HPLC法測(cè)定梅花點(diǎn)舌丹中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量

1、HPLC法測(cè)定梅花點(diǎn)舌丹中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量【摘要】目的建立梅花點(diǎn)舌丹中藥材蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量測(cè)定方法。方法采用hpl法,色譜柱為hypersilds(250n4.6n)；流動(dòng)相：乙腈-水(43.556.5)；柱溫：室溫；流速：1.0l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)為296n；進(jìn)樣量20l。結(jié)果華蟾酥毒基和脂蟾毒配基在5.3163.75g/l、6.0072.00g/l范圍內(nèi)與峰面積積分值呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r分別為0.9998和0.9997,平均回收率分別為99.45%、99.39%,rsd分別為1.32%、0.55%(n=6)。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量

2、?！娟P(guān)鍵詞】梅花點(diǎn)舌丹；華蟾酥毒基；脂蟾毒配基；高效液相色譜法hpldeterinatinfpaeniflrininhuahanshudujiandzhihadupeijifeihuadianshedansufu-lishanxiedialllegefrntinuingeduatin,taiyuan030012,hinaabstratbjetivetestablishhplethdfrdeterinatinfhuahanshudujiandzhihadupeijiinthehinesedrughansufeihuadianshedan.ethdhplsysteinludesdslun,4.62

3、50,thebilephaseasaetnitrile-ater(43.556.5).theflrateas1.0l/in.thedetetinavelengthas296n.theauntfinjetinas20lresultsthealibratinurvesfhuahanshudujiandzhihadupeijierelinearintherangef5.3163.75g/l、6.0072.00g/l(r=0.9998、0.9997).theaveragereveries(n=6)nentratinaddedinsaplesere99.45%、99.39%.thedeviatinas1

4、.32%、0.55%.nlusintheethdisrapid,aurateandreliable.keyrds：eihuadianshedan；huahanshuduji；zhihadupeiji；hpl梅花點(diǎn)舌丹是由牛黃、麝香、雄黃、蟾酥、朱砂等21味藥材組成的成藥方劑,具有清熱解毒、消腫止痛的作用。用于瘡瘍初起、無名腫毒、疔瘡發(fā)背、乳癰腫痛。該成藥原屬地方標(biāo)準(zhǔn),只收載了薄層色譜鑒別,無含量測(cè)定指標(biāo)。該成藥中含有藥材蟾酥,2022版?中國(guó)藥典?(一部)是以華蟾酥毒基、脂蟾毒配基為含量測(cè)定指標(biāo)。為此,我們選擇蟾酥中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基作為本藥含量測(cè)定指標(biāo),并對(duì)測(cè)定方法進(jìn)展了研究。1儀器與試

5、藥日立l-2130高效液相色譜儀；日立l-2420紫外檢測(cè)器；大連依利特ehr型色譜工作站；島津2401紫外分光光度計(jì)；超聲波清洗器sk252h型(上海產(chǎn))；分析天平(上海良平精細(xì)儀器,ax100g,d=0.0001g)。華蟾酥毒基(批號(hào)110803-202204)和脂蟾毒配基(批號(hào)110718-202207)對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所,供含量測(cè)定用。乙腈、甲醇(天津四友)為色譜純,其他試劑均為分析純。水為重蒸水。2溶液的配制2.1供試品溶液的配制取重量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),約1.5g,精細(xì)稱定,置錐形瓶中,精細(xì)參加甲醇25l,稱定重量,超聲處理(功率250,頻率59khz)30in,放

6、冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,即得。2.2陰性樣品溶液的制備取缺蟾酥陰性樣品,按“2.1項(xiàng)下方法操作,即得。2.3對(duì)照品溶液的制備取華蟾酥毒基對(duì)照品15.94g,精細(xì)稱定,取脂蟾毒配基對(duì)照品18g,精細(xì)稱定,分別置25l量瓶中,用甲醇溶解(必要時(shí)超聲)并稀釋至刻度,搖勻,分別精細(xì)量取各1l,分別置10l量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液(每1l含華蟾酥毒基63.75g、脂蟾毒配基72.00g)。3色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈-水(43.556.5)為流動(dòng)相；柱溫：室溫；流速：1.0l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)為296n；進(jìn)樣量：20l。理論板數(shù)按華蟾酥毒基

7、、脂蟾毒配基峰計(jì)算不低于2700。色譜圖見圖1。4方法學(xué)驗(yàn)證4.1線性關(guān)系取華蟾酥毒基和脂蟾毒配基對(duì)照品,精細(xì)稱定,用甲醇稀釋制成華蟾酥毒基為5.31、10.63、21.25、42.50、63.75g/l和脂蟾毒配基為6.00、12.00、24.00、48.00、72.00g/l的系列。取上述溶液20l,注入液相色譜儀,測(cè)定。結(jié)果華蟾酥毒基線性方程為y=21.57x+10.15,相關(guān)系數(shù)r=0.9998；脂蟾毒配基線性方程為y=18.79x-10.56,相關(guān)系數(shù)r=0.9997。結(jié)果說明,華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對(duì)照品分別在5.3163.75g/l、6.0072.00g/l范圍內(nèi)與峰面積積分值呈

8、現(xiàn)良好線性關(guān)系。4.2專屬性取陰性樣品溶液,注入液相色譜儀,測(cè)定。結(jié)果在與對(duì)照品主峰保存時(shí)間一樣位置無色譜峰出現(xiàn)(見圖1),證明此方法具有一定的專屬性。4.3精細(xì)度試驗(yàn)取同一供試品,分別按“2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精細(xì)汲取20l,注入液相色譜儀,依法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果華蟾酥毒基rsd=2.89%,脂蟾毒配基rsd=1.50%；說明精細(xì)度良好。4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,在0、2、4、6、8、10、24h不同時(shí)間內(nèi),分別精細(xì)汲取20l,注入液相色譜儀,進(jìn)展測(cè)定。結(jié)果華蟾酥毒基rsd=2.89%,脂蟾毒配基rsd=2.40%；說明供試品溶液在24h內(nèi)根本穩(wěn)定。4.5重復(fù)性試驗(yàn)精細(xì)稱取本

9、品約1.5g,共6份,分別按“2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,分別計(jì)算華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量(n=6),rsd分別為2.38%和2.96%。4.6回收率試驗(yàn)精細(xì)稱取同一供試品,共6份,分別精細(xì)參加華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對(duì)照品,分別按“2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,計(jì)算各樣品中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量,并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1華蟾酥毒基、脂蟾毒配基回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略4.7樣品含量測(cè)定取本品各批約1.5g,精細(xì)稱定,分別按“2.1項(xiàng)下同法操作制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,計(jì)算各樣品中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量。結(jié)果見表2。

10、表2樣品測(cè)定結(jié)果略5討論5.1供試品溶液制備方法的選擇本品為中藥復(fù)方制劑,組分復(fù)雜,經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),樣品的提取及前處理對(duì)華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量測(cè)定及各組分的別離影響較大,故對(duì)樣品的提取及前處理?xiàng)l件進(jìn)展了篩眩為確定用何種溶劑提娶溶劑的用量、超聲處理的時(shí)間,我們參考2022年版?中國(guó)藥典?(一部)梅花點(diǎn)舌丸、麝香保心丸及蟾酥藥材等項(xiàng)下的含量測(cè)定方法1,采用正交設(shè)計(jì)方法安排實(shí)驗(yàn)(見表3)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,提取液用甲醇,溶液劑量25l,超聲處理30in,可得到滿意的結(jié)果。表3三因素三程度正交試驗(yàn)略5.2吸收波長(zhǎng)的選擇取上述對(duì)照品溶液適量,用紫外可見分光光度計(jì)于200800n波長(zhǎng)處掃描,結(jié)果在296n處有最大吸收,參考有關(guān)文獻(xiàn)及蟾酥藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),決定采用296n作為檢測(cè)波長(zhǎng)。5.3流動(dòng)相的選擇我們參考2022年版?中國(guó)藥典?(一部)蟾酥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以及成藥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量測(cè)定方法1,比擬了不同流動(dòng)相配比,最終選擇了乙腈-水(43.556.5)