P53蛋白的研究與發(fā)展綜述教學(xué)提綱

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。P53蛋白的研究與發(fā)展綜述-P53蛋白的研究與發(fā)展綜述學(xué)院藥學(xué)院課程名稱生物技術(shù)制藥年級2010級制藥工程組員劉巧曾瓊英陸鳳慧劉楊姚瑤指導(dǎo)教師胡昌華廖國建2013年5月22日P53蛋白的研究與發(fā)展綜述劉巧；曾瓊英；劉楊；陸鳳慧；姚瑤西南大學(xué)藥學(xué)院重慶400716【摘要】P53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關(guān)性最高，研究最透徹，功能最強大的一種抑癌基因。隨著對其研究的深入發(fā)展,涉及的內(nèi)容和應(yīng)用范圍越來越廣泛。本文綜合概述了P53基因的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、應(yīng)用、發(fā)展歷史，以及上市藥物和在研藥物，并詳細介紹了典型重組P5

2、3藥物今又生?！続bstract】P53geneisatumorsuppressorgene.itcanbeactivewithmostofthecancercell.Thisarticleprovidesacomprehensiveoverviewofitsstructure,character,application,developmenthistoryoftheP53gene,aswellasmarketeddrugsandinvestigationaldrugs,andgavedetailsofthetypicalrestructuringP53drugsGendicine.【關(guān)鍵詞】

3、P53基因；抗癌；應(yīng)用；今又生1前言僅從90年代至今，關(guān)于p53作為腫瘤抑制因子的研究報道就有多于20000篇，是什么讓p53得到科學(xué)界如此多的關(guān)注？在1979年，p53首次被發(fā)現(xiàn)。在上世紀80年代，TP53（p53的編碼基因）被認為是一個原癌基因（proto-oncogene），直到90年代早期，TP53被廣泛認為是一個腫瘤抑制基因，它處在細胞各種脅迫反應(yīng)途徑的十字路口上。p53在細胞周期捕獲，DNA修復(fù)，細胞衰老、分化、調(diào)亡等過程中都起著重要的作用，它能修復(fù)損傷細胞，或者除去嚴重損傷的細胞從而避免這些細胞對機體的危害作用。由于p53的多功能性，在它的編碼基因TP53上發(fā)現(xiàn)很多突變都會影響到

4、p53的功能。在很多（75%）人的癌癥中都存在p53的突變。有關(guān)p53的研究已經(jīng)拓展到毒物學(xué)和治療學(xué)領(lǐng)域。P53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因。在短短的十多年里，人們對P53基因的認識經(jīng)歷了癌蛋白抗原，癌基因到抑癌基因的三個認識轉(zhuǎn)變，現(xiàn)已認識到，引起腫瘤形成或細胞轉(zhuǎn)化的P53蛋白是P53基因突變的產(chǎn)物，是一種腫瘤促進因子，它可以消除正常P53的功能，而野生型P53基因是一種抑癌基因，它的失活對腫瘤形成起重要作用。2p53基因的簡述2.1p53蛋白的研究歷史及現(xiàn)狀第一個10年：1979年，英國癌癥HYPERLINK/news/07/n-274107.htmlt_blank研究基金會、美

5、國普林斯頓大學(xué)的研究者LionelCrawford,，David.P.Lane等人首次追蹤到了p53基因的蹤跡。這些研究者或許沒有料到，他們的發(fā)現(xiàn)開啟了現(xiàn)代腫瘤研究與治療的新時代。不久以后，HYPERLINK/news/21/n-308921.htmlt_blank俄羅斯HYPERLINK/news/99/n-305899.htmlt_blank科學(xué)家PeterChumakov從小鼠體內(nèi)克隆到了這個基因你的完整版本。因為這一基因在細胞中翻譯后產(chǎn)生的HYPERLINK/news/40/n-309140.htmlt_blank蛋白質(zhì)(protein)的HYPERLINK/news/28/n-245

6、328.htmlt_blank分子量為53千HYPERLINK/news/24/n-9224.htmlt_blank道爾頓，故而被命名為p53。不過，在發(fā)現(xiàn)伊始，p53基因并未受到重視，甚至在最初的10年中，p53一直被視為能夠誘發(fā)腫瘤產(chǎn)生的癌基因。導(dǎo)致這樣南轅北轍認識的癥結(jié)在于科學(xué)家在研究時并未找對p53基因的正確版本。眾所周知，一條基因由一系列脫氧HYPERLINK/news/93/n-306693.htmlt_blank核糖核酸按照相應(yīng)的順序彼此串聯(lián)而成，如果其中的某個或某些HYPERLINK/news/08/n-304308.htmlt_blank核苷酸發(fā)生改變就意味著這條基因發(fā)生了突

7、變，而起初研究者拿到的基因就是p53的突變版本，按照這一版本翻譯成的蛋白質(zhì)自然就無法行使正常p53基因的功能。第二個10年蹉跎十年之后，美國約翰霍普金斯醫(yī)學(xué)院的HYPERLINK/news/27/n-295527.htmlt_blank分子生物學(xué)家BertVogelstein最終找到了正確的p53基因，即野生型p53。不但如此，科學(xué)家的發(fā)現(xiàn)還為這一基因摘掉了癌基因的惡名：與此前認識恰恰相反的是，p53是一個在人體內(nèi)發(fā)揮廣泛作用的強有力的抑癌基因。p53蛋白實際上是一種轉(zhuǎn)錄因子，在細胞處于應(yīng)激狀態(tài)時可被誘導(dǎo)表達，從而促進細胞進入細胞周期的停滯階段，繼而凋亡或者衰老第三個10年自打1990?年，美

8、國國立衛(wèi)生研究院的Freuch?Anderso博士啟動了全球第一個真正意義上的基因治療臨床試驗以來，已有1000余例基因治療臨床試驗獲批上馬，其中大約70%是針對腫瘤，而p53基因更是成為其中不可或缺的靶點。在我國，深圳賽百諾基因技術(shù)有限公司從1998?年開始進行重組腺病毒p53?抗癌注射液的臨床試驗，2003年完成了全部臨床試驗，于2004?年1?月獲得我國SFDA?批準的新藥生產(chǎn)批文，成為世界上第一例正式上市的基因治療產(chǎn)品。自從p53基因被認定為一種重要的抑癌基因以來，它一直就是焦點中的焦點。1993年，p53還被科學(xué)雜志評為當年的明星分子。直到如今，每隔一段時間，國際上就會召開一次以p5

9、3為主題的學(xué)術(shù)例會。有關(guān)p53的研究也逐漸從癌癥領(lǐng)域發(fā)散開來，在其他疾病和生理過程中，也出現(xiàn)了p53長袖善舞的身影。這些發(fā)現(xiàn)使之成為分飾多角的最熟悉的陌生人。例如2007年，美國先進研究所的科學(xué)家在自然雜志上報告稱，他們在小鼠中觀察到，一種特定類型的p53突變可能與雌鼠能否懷孕有關(guān)。對此新加坡醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所的發(fā)育生物學(xué)家Colin?Stewart不無戲謔的評論道：該研究結(jié)果味著，以p53為靶點的抗癌藥物可能會有“額-4-外”的效果“一些藥物可能會通過提升p53在子宮中的作用成為有效的助孕劑，而另一些則可能通過阻礙p53發(fā)揮功能而成為避孕藥?！绷硗鈸?jù)自然醫(yī)學(xué)雜志的報道，有研究者還發(fā)現(xiàn)p53在胰

10、島素抵抗（insulin?resistance）的生理調(diào)控過程中發(fā)揮了重要作用第四個10年我們正處于p53第四個10年的發(fā)展階段，我們現(xiàn)在的主要目標是基于p53蛋白開發(fā)抗癌藥物。2.2p53基因及其表達產(chǎn)物2.2.1p53基因人類P53基因定位于17P13.1,約20Kb長，都由11個外顯子和10個內(nèi)含子組成，第1個外顯子不編碼，外顯子2、4、5、7、8、分別編碼5個進化上高度保守的結(jié)構(gòu)域，P53基因5個高度保守區(qū)即第1319、117142、171192、236258、270286編碼區(qū)。P53基因的轉(zhuǎn)錄由P1、P2二個啟動子控制.P1啟動子位于第一外顯子上游100250bp，P2位于第一內(nèi)含

11、子內(nèi)在啟動子中包含1個NF1蛋白結(jié)合位點和一個轉(zhuǎn)錄因子AP1相關(guān)蛋白的結(jié)合位點，對正常P53基因的轉(zhuǎn)錄，不僅需要二個啟動子的平衡作用，而且P53基因內(nèi)含子也起.作用。P53基因位于人類17號染色體含11個外顯子，其轉(zhuǎn)錄翻譯編碼的野生型P53蛋白由393個氨基酸殘基組成，包含多個功能域。圖1p53蛋白空間結(jié)構(gòu)P53基因還有：序列特異的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，位于氨基酸100-300位間；核定位信號NLS位于氨基酸殘基316-325；四聚體寡聚化結(jié)構(gòu)域，定位于氨基酸殘基334-356；C-末端非專一DNA調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，同時在碰到DNA損傷時，P53可能補充其它蛋白質(zhì)到損傷部位，提供DNA損傷信號。2.2.

12、1p53基因的失活圖1：P53蛋白結(jié)構(gòu)引起腫瘤形成的p53蛋白是基因突變后產(chǎn)生的，影響了正常p53基因的抑癌作用，p53蛋白構(gòu)像發(fā)生改變主要是由于p53基因的突變。野生型P53以四聚體形式與特異位點結(jié)合，反式激活下游HYPERLINK/view/3873973.htm生長抑制基因的表達，是否具有這種直接與DNA結(jié)合并激活臨近基因轉(zhuǎn)錄的特點是野生型p53蛋白和其它具有“致癌”作用的突變型蛋白之間的差別。一系列的方式能使P53失活，在一些腫瘤中，單一或兩個P53位點的喪失降低四聚體濃度，無義突變造成P53翻譯中斷，C端酸性結(jié)構(gòu)域的丟失影響四聚體形成;最常見的是錯義突變，野生型與突變體形成更穩(wěn)定的四

13、聚體，喪失正常功能。2.2.2P53蛋白的作用機制P53蛋白N一端為酸性區(qū)180位氨基酸殘基，C-端為堿性區(qū)319393位氨基酸殘基，正常的P53蛋白在細胞中易水解，半衰期為20分鐘，突變性P53蛋白半衰期為1.47小時不等，P53蛋白N端有一個與轉(zhuǎn)錄因子相似的酸性結(jié)構(gòu)域，與GAL4的DNA結(jié)合區(qū)重組時，融合蛋白能激活GAL4操縱子轉(zhuǎn)錄，激活功能定位在P53第2040位密碼子，P53細胞定位及反式激活功能提示，P53蛋白可能直接或通過與其他蛋白作用參與轉(zhuǎn)錄控制.圖2：p53蛋白的抑癌機制P53基因是一種轉(zhuǎn)錄因子，他會根據(jù)細胞的狀態(tài)，從而做出不同的反應(yīng)，如圖2所示：當細胞受到輕度生理應(yīng)激反應(yīng)刺激

14、時，會通過p53蛋白下游靶基因發(fā)揮調(diào)控作用如：維持代謝穩(wěn)定狀態(tài)，抗氧化作用，DNA修復(fù)，細胞代謝生長抑制等方式來修復(fù)細胞，當受到重度應(yīng)激反應(yīng)如原癌基因被激活，p53蛋白則會啟動細胞凋亡程序，使得細胞程序性死亡。要研究某個蛋白的生化活性有一種最為常用的方法，那就是尋找能夠與該蛋白發(fā)生相互作用的其它蛋白。這個方法在p53蛋白的研究當中被應(yīng)用得最為廣泛，也找到了非常多的能夠與p53蛋白發(fā)生相互作用的其它蛋白。迄今為止，在眾多p53蛋白的“伴侶”蛋白中最為著名，也最為重要的蛋白就是在1992年發(fā)現(xiàn)的MDM2蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，MDM2蛋白能夠與p53蛋白緊密結(jié)合，并抑制其生物學(xué)活性。從那以后，MDM2蛋白

15、（人體的MDM2蛋白也被稱為HDM2蛋白）就被認為可能是最重要的p53蛋白調(diào)控因子，并且是最有效的p53蛋白的“把關(guān)人”。MDM2蛋白可以通過多種方式抑制p53蛋白的作用。比如，它可以與p53蛋白的反式激活結(jié)構(gòu)域相結(jié)合并抑制其活性。另外，MDM2蛋白還能起到E3泛素連接酶的作用，特異性地催化p53蛋白經(jīng)泛素化途徑降解。圖3：p53-MDM2環(huán)路后來的研究又發(fā)現(xiàn)MDM2基因居然是受p53蛋白調(diào)控的靶基因。p53蛋白和MDM2蛋白之間形成了一個負反饋環(huán)路。p53蛋白誘導(dǎo)MDM2蛋白表達，然后MDM2蛋白促進p53蛋白降解，從而限制胞內(nèi)p53蛋白活性。經(jīng)過多年的深入研究，我們了解到在非應(yīng)激細胞中，p

16、53蛋白的活性一直維持在一個較低的基礎(chǔ)水平。這主要得益于p53MDM2負反饋環(huán)路的作用。不過，在細胞受到各種應(yīng)激信號的刺激時，p53蛋白就會迅速被激活。最早發(fā)現(xiàn)p53蛋白的這種可誘導(dǎo)特性的是WarrenMaltzman，他發(fā)現(xiàn)細胞經(jīng)紫外線照射后，胞內(nèi)p53蛋白的含量會升高。隨后，MichaelKastan得到的實驗結(jié)果也進一步證實了Warren的結(jié)論。在這些實驗數(shù)據(jù)的支持下，p53蛋白當之無愧地被譽為“細胞基因組的衛(wèi)兵”。后來的研究也進一步證實了這個觀點。p53蛋白具有的這種能夠被應(yīng)激信號所激活的開關(guān)是p53蛋白發(fā)揮各種抑癌作用的關(guān)鍵（圖3）。MDM2蛋白就是控制這個開關(guān)的主要調(diào)控因子，MDM

17、2蛋白能夠保證p53蛋白不會被錯誤激活。當細胞面臨各種致瘤刺激信號時，MDM2蛋白的含量就會減少，抑制作用就會被取消，p53蛋白就會被活化（圖3）。ChuckSherr等人的研究結(jié)果就支持了上述觀點。他們發(fā)現(xiàn)ARF這種抑癌因子主要就是通過與MDM2蛋白相結(jié)合，從而“解放”p53蛋白，使p53蛋白發(fā)揮抑癌作用。3重組p533.1主要藥物及類似藥物（上市藥物和在研藥物）重組人p53腺病毒(rAd-p53)是一種廣譜抗癌制品。自1995年在美國批準進入臨床試驗，目前已有51項各種臨床試驗方案在世界各國實施，涉及到多種類型的腫瘤治療。所有臨床試驗用rAd-p53制品均來源于美國和中國的三家公司即Int

18、rogen、Schering-Plough（先靈葆雅）和深圳市賽百諾基因技術(shù)有限公司（SiBiono），這也是目前世界上具有重組腺病毒制品規(guī)?；a(chǎn)能力的三大產(chǎn)業(yè)化基地。針對P53的基因治療，已有了數(shù)種上市藥物及多種處于臨床研究的藥物，這里著重介紹兩種上市的藥物:今又生和Advexin。3.1.1今又生重組人p53腺病毒注射液（今又生），由深圳賽百諾公司研發(fā)，是一種廣譜的抗腫瘤藥物。是世界上第一個獲準上市的腫瘤基因治療藥，由正常人p53腫瘤抑制基因和改構(gòu)的5型腺病毒基因重組而成。前者是“今又生”發(fā)揮腫瘤治療作用的主體結(jié)構(gòu)，后者主要起載體作用，攜帶治療基因p53進入腫瘤細胞內(nèi)發(fā)揮作用。今又生在頭

19、頸部癌，肺癌，肝癌等惡性腫瘤中均有較好的療效，目前已有多篇今又生治療全身性實體瘤的研究論文在國內(nèi)外發(fā)表，其臨床研究效果分析如下：戚曉東等應(yīng)用靜脈滴注、腫瘤局部注射等方法治療42例晚期腫瘤患者，其中15例用“今又生”進行基因治療，27例接受“今又生”治療并聯(lián)合化療。結(jié)果顯示:“今又生”單用組15例患者，無CR，PR4例(267%)，SD6例(400%)，PD5例(333%)，臨床獲益率為667%?！敖裼稚甭?lián)合化療組27例患者，無CR，PR9例(333%)，SD10例(370%)，PD8例(296%)，臨床獲益率為703%?？偟呐R床獲益率為694%(29/42)?！敖裼稚睂︻^頸部癌、肺癌、胰腺

20、癌及胃癌均顯示出良好療效。未觀察到“今又生”相關(guān)的嚴重副反應(yīng)。結(jié)論:單用“今又生”能讓多數(shù)的晚期腫瘤病人獲益;聯(lián)合化療同樣安全有效。同樣的，張雷等采用靜脈滴注，腫瘤局部注射，胸、腹腔內(nèi)注射等方法聯(lián)合綜合免疫療法在臨床上也取得了不錯的療效，基因治療作為一種新的治療手段，初步研究結(jié)果證實對惡性腫瘤已取得較理想的療效，聯(lián)合綜合免疫療法可增強惡性腫瘤的整體療效。3.1.2Advexin：INTROGEN公司研發(fā)主治頭頸部癌Advexin是利用非復(fù)制和非整合腺病毒載體表達腫瘤抑制基因HYPERLINK/antibody/search.asp?txtitle=p53p53，適應(yīng)癥是頭頸部腫瘤。普遍認為，H

21、YPERLINK/antibody/search.asp?txtitle=p53p53基因產(chǎn)物是最重要的癌癥抑制蛋白，其表達缺陷或功能缺陷在腫瘤中最為常見。Advexin正是利用這一發(fā)現(xiàn)，在患者體內(nèi)或腫瘤局部表達正常的HYPERLINK/antibody/search.asp?txtitle=p53p53蛋白。Advexin的III期臨床研究以氨甲蝶齡為對照組，適應(yīng)癥是難治性頭頸部腫瘤，以臨床表現(xiàn)（腫瘤反應(yīng)和總體生存率）和HYPERLINK/antibody/search.asp?txtitle=p53p53蛋白水平為評判標準，采取隨機可控的研究模式。最后三期臨床成功，獲FDA批準上市。3.1

22、.3臨床階段的藥物表1部分處于臨床階段的藥物：藥物類型臨床試驗階段公司名稱、國家疾病類型治療方式P53-SLP疫苗臨床期格羅寧根大學(xué)醫(yī)學(xué)中心卵巢癌注射抗-P53淋巴細胞藥臨床期美國國家癌癥研究所轉(zhuǎn)移性癌癥注射RAD-p53基因治療單藥臨床或期深圳市賽百諾GENETECH有限公司晚期期口腔頜面部惡性腫瘤注射+手術(shù)重組人p53腺病毒基因藥臨床期深圳市賽百諾GENETECH有限公司晚期期非小細胞肺癌手術(shù)+基因治療Ad5CMV-p53gene臨床期美國國家癌癥研究所口腔或咽癌癌前基因治療重組人p53腺病毒基因藥臨床期深圳市賽百諾GENETECH有限公司頭頸惡性腫瘤化療+基因治療p53的瘤內(nèi)基因治療與化

23、療臨床期美國國家癌癥研究所乳腺癌化療+基因治療腺病毒介導(dǎo)的野生型P53基因治療臨床期北美腦腫瘤協(xié)會大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤重組人p53腺病毒基因藥臨床期美國國家癌癥研究所順鉑和紫杉醇耐藥的卵巢癌腹腔鏡手術(shù)Ad5CMV-p53gene臨床期Introgen公司乳腺癌手術(shù)+腫瘤輔助療法Ad5CMV-p53gene臨床期東部腫瘤協(xié)作組非小細胞肺癌基因治療3.2以重組人P53腺病毒注射液（今又生）來具體介紹重組p533.2.1重組人P53腺病毒的實驗方法用粘性末端連接法構(gòu)建了重組野生型P53-PXT1真核表達載體,并成功地轉(zhuǎn)化Cacl2處理的RR-1細胞,經(jīng)多種方法測定其連接率和轉(zhuǎn)化率。實驗大致流程如下

24、：PXT1的酶切及去磷酸化處理在純化的PXT1中加BamHI以切開LTRS間的單一BamHI酶切部位。使PXTI線性化，并具有與P53互補的粘性末端加牛小腸堿性磷酸酶進行去磷酸化處理。并純化。連接PXT1和P53CDNA：取連接混合物與處理后感受態(tài)細胞混合孵育轉(zhuǎn)化RR-1受體菌：取4Ll連接混合物和4Ll純化的PXT1分別加入100Ll剛復(fù)蘇的,用Cacl2處理并凍存于零下70度的RR-1感受態(tài)細胞,輕輕旋轉(zhuǎn)混勻,置冰上孵育40分鐘(其間輕輕混勻3次)后置42度水浴孵育2分鐘,再置37度孵育5分鐘,加LB培養(yǎng)基1ml,于37e水浴搖床振蕩培養(yǎng)(120轉(zhuǎn)/分)1小時,然后分別涂布含Amp、Tet

25、抗生素和不含抗生素的LB平板,于37攝氏度培養(yǎng)箱中孵育過夜,次日觀察細菌生長情況含重組PXT1-P53轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定a用插入失活試驗篩選陽性轉(zhuǎn)化子b用快速細胞破碎法鑒定轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒大小，篩選陽性轉(zhuǎn)化子c純化質(zhì)粒的酶切及電泳分析3.2.2重組人p53腺病毒注射液的質(zhì)量控制重組人p53腺病毒注射液的質(zhì)量控制主要包括產(chǎn)品鑒別、純度含量測定、生物活性效價、安全性及其他常規(guī)理化質(zhì)控項目。表1列舉了其中一些質(zhì)量標準。表2：重組人p53腺病毒注射液質(zhì)量標準檢測項目檢測方法規(guī)定標準基因組酶切圖譜mluI酶切法與對照品一致P53基因檢定PCR擴增與對照品一致活性單位TCID50=3.3*10HPLC純度陰離子

26、交換HPLC95.0%表達蛋白質(zhì)定性（定量）檢測WesternBlot/Elisa陽性/待定生物活性檢測SAOS2細胞殺傷法100500腺相關(guān)病毒（AVV）檢測PCR擴增法陰性3.2.3今又生的抗癌特點廣譜p53基因的廣譜性：p53基因是人體最重要的腫瘤抑制基因，是基因組保護神。人類60以上腫瘤的發(fā)生與p53基因突變有關(guān)，而無論腫瘤細胞是否發(fā)生p53基因突變，p53基因治療均有效。腺病毒載體的廣譜性：病毒對人體細胞具有天然的感染能力，腺病毒可感染幾乎所有類型的細胞；臨床試驗證實廣譜抗腫瘤；國內(nèi)外臨床試驗證實：重組人p53腺病毒注射液對40余種主要實體瘤均有明確療效。特異特異殺傷腫瘤細胞，對正常

27、細胞沒有影響：a.進入少正常細胞表面CAR（柯薩奇腺病毒受體）少，今又生難以進入；b.表達少正常細胞多為靜息狀態(tài)，缺乏p53基因啟動的激活因素；c.活性低正常細胞中缺乏P53蛋白活化的應(yīng)激條件；d.清除快正常細胞中有完善的P53蛋白泛素化降解途徑。安全p53基因的安全性：國內(nèi)外對該基因長達26年的研究中，未觀察到它對人體細胞有不良作用。腺病毒載體的安全性載體源于第一代人5型腺病毒，為腺病毒中致病力最弱的病毒株，野生型該病毒株也僅會偶致普通感冒；載體基因不整合到宿主細胞基因組中，無遺傳毒性；載體經(jīng)基因工程改構(gòu)，只對細胞實施一次感染，不能復(fù)制，無環(huán)境污染。3.2.4目前存在的問題及正在進行的優(yōu)化改

28、進、提出可能的解決方案重組人p53腺病毒注射劑安全性良好。大劑量靜脈注射時，除肝臟功能輕微受損外，未見有其他臟器明顯受損。主要存在不良反應(yīng)有注射部位疼痛，自限性發(fā)熱，偶有流感癥狀和過敏反應(yīng)。所以一般先給予腎上腺皮質(zhì)激素預(yù)防，采用不同給藥途徑和劑量。對多種腫瘤的臨床研究結(jié)果以及采用不同給藥途徑、不同劑量和療程、聯(lián)合手術(shù)和放/化療治療多種腫瘤的研究顯示，患者耐受性良好，沒有出現(xiàn)嚴重毒副作用及引起免疫缺陷。重組人p53腺病毒的治療在動物模型中取得重大的成功，但由于人類于動物本身的區(qū)別，在由于腫瘤的發(fā)生時受到多種因素作用的結(jié)果，因此rAd-p53單一治療模式的療效有限，而且缺少靶向性。另外wt-p53

29、在腫瘤細胞對藥物和涉嫌耐受中所起的作用機制還不甚清楚。Wt-p53基因治療能否啟動腫瘤細胞凋亡這一問題目前還不清楚。盡管大多數(shù)腫瘤存在p53基因失活突變等，仍有近40%腫瘤保持著wt-p53.這部分腫瘤存在p53凋亡通路商其他一些關(guān)鍵詞調(diào)控蛋白的基因突變，因此也致使凋亡通路失活。且p53突變細胞中可能還存在該凋亡通路商其他組分的基因突變。這些可能是在許多腫瘤中重建wt-p53功能的方案療效有限的原因。解決該問題的一個可能有效的方法是靶向轉(zhuǎn)染wt-p53調(diào)控的下游基因。對這些基因的研究多處于動物實驗階段，僅少數(shù)期臨床實驗在驗證轉(zhuǎn)染p16或Rb基因的療效。另外,高效率基因載體的優(yōu)化,病毒載體的安全

30、性,載體的組織特異靶向性、導(dǎo)入基因的調(diào)控,如何將p53與其他治療手段更加有效地結(jié)合,以及如何進行準確的療效評價等,都是p53基因治療中需要進一步解決的問題。4P53基因的研究展望再過10年，p53蛋白能給我們帶來些什么呢？當然我們肯定需要弄清楚各種p53蛋白亞型在器官和個體發(fā)育中的作用。我們現(xiàn)在已經(jīng)有了一點頭緒，那就是p53蛋白、p63蛋白和p73蛋白（詳見背景知識2）之間的比例關(guān)系，它們之間的作用是彼此拮抗的，有的是轉(zhuǎn)錄促進因子，有的又是轉(zhuǎn)錄抑制因子，但是它們對于細胞功能來說都是必不可少的。當然還有一些其它的線索幫助我們深入研究，比如p53蛋白單體或者二聚體能夠和p63蛋白或p73蛋白一起形

31、成異源四聚體（heterotetramers）。這三種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合在一起或許能夠產(chǎn)生一種新的作用，使得p53蛋白的功能更加復(fù)雜多樣。更為復(fù)雜的是，p53蛋白（包括各種亞型蛋白）還能發(fā)生多種翻譯后修飾，比如磷酸化、乙?；⒓谆?、泛素化、蘇素化、類泛素化以及N乙醯葡萄糖胺（N-acetylglucosamine）等。在細胞面臨各種應(yīng)激刺激信號或者發(fā)生某些生理改變時，p53蛋白會發(fā)生各種相應(yīng)的翻譯后修飾，因此我們認為這些翻譯后的修飾機制對于p53蛋白的功能也具有非常重要的作用，但是目前還缺乏實驗依據(jù)。比如，WIP1磷酸酶（又名PPM1D）是一種癌蛋白，它在多種腫瘤細胞中都會大量表達，它在p53蛋白上游發(fā)揮作用，能夠使共濟失調(diào)性毛細血管擴張癥突變激酶（ATM）失活，阻止MEK對p53蛋白的磷酸化修飾作用，這樣就能使胞內(nèi)野生型p53蛋白失活，因此也說明了這些翻譯后修飾機制的重要意義。也許在這個10年里我們有望看到WIP1蛋白抑制劑的臨床實驗結(jié)果。雖然體外培養(yǎng)細胞的實驗結(jié)果表明這些