lyphilizedplatelets(略)ADP濃度對(duì)再水化凍干血小板最大聚攏率的影響隨著ADP濃度增長(zhǎng)，血小板最大聚攏率升高，當(dāng)ADP濃度為20l/L時(shí)，奇怪血小板最大聚攏率達(dá)100.51.79%，再水化血小板最大聚攏率為68.676.86%表3和圖3

11、。Table3.EffetfADPnentratinnaggregatinffreshandrehydrated-lyphilizedplatelets(略)膠原濃度對(duì)復(fù)水凍干血小板最大聚攏率的影響隨著膠原濃度的增長(zhǎng)，血小板最大聚攏率%升高，當(dāng)膠原濃度為2.0g/l時(shí)，奇怪血小板最大聚攏率達(dá)100.672.94%，再水化凍干血小板最大聚攏率為64.6711.6%(表4和圖4)。Table4.Effetfllagennentratinnaggregatinffreshandrehydrated-lyphilizedplatelets(略)ADP對(duì)差異處置懲罰組再水化凍干血小板聚攏反響的影響胞表里

12、海藻糖組的凍干再水化血小板經(jīng)20l/LADP作用后的最大聚攏率顯著大于胞外海藻糖組P0.01，胞外海藻糖組的凍干再水化血小板的最大聚攏率顯著大于空缺比較組，P0.01表5和圖5。Table5.axiuaggregatianratefrehydrated-lyphilisatedplateletsindifferenttreatedgrups略討論前期血小板負(fù)載海藻糖研究效果表白，海藻糖可通過一種簡(jiǎn)樸要領(lǐng)-液相內(nèi)吞機(jī)理，在37條件下，顛末4小時(shí)負(fù)載，被有用載入到血小板胞質(zhì)內(nèi)部，且在細(xì)胞質(zhì)中勻稱漫衍6-8，這為血小板凍干再水化后聚攏成效的實(shí)行研究提供了理論根據(jù)。從4種誘導(dǎo)劑作用下再水化凍干血小板聚

13、攏反響的劑量效應(yīng)干系可看出，在正常生理范疇內(nèi)隨著誘導(dǎo)劑濃度增長(zhǎng)，再水化凍干血小板最大聚攏率進(jìn)步，但當(dāng)誘導(dǎo)劑到達(dá)必然濃度時(shí)，血小板最大聚攏率可維持在一恒定程度。本研究挑選的4種誘導(dǎo)劑的符合濃度別離為：凝血酶1U/l，瑞斯托霉素1.6g/l，ADP20l/L，膠原2g/l。這些相宜濃度可作為再水化凍干血小板聚攏實(shí)行的根本條件。有用負(fù)載海藻糖至細(xì)胞內(nèi)是包管再水化凍干血小板成效規(guī)復(fù)的關(guān)鍵，細(xì)胞外的海藻糖只能起到不變細(xì)胞膜，而非細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的作用，只有胞表里海藻糖同時(shí)存在，且到達(dá)必然濃度，才氣在細(xì)胞整個(gè)凍干再水化歷程中，同時(shí)起到庇護(hù)細(xì)胞內(nèi)脂類和卵白等物質(zhì)和細(xì)胞膜的作用。血小板聚攏實(shí)行是反響血小板成效的重要實(shí)行之一，血小板在誘導(dǎo)劑作用下，易產(chǎn)生激活、顆粒開釋、及聚攏反響變革。凍干庇護(hù)劑-海藻糖在整個(gè)血小板凍干前的預(yù)處置懲罰、凍干、及凍干后再水化歷程中，可有用按捺血小板的體外激活損傷，庇護(hù)血小板聚攏成效。海藻糖不但可