水和污水中微生物檢驗(yàn)記錄

1、第 頁(yè) 共 頁(yè)( )水中微生物檢驗(yàn)記錄樣品編號(hào)： 檢驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間： 年 月 日樣品名稱： 檢驗(yàn)完成時(shí)間： 年 月 日檢測(cè)項(xiàng)目： 檢測(cè)依據(jù)： 菌落總數(shù)測(cè)定：無(wú)菌操作吸取充分混勻的樣品10mL加入到裝有90mL的滅菌水三角燒瓶中（可放有適量玻璃珠）混勻，做成110稀釋液。取110稀釋液1mL加入到9mL滅菌水中混勻，做成1100稀釋液。以上法制備10-3、10-4稀釋液（稀釋倍數(shù)按水樣污濁程度而定）。選擇合適的稀釋度，吸取1mL加入到無(wú)菌平皿中，每一稀釋度做2個(gè)平皿。同時(shí)另找兩個(gè)平皿只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基做空白對(duì)照。加入冷至461的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，混勻，凝固后，翻轉(zhuǎn)平板倒置于 日 時(shí) 分置3

2、6 1開(kāi)始培養(yǎng)， 日 時(shí) 分，取出平板，共培養(yǎng) 小時(shí) 分鐘。計(jì)數(shù)平板上菌落數(shù)（CFU）。稀 釋 度10010-110-210-310-4空白對(duì)照菌 落 數(shù)（CFU/板）平 均 值（CFU/板）計(jì)算及結(jié)果： 細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/ mL）： 二、 總大腸菌群測(cè)定（多管發(fā)酵法）：接種量 mL1010101010111110.10.10.10.10.1培養(yǎng)時(shí)間（h）培養(yǎng)溫度（）空白開(kāi)始結(jié)束共初發(fā)酵試驗(yàn)37平板分離37革蘭氏染色/復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)37注： eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或有可疑菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)可疑菌落；G-b革蘭氏陰性桿菌；G+b革蘭氏陽(yáng)性桿菌；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌。結(jié)果

3、：根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，得 MPN/100mL。電子天平編號(hào)： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：培養(yǎng)箱編號(hào)： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：檢測(cè)人： 校核人： 審核人：樣品編號(hào)：總大腸菌群測(cè)定（濾膜法）：用滅菌過(guò)的濾膜及濾器過(guò)濾水樣（待過(guò)濾水樣量根據(jù)所預(yù)測(cè)的細(xì)菌密度而定），水樣抽濾完，再抽5s，關(guān)上濾器閥門取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜截留面細(xì)菌面朝上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡。然后平皿倒置放于37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，后挑取典型菌落染色，鏡檢。（凡革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，需于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液培養(yǎng)，經(jīng)37，24h培養(yǎng)產(chǎn)酸

4、產(chǎn)氣者為總大腸菌群陽(yáng)性）。接種量，ml培養(yǎng)時(shí)間（h）培養(yǎng)溫度()空白開(kāi)始結(jié)束共菌落數(shù)（個(gè)/板）37革蘭氏染色/乳糖蛋白胨培養(yǎng)37 eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或有可疑菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)可疑菌落；G-b革蘭氏陰性桿菌；G+b革蘭氏陽(yáng)性桿菌；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌。計(jì)算結(jié)果： 總大腸菌群數(shù)（個(gè)/L）=（濾膜上生長(zhǎng)的大腸桿菌菌落數(shù)*1000）/過(guò)濾水樣量（ml）結(jié)果： 總大腸菌群測(cè)定（快速測(cè)定法）：每份預(yù)監(jiān)測(cè)水樣，接種水樣總量為55.5ml，分別接種大紙片5張，小紙片10張。每張大紙片接種10ml水樣，五張小紙片每張接種1ml，另五張小紙片接種1:10稀釋水樣1ml，放于37恒溫培

5、養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。接種量 mL1010.1培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間（h） 空白開(kāi)始結(jié)束共結(jié)果判定1：紫紅菌落（片狀紅暈）周圍有黃圈（陽(yáng)性）372：紙片一種顏色無(wú)菌落生長(zhǎng)（陰性）3：紫紅色或紫色周圍無(wú)黃圈（陰性）4：酸在水樣接種后變黃無(wú)紫色菌落（陰性）5：紙片變色且呈不典型菌落作復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)37 eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或有可疑菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)可疑菌落；G-b革蘭氏陰性桿菌；G+b革蘭氏陽(yáng)性桿菌；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌； 結(jié)果：根據(jù)陽(yáng)性紙片張數(shù)，查MPN檢索表（若稀釋后接種，查MPN表后乘以稀釋倍數(shù)，報(bào)出結(jié)果），得1L水中總大腸菌群數(shù) 。電子天平編號(hào)： 使

6、用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：培養(yǎng)箱編： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：檢測(cè)人： 校核人： 審核人：樣品編號(hào)：三、 糞大腸菌群測(cè)定（多管發(fā)酵法）：根據(jù)水樣污染程度確定水樣接種量（若接種量為10ml，試管中則裝有三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5ml，若接種量為1ml或小于1ml,則接種于單倍培養(yǎng)液10ml試管內(nèi)）接種量 mL培養(yǎng)溫度（） 培養(yǎng)時(shí)間（h）空白開(kāi)始結(jié)束共初發(fā)酵試驗(yàn)370.5復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)44.50.5注： eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；產(chǎn)氣； + 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或有典型菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)典型菌落。結(jié)果：根據(jù)證實(shí)為耐熱大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，得 MPN/100mL。糞大腸菌群測(cè)定（濾膜法）：

7、用滅菌過(guò)的濾膜及濾器過(guò)濾水樣（水樣量根據(jù)細(xì)菌受檢測(cè)的特征和水樣中預(yù)測(cè)的細(xì)菌密度而定），使用M-FC培養(yǎng)基，置于44.50.5恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h 后觀察。（必要時(shí)可疑菌落接種EC培養(yǎng)液，44.50.5恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，如產(chǎn)氣怎證實(shí)為糞大腸菌群。接種量，ml培養(yǎng)溫度()培養(yǎng)時(shí)間（h）空白開(kāi)始結(jié)束共菌落數(shù)（個(gè)/板）44.50.5革蘭氏染色/EC培養(yǎng)44.50.5 eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或有可疑菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)可疑菌落；G-b革蘭氏陰性桿菌；G+b革蘭氏陽(yáng)性桿菌；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌。計(jì)算及結(jié)果： 總大腸菌群數(shù)（個(gè)/L）=（濾膜上生長(zhǎng)的糞大腸菌菌落數(shù)*1000）/過(guò)濾

8、水樣量（ml）結(jié)果： 糞大腸菌群測(cè)定（快速測(cè)定法）：每份預(yù)監(jiān)測(cè)水樣，接種水樣總量為55.5ml，分別接種大紙片5張，小紙片10張。每張大紙片接種10ml水樣，五張小紙片每張接種1ml，另五張小紙片接種1:10稀釋水樣1ml，放于44.5+1恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。接種量 mL1010.1培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間空白開(kāi)始結(jié)束共結(jié)果判定1：紫紅菌落（片狀紅暈）周圍有黃圈（陽(yáng)性）44.52：紙片一種顏色無(wú)菌落生長(zhǎng)（陰性）3：紫紅色或紫色周圍無(wú)黃圈（陰性）4：酸在水樣接種后變黃無(wú)紫色菌落（陰性）5：紙片變色且呈不典型菌落作復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)37 eq oac(,+)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；+產(chǎn)酸不產(chǎn)

9、氣或有可疑菌落；-不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或無(wú)可疑菌落；G-b革蘭氏陰性桿菌；G+b革蘭氏陽(yáng)性桿菌；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌； 結(jié)果：根據(jù)陽(yáng)性紙片張數(shù)，查MPN檢索表（若稀釋后接種，查MPN表后乘以稀釋倍數(shù)，報(bào)出結(jié)果），得1L水中糞大腸菌群數(shù) 。電子天平編號(hào)： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：培養(yǎng)箱編： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：檢測(cè)人： 校核人： 審核人：樣品編號(hào)：四、 糞鏈球菌測(cè)定（多管發(fā)酵法）：根據(jù)水樣污染程度，接種三個(gè)不同量的水樣于疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液內(nèi)，每一不同量水樣分別接種5管，即共接種15管?；靹蚝笾糜?7的恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h，（若培養(yǎng)后未見(jiàn)明顯渾濁生長(zhǎng)，則繼續(xù)再培養(yǎng)24h，）經(jīng)24h或48h

10、培養(yǎng)后疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液呈現(xiàn)渾濁有細(xì)菌生長(zhǎng)，則表示推測(cè)實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，需進(jìn)一步做驗(yàn)證試驗(yàn)。在推測(cè)試驗(yàn)陽(yáng)性管內(nèi)取一環(huán)接種于乙基紫疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液中，置于37的恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h，若試管底部顯現(xiàn)紫色沉淀小圓塊或培養(yǎng)液有明顯渾濁生長(zhǎng)表示證實(shí)試驗(yàn)陽(yáng)性。反之，再取保留在培養(yǎng)箱推測(cè)試驗(yàn)陽(yáng)性管內(nèi)一環(huán)接種培養(yǎng)24h后觀察。編號(hào)試驗(yàn)培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間空白開(kāi)始結(jié)束共推測(cè)性試驗(yàn)加樣量（ml）疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液37疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液37證實(shí)性試驗(yàn)乙基紫疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液37乙基紫疊氮化鈉葡萄糖培養(yǎng)液37注： +生長(zhǎng)或有可疑菌落；-不生長(zhǎng)或無(wú)可疑菌落；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌；G-c革蘭氏陰性球菌結(jié)果：根據(jù)證

11、實(shí)為耐熱大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，得 MPN/100mL。糞鏈球菌測(cè)定（濾膜法）：根據(jù)水質(zhì)污染情況確定稀釋倍數(shù)，用無(wú)菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼在濾床上，固定好濾器，過(guò)濾。每張濾膜過(guò)濾250mL水樣或稀釋液。將過(guò)濾后的濾膜直接轉(zhuǎn)移至KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基上，同時(shí)避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡。將平皿倒扣，放置在37的恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48h后，取出挑去可疑菌落進(jìn)行鏡檢，并且計(jì)數(shù)。從濾膜上挑取典型菌落，接種到膽汁-七葉苷-疊氮化物瓊脂培養(yǎng)基上，在440.5培養(yǎng)48h，做證實(shí)性試驗(yàn)，如有菌落生長(zhǎng)，則作過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)是否存在糞鏈球菌。編號(hào)試驗(yàn)培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間空白開(kāi)始結(jié)束共

12、推測(cè)性試驗(yàn)過(guò)濾器加樣量（ml）KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)37紅色菌落數(shù)粉紅色菌落數(shù)染色鏡檢證實(shí)性試驗(yàn)?zāi)懼?七葉苷-疊氮化物瓊脂培養(yǎng)440.5過(guò)氧化氫酶(陽(yáng)性/陰性)注： +生長(zhǎng)或有可疑菌落；-不生長(zhǎng)或無(wú)可疑菌落；G+c革蘭氏陽(yáng)性球菌；G-c革蘭氏陰性球菌。計(jì)算及結(jié)果：水中的糞鏈球菌數(shù)（CFU/ 1000mL）： 電子天平編號(hào)： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：培養(yǎng)箱編號(hào)： 使用狀況 試驗(yàn)前： 試驗(yàn)后：檢測(cè)人： 校核人： 審核人：樣品編號(hào)：五、沙門氏菌測(cè)定： 水樣量根據(jù)水中沙門氏菌濃度而定。前增菌：將獲得的水樣轉(zhuǎn)入含100ml緩沖蛋白胨水瓶中，樣品量在10-100ml，加等體積雙倍濃度緩沖蛋白胨水，樣品量在

13、1-10ml加10倍普通濃度緩沖蛋白胨水，在37下培養(yǎng)16-20h。增菌：將前增菌樣品以1:10比例轉(zhuǎn)入增菌液（非沙門氏濃度很高情況下1:100比例轉(zhuǎn)入為好），接種在四硫磺酸鹽培養(yǎng)液，孔雀綠-氯化鎂培養(yǎng)液，雙倍濃度的亞硒酸鹽F培養(yǎng)液于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。劃平板：增菌培養(yǎng)后，將培養(yǎng)物接種到煌綠酚紅瓊脂和亞硫酸鉍瓊脂上放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)。選擇可疑菌落進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)。水樣量ml前增菌緩沖蛋白胨水溫度：37時(shí)間h：20h開(kāi)始結(jié)束共可疑菌落形態(tài)增菌增菌液：溫度：時(shí)間h：/四硫磺酸鹽培養(yǎng)液432244h/孔雀綠-氯化鎂培養(yǎng)液3722h/雙倍濃度亞硒酸鹽F培養(yǎng)液3724h/分離培養(yǎng)（注：+生長(zhǎng)或有可疑菌落；-不生長(zhǎng)或無(wú)可疑菌落）平板溫度：時(shí)間h：/煌綠酚紅瓊脂3724h亞硫酸鉍瓊脂372448h生化反應(yīng)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果六、蛔蟲(chóng)卵的測(cè)定：過(guò)濾：充分搖勻樣品，轉(zhuǎn)入不銹鋼開(kāi)口直壁容器至10L刻度（如樣品中含有草梗，紙?jiān)容^大雜質(zhì)，需過(guò)篩網(wǎng)并用吐溫80溶液清洗篩網(wǎng)及雜質(zhì)，洗液并入10L樣品中）。沉淀：過(guò)濾后樣品在15-25室溫靜置過(guò)夜沉淀12-24h，用虹吸管吸取并棄去上清液，避免擾動(dòng)，直至保留90-100ml含沉淀物質(zhì)的樣品。離心：沉淀濃縮后的樣品轉(zhuǎn)移至3個(gè)螺口尖底離心管，以1000g的離心力離心15min，用巴氏滴管吸取并棄去上清液，少量留之，避免帶出沉淀。用少量吐溫80溶液將3