DB33_T 2300-2020單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)規(guī)范(高清正版）

1、ICS 65.150CCS B 51DB33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)DB33/T 23002020單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)規(guī)范Technical specification for large-scale cultivation of microalgae2020 - 12 - 30 發(fā)布2021- 01 - 30 實施浙江省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB33/T 23002020I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，浙江永興水產(chǎn)種業(yè)有限

2、公司，寧波大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：柯愛英、徐繼林、周朝生、肖國強、蔡景波、黃振華、曾國權(quán)、胡園、朱潔、吳越、王瑤華。DB33/T 23002020 PAGE 7單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)的培養(yǎng)條件和設(shè)施、培養(yǎng)方法、日常管理、收獲和保存等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)苗種培育和養(yǎng)殖生產(chǎn)中的單胞藻培養(yǎng)。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過規(guī)范性文件的引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期的對應(yīng)版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)NY5051無公害食品 淡水養(yǎng)殖用水水質(zhì)NY5052

3、無公害食品 海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1指數(shù)生長期細胞迅速生長繁殖，藻細胞數(shù)量隨著培養(yǎng)時間的延長呈幾何級數(shù)遞增的時期。3.2一級培養(yǎng)以0.3 L5.0 L廣口瓶或三角燒瓶作培養(yǎng)容器，嚴(yán)格消毒，用濾紙封口的培養(yǎng)方式。3.3二級培養(yǎng)用容積為50 L100 L白塑料桶、尼龍袋、光生物反應(yīng)器等作為培養(yǎng)容器，嚴(yán)格消毒，連續(xù)充氣的培養(yǎng)方式。3.4三級培養(yǎng)采用育苗場現(xiàn)有的水泥培養(yǎng)池、帆布池等作為培養(yǎng)容器，消毒，連續(xù)充氣的培養(yǎng)方式。培養(yǎng)條件和設(shè)施培養(yǎng)用水海水應(yīng)符合GB 11607、NY 5052規(guī)定。淡水應(yīng)符合GB 11607、NY 5051規(guī)定。設(shè)施設(shè)備主要有蓄水池、沉淀池、

4、過濾池、輸水管、保種室、培養(yǎng)池、光生物反應(yīng)器等設(shè)施。場地要求光線明亮，通風(fēng)條件好，配備顯微鏡、生物培養(yǎng)箱、空調(diào)、冰箱等設(shè)備。配套供水、供氣、供電設(shè)施。培養(yǎng)容器一級培養(yǎng)的容器主要有0.3 L5.0 L的三角燒瓶，二級培養(yǎng)主要采用10 L20 L玻璃廣口瓶、50 L 100 L白色塑料桶、光生物反應(yīng)器等；三級大面積培養(yǎng)主要采用水泥池、帆布池等。培養(yǎng)方法器具消毒高溫消毒法培養(yǎng)用的玻璃器皿和金屬工具適用于煮沸消毒、烘箱干燥消毒、高壓滅菌等高溫消毒；培養(yǎng)用的充氣管、散氣石適用于煮沸消毒。消毒的方法見附錄 A?；瘜W(xué)藥品消毒法酒精消毒適用于手、鑷子、瓶口的消毒。將高錳酸鉀、漂白粉或漂白片、鹽酸配成溶液適用于

5、玻璃器具、塑料容器、充氣管、散氣石、玻璃缸、水泥池、管道等消毒。消毒方法見附錄 A。培養(yǎng)用水消毒加熱消毒法一級培養(yǎng)用的水經(jīng)砂濾、脫脂棉過濾，煮沸 5 分鐘10 分鐘，冷卻后使用。二級培養(yǎng)用水經(jīng)砂濾、250 目篩絹袋過濾煮沸 5 分鐘10 分鐘，冷卻后使用。漂白粉或漂白片消毒容積 50 L100 L 塑料桶，加水后用漂白片消毒，有效氯濃度為 20 mg/L50 mg/L，中和去除余氯后使用。水泥池加水后潑灑 80 目過濾過的漂白水，有效氯濃度為 15 mg/L30 mg/L，中和去除余氯后使用。光生物反應(yīng)器直接注入有效氯濃度為 50 mg/L100 mg/L 漂白水消毒，中和去除余氯后使用。光生

6、物反應(yīng)器長期培養(yǎng)藻類后消毒采用鹽酸 1000 mg/L+250 mg/L 次氯酸鈉混合消毒液在緩沖罐里，用水泵循環(huán)到管道里，消毒混合液可以重復(fù)使用。接種藻種質(zhì)量藻種應(yīng)無污染，無雜藻、藻細胞無附壁。接種濃度接種時間宜在早上6：0010：00進行，藻種在指數(shù)生長后期，一級培養(yǎng)接種濃度為1：51：10； 二級培養(yǎng)接種濃度1：101：50；三級培養(yǎng)根據(jù)天氣、生產(chǎn)需要來接種，接種濃度1：151：30。培養(yǎng)條件水產(chǎn)養(yǎng)殖常用微藻種類生態(tài)條件參數(shù)見附錄B。培養(yǎng)液常用培養(yǎng)液配方見附錄C、附錄D。日常管理觀察與處理觀察定期顯微鏡檢查，從藻細胞的形態(tài)、懸浮、污染情況等了解細胞生長是否正常。注意觀察藻液顏色， 有無附

7、壁、沉淀、菌膜和敵害生物，如發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)立即舍棄，并及時重新接種培養(yǎng)。一級培養(yǎng)空調(diào)控溫，光照用日光燈調(diào)節(jié)，每天搖晃藻種瓶4 次6 次，培養(yǎng)用的消毒水應(yīng)在5 天7 天用完。二級培養(yǎng)二級培養(yǎng)室保持采光良好，自然光照或人工光源，用遮光簾或遮陽布等設(shè)施，避免太陽光直射，充氣量微沸、封口，定期用漂白水培養(yǎng)場所進行消毒。三級培養(yǎng)控溫，用遮光簾或遮陽布等設(shè)施，調(diào)節(jié)光照，充氣微沸。記錄和補充培養(yǎng)液根據(jù)藻類的生長狀態(tài)和對藻類的需求量收獲一部分濃藻液，并補充等量的新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。對每次接種、培養(yǎng)液添加進行記錄。收獲和保存收獲單胞藻經(jīng)各培養(yǎng)階段，最終達到苗種及養(yǎng)殖生產(chǎn)單位所要求的藻種濃度和質(zhì)量，投喂的單胞藻以處于指

8、數(shù)生長期收獲。保存培養(yǎng)的單胞藻利用500目尼龍篩網(wǎng)富集、暗沉淀、加0.5 g/L1.0 g/L明礬或氫氧化鈣收集藻類， 冷藏或冷凍保存，以備隨時投喂使用。技術(shù)模式圖單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)模式圖見附錄E。附 錄 A（資料性）單胞藻培養(yǎng)常用消毒方法單胞藻培養(yǎng)常用消毒方法見表A.1表A.1 單胞藻培養(yǎng)常用消毒方法項目名稱煮沸烘箱干燥高壓滅菌高錳酸鉀漂白粉或漂白片鹽酸玻璃容器5 分鐘10 分鐘120 恒溫 2 小時121 ，維持 20 分鐘濃度 10 mg/L20 mg/L 浸泡 5 分鐘10 分鐘濃度 10 mg/L100 mg/L浸泡 12 小時鹽酸：水1：11：5金屬工具5 分鐘10 分鐘120

9、恒溫 2 小時121 ，維持 20 分鐘/塑料容器/濃度 10 mg/L20 mg/L 浸泡 5 分鐘10 分鐘濃度 10 mg/L100 mg/L浸泡 12 小時鹽酸：水1：11：5充氣管散氣石5 分鐘10 分鐘/濃度 10 mg/L20 mg/L 浸泡 5 分鐘10 分鐘濃度 10 mg/L100 mg/L浸泡 12 小時/水泥池玻璃缸/濃度 10 mg/L20 mg/L 浸泡 5 分鐘10 分鐘濃度 10 mg/L100 mg/L浸泡 12 小時鹽酸：水1：11：5光生物反應(yīng)器、管道/濃度 10 mg/L20 mg/L 浸泡 5 分鐘10 分鐘濃度 10 mg/L100 mg/L浸泡 1

10、2 小時鹽酸：水1：11：5附 錄 B（資料性）水產(chǎn)養(yǎng)殖常用微藻種類生態(tài)條件參數(shù)水產(chǎn)養(yǎng)殖常用微藻種類生態(tài)條件參數(shù)見表B.1。表B.1 水產(chǎn)養(yǎng)殖常用微藻種類生態(tài)條件參數(shù)品種隸屬PH適溫范圍（）鹽度范圍（）光照強度（）三角褐指藻硅藻門7.010.0525153510008000小新月菱形藻7.010.0528203510008000纖細角毛藻6.59.510401030500015000牟氏角毛藻6.59.510401030500015000假微型海連藻7.010.020301535100010000威氏海連藻7.010.020301535300010000中肋骨條藻7.010.010251040

11、30007000等鞭金藻金藻門7.09.51535105030009000球等鞭金藻7.010.010351050300010000叉鞭金藻7.09.59351050300015000綠色巴夫藻7.09.51035580300015000亞心形扁藻綠藻門7.010.07301040100020000青島大扁藻7.010.010351040100010000塔胞藻7.010.07301040100020000小球藻6.08.51036045100020000微綠球藻7.09.51036436300020000柵藻5.0-7.5103501000-10000附 錄 C（資料性）常用海洋微藻培養(yǎng)液配

12、方常用海洋微藻培養(yǎng)液配方見表C.1。表C.1 常用海洋微藻培養(yǎng)液配方隸屬培養(yǎng)液配方成分一級培養(yǎng) mg二級培養(yǎng) mg三級培養(yǎng) mg金藻門硝酸鈉或硝酸鉀100.0050.0020.00磷酸二氫鉀15.0010.003.00硫酸亞鐵或檸檬酸鐵2.502.501.5硫酸錳0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/10.0010.00維生素 B10.10.05/維生素 B20.00050.0005/碳酸氫鈉1.00/消毒水1 L1 L1 L硅藻門硝酸鈉或硝酸鉀90.0050.0020.00磷酸二氫鉀20.004.003.00硫酸亞鐵或檸檬酸鐵2.502.501.5硫酸錳0.250.25/ED

13、TA20.0010.00/尿素/10.0010.00維生素 B10.10.001/維生素 B20.00050.000008/碳酸氫鈉1.00/硅酸鈉10.0010.0010.00消毒水1 L1 L1 L綠藻門硝酸鈉或硝酸鉀100.0020.0020.00磷酸二氫鉀20.004.003.00硫酸亞鐵或檸檬酸鐵2.502.501.0硫酸錳0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/20.0020.00維生素 B10.10.001/維生素 B20.00050.000008/碳酸氫鈉1.00/消毒水1 L1 L1 L附 錄 D（資料性）常用淡水藻類水生 4 號培養(yǎng)液配方常用淡水藻類水生4號培

14、養(yǎng)液配方見表D.1。表D.1 常用淡水藻類水生4號培養(yǎng)液配方成分硫酸銨mg/L磷酸氫二鉀mg/L過磷酸鈣mg/L硫酸鎂mg/L氯化鉀mg/L碳酸氫鈉mg/L三氯化鐵1%水溶液土壤浸出液ml用量200103080251001滴0.5注：土壤浸出液配制：（菜園土1份+2份水）混合搖勻，靜止，取上清液。1DB33/T 23002020附 錄 E（資料性）單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)模式圖單胞藻規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)模式見圖E.1。一級培養(yǎng)二級培養(yǎng)三級培養(yǎng)將保種室中培養(yǎng)的藻種擴種到將經(jīng)過濾培養(yǎng)水燒開注入桶將經(jīng)過濾培養(yǎng)水注入桶內(nèi)，加漂白將經(jīng)過濾水加有效氯濃度 50將池子沖洗干凈，加經(jīng)過濾的水到0.3 L5 L 的玻璃瓶，用水需內(nèi)密封，冷卻后加培養(yǎng)液，接片有效氯濃度 20 mg/L50 mg/L,mg/L100 mg/L,用水泵注入管水位 80 cm120 cm ,充氣潑灑經(jīng)經(jīng)過脫脂棉過濾煮沸，培養(yǎng)液種培養(yǎng)。充氣管、氣石煮沸消充氣-停氣-密封，12 小時24