科研項(xiàng)目策劃與實(shí)施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門(mén)PPT課件

1、科研項(xiàng)目策劃與實(shí)施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門(mén)PPT課件科研項(xiàng)目的策劃與實(shí)施研究計(jì)劃的安排科研準(zhǔn)備工作和實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)的實(shí)施機(jī)遇靈感組織策劃PI (principal Investigator) 負(fù)責(zé)制分成若干課題組2-3個(gè)研究生完成1個(gè)項(xiàng)目制定并遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則定期Lab Meeting：進(jìn)展、開(kāi)題報(bào)告、文獻(xiàn)綜述、學(xué)術(shù)討論 跟蹤課題進(jìn)展；及時(shí)解決問(wèn)題；提高工作效率 定期向?qū)焻R報(bào)：進(jìn)展、問(wèn)題、下步計(jì)劃Journal Club積極參加學(xué)術(shù)交流午餐（茶）聚會(huì)學(xué)術(shù)討論 旁人可能提出有益的建議，即使并未直接指出擺脫困境的解決方法，但由于知識(shí)背景不同，可能從不同角度觀察問(wèn)題并提出新方法。（瓊脂） 一個(gè)新設(shè)想可能由兩

2、三個(gè)人集中各自的知識(shí)或設(shè)想而產(chǎn)生。 討論是披露謬誤的寶貴方法。以錯(cuò)誤知識(shí)或推理為基礎(chǔ)的設(shè)想可以通過(guò)討論得到及時(shí)的糾正。 討論和學(xué)術(shù)交流是開(kāi)拓思路、了解進(jìn)展和信息交流的極好機(jī)會(huì)。 討論有益于擺脫重復(fù)不利的思路。與不熟悉本研究領(lǐng)域的人進(jìn)行討論，可能對(duì)打破固定思路更有幫助。（請(qǐng)教外行） 個(gè)人科研計(jì)劃安排開(kāi)題報(bào)告：題目名稱、背景、目的、研究?jī)?nèi)容、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案、研究進(jìn)度安排、預(yù)測(cè)結(jié)果、可行性分析研究時(shí)間（進(jìn)度）計(jì)劃安排： - 總體時(shí)間安排：年度與學(xué)期安排 - 詳細(xì)時(shí)間安排：月、周計(jì)劃（充分利用時(shí)間） 注意：提前半年至一年撰寫(xiě)并發(fā)表SCI論文中期科研報(bào)告：主要結(jié)果、存在問(wèn)題和后續(xù)工作計(jì)劃至少預(yù)留1-

3、2個(gè)月的時(shí)間撰寫(xiě)學(xué)位論文博士生個(gè)人計(jì)劃學(xué)期安排第一學(xué)期：上課；查閱課題相關(guān)文獻(xiàn)；做課題相關(guān)綜述；完成開(kāi)題報(bào)告（科研設(shè)計(jì)和計(jì)劃）；具體的方法學(xué)、數(shù)據(jù)等書(shū)面準(zhǔn)備工作。第二至四學(xué)期：試劑、器材準(zhǔn)備工作；方法學(xué)的摸索；預(yù)試和正式實(shí)驗(yàn)、中期科研報(bào)告；第五學(xué)期：繼續(xù)實(shí)驗(yàn)；撰寫(xiě)并發(fā)表SCI文章第六學(xué)期：補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)；撰寫(xiě)學(xué)位論文并答辯；第二至三學(xué)期、四至五學(xué)期各完成一篇論文?？蒲许?xiàng)目的策劃與實(shí)施研究計(jì)劃的安排科研準(zhǔn)備工作和實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)的實(shí)施機(jī)遇靈感科研實(shí)施原則充分的準(zhǔn)備工作，包括實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)等； 制定操作規(guī)程，包括實(shí)驗(yàn)方案、操作程序、質(zhì)量控制、儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)化及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程等； 規(guī)范

4、原始記錄，包括數(shù)據(jù)記錄的準(zhǔn)確性、完整性及更改數(shù)據(jù)的規(guī)范性，尤其是數(shù)據(jù)記錄的原始性，牢記書(shū)面記錄乃行為發(fā)生的憑證； 審核監(jiān)督，包括課題負(fù)責(zé)人對(duì)課題的監(jiān)督管理、定期檢查和結(jié)果分析等。充分的準(zhǔn)備-書(shū)面準(zhǔn)備工作 實(shí)驗(yàn)方案及技術(shù)路線的設(shè)計(jì)確定可靠穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)操作方法：確定實(shí)驗(yàn)體系；設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)照；選擇質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（如系統(tǒng)誤差允許范圍、隨機(jī)誤差降到最低等）；選擇實(shí)驗(yàn)器材；實(shí)驗(yàn)流程的可控性；判斷標(biāo)準(zhǔn)的客觀性實(shí)驗(yàn)材料的明細(xì)準(zhǔn)備：書(shū)面匯集實(shí)驗(yàn)所需材料的名稱、生產(chǎn)廠家、批號(hào)、規(guī)格及有效期等信息，同時(shí)查詢各類試劑的配方、配制方法和保存條件等。上述信息有利于實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，也有利于今后檢索。 實(shí)驗(yàn)分組的確定 充分的準(zhǔn)備-實(shí)驗(yàn)

5、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料與器材的準(zhǔn)備；基本操作的訓(xùn)練： 試劑的配制和儲(chǔ)存、試劑的標(biāo)記和分類 樣品的處理、標(biāo)記、分裝和儲(chǔ)存 pH值的測(cè)定與調(diào)節(jié)、蛋白定量、核酸定量 加樣器的正確使用 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器的正確使用；基本方法學(xué)的訓(xùn)練：細(xì)胞培養(yǎng)（凍存和復(fù)蘇）、分子生物學(xué)、Western blot、FACS、免疫熒光與組化、ELISA實(shí)驗(yàn)室的安全水電煤氣的安全性 用電設(shè)備的安全操作 玻璃儀器的安全使用 氧氣瓶的安全使用 高壓鍋的安全使用 高溫烤箱的安全使用 化學(xué)試劑的安全使用使用易燃易爆試劑（如乙醇、乙醚等）須遠(yuǎn)離明火。揮發(fā)性有毒試劑一般須在通風(fēng)廚中操作，且操作者須進(jìn)行相應(yīng)防護(hù)（如戴口罩）。接觸性有毒試劑應(yīng)戴手套操作，

6、并避免用嘴吸或直接用手觸摸。各種化學(xué)試劑均遠(yuǎn)離食品飲料，以防誤食引起中毒。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿類試劑須規(guī)范使用，不可過(guò)分震搖，以防濺出腐蝕傷人。 放射性同位素的安全防護(hù) 同位素的射線類型 ：X射線和射線可危害人體全身多個(gè)器官；射線因其穿透性小，僅危害皮膚淺表和眼晶體；射線一般不引起外照射危害 使用放射性物質(zhì)的注意事項(xiàng) ： 放射性同位素的實(shí)驗(yàn)操作須在同位素乙級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行； 放射性物質(zhì)的存放方式要符合射線類型特點(diǎn)； 放射性物質(zhì)的標(biāo)記須清晰，包括名稱、含量及時(shí)間； 放射性廢物須按規(guī)定進(jìn)行存放和處理； 放射性實(shí)驗(yàn)的操作須進(jìn)行相應(yīng)屏蔽防護(hù)并在專門(mén)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行； 放射性核素使用過(guò)程中對(duì)周圍環(huán)境造成的污染須及時(shí)被處

7、理； 同位素實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置放射性核素監(jiān)測(cè)儀。 生物的安全防護(hù) P1：普通實(shí)驗(yàn)一般在I級(jí)實(shí)驗(yàn)室中操作；P2：枯草桿菌、大腸桿菌、腺病毒等須在P2級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作，并有防蚊要求；P3：烈性傳染病相關(guān)病原研究須在P3實(shí)驗(yàn)室中操作；P4：烈性傳染病的大動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)須在P4級(jí)實(shí)驗(yàn)室中操作。 P3和P4級(jí)實(shí)驗(yàn)室均須經(jīng)國(guó)家級(jí)管理部門(mén)認(rèn)證?？蒲许?xiàng)目的策劃與實(shí)施研究計(jì)劃的安排科研準(zhǔn)備工作和實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)的實(shí)施機(jī)遇靈感實(shí)驗(yàn)的實(shí)施預(yù)實(shí)驗(yàn)：方法的熟悉；實(shí)驗(yàn)條件的摸索正式試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)條件和操作標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)計(jì)必要的對(duì)照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的樣本數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄的正確書(shū)寫(xiě)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄的保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。預(yù)實(shí)驗(yàn)的目

8、的在正式實(shí)驗(yàn)前所進(jìn)行的小規(guī)模實(shí)驗(yàn)。 檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否完善； 確定實(shí)驗(yàn)操作方法是否正確可行 ； 獲得某些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，確定合適的樣本數(shù)和必要的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)，以確保后續(xù)正式實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行； 摸索最佳實(shí)驗(yàn)條件； 初步檢驗(yàn)假說(shuō)。 某課題在觀察基因修飾的骨髓干細(xì)胞對(duì)Fischer 344大鼠骨髓重建影響的研究中，研究者僅參照文獻(xiàn)報(bào)道中其他品系大鼠及小鼠骨髓抑制模型在建模時(shí)使用的鈷60照射劑量，確定了照射方案，未經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)而直接開(kāi)始正式實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在隨后“正式”實(shí)驗(yàn)中，因所選照射劑量不適合該品系鼠，多數(shù)模型鼠在極短時(shí)間內(nèi)死亡，故無(wú)法觀察處理因素產(chǎn)生的效應(yīng)結(jié)果。 預(yù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法的摸索：選擇正確的實(shí)驗(yàn)技術(shù)（文獻(xiàn)或?qū)?/p>

9、驗(yàn)方法書(shū)）詳細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)參觀他人做實(shí)驗(yàn)，并記下筆記自己寫(xiě)試驗(yàn)步驟配試劑和實(shí)驗(yàn)材料、器具的準(zhǔn)備做實(shí)驗(yàn)。摸索條件的試驗(yàn)：如藥物劑量的摸索、作用時(shí)間的摸索等。導(dǎo)向性實(shí)驗(yàn)：小規(guī)模試驗(yàn)驗(yàn)證正式實(shí)驗(yàn)的意義。篩選性試驗(yàn)：如藥物篩選，用以決定哪種藥物可進(jìn)一步做實(shí)驗(yàn)。觀測(cè)性實(shí)驗(yàn)：是為搜集正式實(shí)驗(yàn)所需數(shù)據(jù)（如均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)等）而進(jìn)行的小規(guī)模預(yù)試，目的是對(duì)主要實(shí)驗(yàn)的部署進(jìn)行指導(dǎo)。 以傳染或毒性因子為例，在觀測(cè)實(shí)驗(yàn)中, 采用稀釋度間隔很大(如100倍), 用于每一稀釋度的動(dòng)物很少（如兩頭）的策略。取得結(jié)果后，在可能有作用的滴定終點(diǎn)兩側(cè)再選擇間隔小(如5倍)的稀釋度, 同時(shí)使用較大數(shù)量的動(dòng)物 (如5只)。通過(guò)此

10、方法，可用最少量動(dòng)物而獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的實(shí)施預(yù)實(shí)驗(yàn)：方法的熟悉；實(shí)驗(yàn)條件的摸索正式試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)條件和操作標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)計(jì)必要的對(duì)照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的樣本數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄的正確書(shū)寫(xiě)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄的保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。正式實(shí)驗(yàn)決定性試驗(yàn)：判斷假說(shuō)的成立與否根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選定實(shí)驗(yàn)條件，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，一般不能隨便改變，已避免試驗(yàn)結(jié)果的不可比。實(shí)驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化（步驟、試劑配制、濃度稀釋等）設(shè)計(jì)各種必要的對(duì)照做好標(biāo)簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的足夠樣本數(shù)Nat Immunol. 2004 Nov;5(11):1124-33.正式實(shí)驗(yàn)決定性試驗(yàn)：判斷

11、假說(shuō)的成立與否根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選定實(shí)驗(yàn)條件，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，一般不能隨便改變，已避免試驗(yàn)結(jié)果的不可比。實(shí)驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化（步驟、試劑配制、濃度稀釋、儀器型號(hào)和參數(shù)等）設(shè)計(jì)各種必要的對(duì)照做好標(biāo)簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的足夠樣本數(shù)實(shí) 驗(yàn) 誤 差系統(tǒng)誤差：指一系列測(cè)定結(jié)果與真值之間存在同一傾向的誤差，有明顯規(guī)律性，可在一定條件下被重復(fù)，可通過(guò)質(zhì)控預(yù)防和校正。（千分卡尺測(cè)量腫瘤）隨機(jī)誤差：屬一種偶然、無(wú)法預(yù)料的誤差，難以校正。過(guò)失誤差：純粹屬人為的責(zé)任誤差，一般通過(guò)實(shí)驗(yàn)室管理和技術(shù)培訓(xùn)可以避免。 控制實(shí)驗(yàn)方法質(zhì)量的關(guān)鍵是規(guī)范意識(shí) ！實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程的規(guī)范化 實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)

12、準(zhǔn)化的策略應(yīng)首先明確(尤其對(duì)某些新的觀察指標(biāo))規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)化方法的流程，然后制定標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，對(duì)各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行細(xì)化處理，保證實(shí)驗(yàn)人員可以不用詢問(wèn)即可遵照?qǐng)?zhí)行。 實(shí)驗(yàn)名稱，對(duì)于具體課題的實(shí)驗(yàn)操作，名稱應(yīng)是特異性和具體的，勿僅標(biāo)示通用性實(shí)驗(yàn)名稱； 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?實(shí)驗(yàn)方法； 實(shí)驗(yàn)流程，指在實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹笇?dǎo)下的特定流程，每個(gè)具體步驟均應(yīng)詳細(xì)注明實(shí)驗(yàn)中實(shí)際應(yīng)用的試劑名稱或劑量等，避免通用性的實(shí)驗(yàn)流程； 實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備等。 標(biāo)準(zhǔn)物的選擇：為建立標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)體系，選擇標(biāo)準(zhǔn)品，并在預(yù)實(shí)驗(yàn)中利用標(biāo)準(zhǔn)品確定各種實(shí)驗(yàn)條件（包括最佳劑量、最佳時(shí)間和判斷標(biāo)準(zhǔn)等）。然后，以此數(shù)據(jù)作為測(cè)試樣品的標(biāo)準(zhǔn)定量或定性參數(shù)。（蛋白定量、信號(hào)

13、分子磷酸化）操作程序的控制：建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程，實(shí)驗(yàn)操作人員僅進(jìn)行機(jī)械性操作，無(wú)需任何想象、設(shè)計(jì)和預(yù)測(cè)，故要求在操作之間制定嚴(yán)密的操作流程和設(shè)計(jì)方案。（隨機(jī)性是造成實(shí)驗(yàn)誤差的最常見(jiàn)原因，如電話及其它無(wú)關(guān)事情的干擾；協(xié)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)化和靈活性）試劑儀器的選擇：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)采用同一廠商相同批號(hào)或相同規(guī)格的試劑，以基本保證不同批次實(shí)驗(yàn)的差異并非由試劑所致。儀器規(guī)格、型號(hào)也可能影響實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程的規(guī)范化正式實(shí)驗(yàn)決定性試驗(yàn)：判斷假說(shuō)的成立與否根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選定實(shí)驗(yàn)條件，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，一般不能隨便改變，已避免試驗(yàn)結(jié)果的不可比。實(shí)驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化（步驟、試劑配制、濃度稀釋等）設(shè)計(jì)各種必要的對(duì)照做好

14、標(biāo)簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的足夠樣本數(shù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)施預(yù)實(shí)驗(yàn)：方法的熟悉；實(shí)驗(yàn)條件的摸索正式試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)條件和操作標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)計(jì)必要的對(duì)照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的樣本數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄的正確書(shū)寫(xiě)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄的保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。實(shí)驗(yàn)記錄的意義利于總結(jié)工作并尋找實(shí)驗(yàn)中的差錯(cuò)。實(shí)驗(yàn)記錄均須歸檔保存。若一旦出現(xiàn)問(wèn)題需要審核，完整的實(shí)驗(yàn)記錄將會(huì)提供最可靠的資料。完全依靠個(gè)人記憶絕非明智之舉。將結(jié)果立即記錄于實(shí)驗(yàn)記錄本，而非日后耗費(fèi)時(shí)間再重新回憶記錄，以免遺忘某些重要的細(xì)節(jié)。了解早期所開(kāi)展而當(dāng)時(shí)并未受到重視的實(shí)驗(yàn)，可從以前的實(shí)驗(yàn)記錄中獲取信息和經(jīng)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)記錄是成功操作實(shí)驗(yàn)的

15、關(guān)鍵。它應(yīng)該是所做實(shí)驗(yàn)的完整記錄。一本好的實(shí)驗(yàn)記錄使人在很久以后還能重構(gòu)當(dāng)初實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容、過(guò)程、結(jié)果和教訓(xùn)。應(yīng)養(yǎng)成詳細(xì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)記錄的習(xí)慣。實(shí)驗(yàn)記錄務(wù)求詳盡、忠實(shí)，不僅本人一目了然，同行也能看得懂。實(shí)驗(yàn)記錄的用途為：便于本人探究實(shí)驗(yàn)成敗原因；供他人查找相關(guān)實(shí)驗(yàn)的重要信息；為撰寫(xiě)論文提供原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)記錄的內(nèi)容日期：包括年、月、日和時(shí)間，環(huán)境條件（如溫度、濕度等）；實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)材料： 試劑（名稱、批號(hào)、廠家、濃度、溶劑、保存條件）； 儀器（名稱、型號(hào)、供貨廠商）； 細(xì)胞細(xì)菌（名稱、復(fù)蘇、凍存、保存處）； 動(dòng)物（品系、來(lái)源、年齡、性別、數(shù)量）； 臨床標(biāo)本（姓名、性別、年齡、診斷及其他臨床資

16、料）；試劑的配制實(shí)驗(yàn)方法：詳細(xì)描述實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：包括所收集的原始數(shù)據(jù)、可視圖及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的整理。 出現(xiàn)的問(wèn)題：應(yīng)分析其可能的原因及解決方法，并詳細(xì)記錄于實(shí)驗(yàn)記錄本上。實(shí)驗(yàn)小結(jié)：簡(jiǎn)短的實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)和解釋，將有助于指導(dǎo)后續(xù)的研究。其內(nèi)容包括主要結(jié)論、存在問(wèn)題、改進(jìn)方法和實(shí)驗(yàn)體會(huì)等 實(shí)驗(yàn)記錄的書(shū)寫(xiě)要求-基本要求 實(shí)驗(yàn)原始記錄須記載于正式實(shí)驗(yàn)記錄本上，實(shí)驗(yàn)記錄本應(yīng)按頁(yè)碼裝訂；須有連續(xù)頁(yè)碼編號(hào)，不得缺頁(yè)或挖補(bǔ)。實(shí)驗(yàn)記錄本首頁(yè)一般作為目錄頁(yè)，可在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后陸續(xù)填寫(xiě)，或在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)統(tǒng)一填寫(xiě)。每次實(shí)驗(yàn)須按年、月、日順序在實(shí)驗(yàn)記錄本相關(guān)頁(yè)碼右上角或左上角記錄實(shí)驗(yàn)日期和時(shí)間，也可記錄實(shí)驗(yàn)條件如天氣、溫度、濕度

17、等。 字跡工整，采用規(guī)范的專業(yè)術(shù)語(yǔ)、計(jì)量單位及外文符號(hào)，英文縮寫(xiě)第一次出現(xiàn)時(shí)須注明全稱及中文釋名。使用藍(lán)色或黑色鋼筆、碳素筆記錄，不得使用鉛筆或易褪色的筆（如油筆等）記錄。 實(shí)驗(yàn)記錄需修改時(shí)，采用劃線方式去掉原書(shū)寫(xiě)內(nèi)容，但須保證仍可辨認(rèn)，然后在修改處簽字，避免隨意涂抹或完全涂黑。空白處可標(biāo)記“廢”字或打叉。 實(shí)驗(yàn)記錄中應(yīng)如實(shí)記錄實(shí)際所作的實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果、表格、圖表和照片均應(yīng)直接記錄或訂在實(shí)驗(yàn)記錄本中，成為永久記錄。 實(shí)驗(yàn)記錄本應(yīng)作為發(fā)表論文和實(shí)驗(yàn)室科技檔案管理的必備文件。研究生畢業(yè)應(yīng)在離校前將全部實(shí)驗(yàn)記錄和其他科研資料上繳實(shí)驗(yàn)室保管和存檔，不得隨意處置或丟棄。 實(shí)驗(yàn)記錄的書(shū)寫(xiě)要求-基本要求 實(shí)

18、驗(yàn)原始記錄須記載于正式實(shí)驗(yàn)記錄本上，實(shí)驗(yàn)記錄本應(yīng)按頁(yè)碼裝訂；須有連續(xù)頁(yè)碼編號(hào)，不得缺頁(yè)或挖補(bǔ)。實(shí)驗(yàn)記錄本首頁(yè)一般作為目錄頁(yè)，可在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后陸續(xù)填寫(xiě)，或在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)統(tǒng)一填寫(xiě)。每次實(shí)驗(yàn)須按年、月、日順序在實(shí)驗(yàn)記錄本相關(guān)頁(yè)碼右上角或左上角記錄實(shí)驗(yàn)日期和時(shí)間，也可記錄實(shí)驗(yàn)條件如天氣、溫度、濕度等。 字跡工整，采用規(guī)范的專業(yè)術(shù)語(yǔ)、計(jì)量單位及外文符號(hào)，英文縮寫(xiě)第一次出現(xiàn)時(shí)須注明全稱及中文釋名。使用藍(lán)色或黑色鋼筆、碳素筆記錄，不得使用鉛筆或易褪色的筆（如油筆等）記錄。 實(shí)驗(yàn)記錄需修改時(shí)，采用劃線方式去掉原書(shū)寫(xiě)內(nèi)容，但須保證仍可辨認(rèn)，然后在修改處簽字，避免隨意涂抹或完全涂黑?？瞻滋幙蓸?biāo)記“廢”字或打叉。 實(shí)驗(yàn)

19、記錄中應(yīng)如實(shí)記錄實(shí)際所作的實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果、表格、圖表和照片均應(yīng)直接記錄或訂在實(shí)驗(yàn)記錄本中，成為永久記錄。 實(shí)驗(yàn)記錄本應(yīng)作為發(fā)表論文和實(shí)驗(yàn)室科技檔案管理的必備文件。研究生畢業(yè)應(yīng)在離校前將全部實(shí)驗(yàn)記錄和其他科研資料上繳實(shí)驗(yàn)室保管和存檔，不得隨意處置或丟棄。 實(shí)驗(yàn)記錄的書(shū)寫(xiě)要求- 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄須及時(shí)、準(zhǔn)確、真實(shí)、完整，盡可能將原始數(shù)據(jù)記錄到實(shí)驗(yàn)記錄本上，嚴(yán)禁偽造或編造數(shù)據(jù)，并避免漏記和隨意涂改。 圖表：由自動(dòng)記錄儀打印的圖表和數(shù)據(jù)資料應(yīng)按順序粘貼于記錄本相應(yīng)位置，若圖表較多，可先將圖表按順序裝訂在一起，然后粘貼于記錄本上 。壓邊簽字 。熱敏紙打印的數(shù)據(jù)，打印后立即復(fù)印，并將原件和復(fù)

20、印件一并粘貼在實(shí)驗(yàn)記錄的相應(yīng)位置并壓邊簽字。 照片：各種照片直接粘貼于實(shí)驗(yàn)記錄本相應(yīng)位置，壓邊簽字。細(xì)胞或病理組織照片須標(biāo)記顯微鏡倍數(shù)、染色方式等信息。腫瘤照片須含標(biāo)尺刻度。此外，照片背后應(yīng)寫(xiě)明實(shí)驗(yàn)日期和處理因素等。相應(yīng)組織切片存放位置、編號(hào)和名稱等須記錄于實(shí)驗(yàn)記錄本相應(yīng)位置，以便后續(xù)查找并重新分析。自成體系的表格記錄：可單獨(dú)裝訂成冊(cè)，但須在實(shí)驗(yàn)記錄本相應(yīng)位置記錄相關(guān)信息和存放位置及編號(hào)。 電子板原始數(shù)據(jù)的記錄：要有幾處拷貝；可整理分析后打印粘貼，但實(shí)驗(yàn)記錄本上須明確記錄原始數(shù)據(jù)和圖表的存放位置、標(biāo)號(hào)含義等基本信息。掃描圖片：各種掃描圖片應(yīng)粘貼于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)下方，其測(cè)定數(shù)據(jù)置于掃描圖片下方，從而有

21、助于參考圖片分析數(shù)據(jù)。 各種操作流程的記錄：各種操作流程均需記載于記錄本上，簡(jiǎn)單的流程可直接記載，復(fù)雜的流程可打印后粘貼到記錄本。 摸索實(shí)驗(yàn)方法的記錄 ：第一次引用某方法時(shí)應(yīng)注明其出處。若首次使用某種成分或方法，應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)描述。凡摸索實(shí)驗(yàn)方法的記錄均應(yīng)盡可能完全，宜詳細(xì)記錄每一實(shí)驗(yàn)條件的確定過(guò)程，以便最后確定標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作流程。須特別注意試劑的具體用量和濃度。 一旦建立標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)流程，即可形成完整的protocol，日后進(jìn)行同一實(shí)驗(yàn)流程時(shí)，除首次記錄完整的protocol外，其余僅記載實(shí)驗(yàn)中改動(dòng)的步驟，并表明所參照protocol的具體名稱和出處即可。 實(shí)驗(yàn)記錄的書(shū)寫(xiě)要求- 實(shí)驗(yàn)流程的記錄實(shí)驗(yàn)記

22、錄注意的問(wèn)題實(shí)驗(yàn)記錄不允許隔天寫(xiě)（未記錄改變條件之例）以及寫(xiě)在紙片上。保持實(shí)驗(yàn)記錄的真實(shí)性和完整性；記錄時(shí)間（年、月、日）。原始數(shù)據(jù)（包括照片）必須貼在當(dāng)天的試驗(yàn)結(jié)果欄里；不要保留在公共計(jì)算機(jī)里。即便是陰性結(jié)果，也必須保留。不能僅記錄符合主觀想象的內(nèi)容和自認(rèn)為成功的實(shí)驗(yàn)。定期整理、分析數(shù)據(jù)，并向?qū)焻R報(bào)。養(yǎng)成實(shí)驗(yàn)后及時(shí)整理和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的習(xí)慣，常會(huì)有意想不到的收獲。實(shí)驗(yàn)資料的保存 電子版資料：打印一份粘貼在實(shí)驗(yàn)記錄本上或單獨(dú)裝訂成冊(cè)，同時(shí)保存電子版，并注意備份。例如，文字材料、各種結(jié)果的掃描圖片、各種圖表數(shù)據(jù)等。注意：掃描圖片的像素須足夠大，一般保證分辨率dpi300萬(wàn)；照片須標(biāo)記放大倍數(shù)，如

23、400；圖片須進(jìn)行必要標(biāo)記，如Western blot掃描底片應(yīng)標(biāo)記日期、泳道、樣品名稱等。各種實(shí)驗(yàn)樣品：用記號(hào)筆直接在管壁上標(biāo)記僅適用于短期保存，長(zhǎng)期保存須將寫(xiě)于管壁的字用透明膠覆蓋，否則易在反復(fù)溫度變化過(guò)程中脫色。最好的標(biāo)記方法是將標(biāo)記文字打印到雙面膠布上，然后粘貼在管壁上。樣品標(biāo)記內(nèi)容應(yīng)至少包括日期、樣品名稱、濃度。實(shí)驗(yàn)記錄本：應(yīng)妥善保存，避免水浸、缺頁(yè)，保持整潔無(wú)破損，避免丟失。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，原始實(shí)驗(yàn)記錄本應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人檢查、簽字后歸檔；實(shí)驗(yàn)人員可復(fù)制實(shí)驗(yàn)記錄供本人使用，實(shí)驗(yàn)人員不得將實(shí)驗(yàn)記錄原件帶走。實(shí)驗(yàn)的實(shí)施預(yù)實(shí)驗(yàn)：方法的熟悉；實(shí)驗(yàn)條件的摸索正式試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)條件和操作標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)計(jì)必要

24、的對(duì)照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的樣本數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄的正確書(shū)寫(xiě)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄的保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。觀察中常見(jiàn)的問(wèn)題“留意意外之事”是研究工作者的座右銘。在觀察的鄰域中，機(jī)遇只偏愛(ài)那種有準(zhǔn)備的頭腦。觀察中常見(jiàn)的問(wèn)題： - 受主觀因素的影響 ：人工測(cè)量 - 忽視細(xì)節(jié)：曼切斯特醫(yī)生教學(xué) - 視而不見(jiàn)；“我們見(jiàn)到的只是我們知道的?！备璧?司空見(jiàn)慣、不了解或無(wú)興趣的現(xiàn)象；某些既非意料之中、又非特地尋找的現(xiàn)象 - 虛假的觀察：產(chǎn)生錯(cuò)覺(jué)；頭腦本身滋生的（Goetingen心理學(xué)會(huì)）：頭腦容易無(wú)意識(shí)地根據(jù)過(guò)去的經(jīng)歷、知識(shí)和自覺(jué)的意愿去填補(bǔ)空白。要學(xué)會(huì)觀察不知道的和意料外的現(xiàn)象；有效的觀察是指注意到

25、某個(gè)事物，并通過(guò)將它和某個(gè)注意到的或已知的事物聯(lián)系起來(lái)，賦予其意義；因此，觀察既包含知覺(jué)因素又包含思維因素在內(nèi)。實(shí)驗(yàn)觀察類型自發(fā)觀察或被動(dòng)觀察（即意想不到的觀察）：為進(jìn)行有效的自發(fā)觀察，首先須注意某個(gè)事物或現(xiàn)象，將其與過(guò)去經(jīng)驗(yàn)中的有關(guān)知識(shí)相聯(lián)系，或在思考此現(xiàn)象中提出某種假說(shuō)。 （蘋(píng)果掉地）誘發(fā)觀察或主動(dòng)觀察（即有意識(shí)安排的觀察）：通常是根據(jù)假說(shuō)安排的觀察。研究過(guò)程中，研究者常注重主動(dòng)觀察的現(xiàn)象，而忽視被動(dòng)觀察的現(xiàn)象。最好的辦法是在觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中忘記自己的假說(shuō)和預(yù)期結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)觀察的原則客觀性與真實(shí)性 ：客觀地觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)觀察的傾向性和忽視意料之外的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。（假說(shuō)傾向性）實(shí)時(shí)性：實(shí)

26、驗(yàn)結(jié)果的觀察和收集與時(shí)間的選擇有關(guān)，某些實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象瞬間出現(xiàn)或持續(xù)時(shí)間很短，若錯(cuò)過(guò)最佳時(shí)間即難以被觀察到 。（信號(hào)分子磷酸化等）完整性：實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否完整，可直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論。（雙峰曲線）科學(xué)觀察“在研究工作中養(yǎng)成良好的觀察習(xí)慣比擁有大量學(xué)術(shù)知識(shí)更為重要” “研究人員須運(yùn)用其絕大部分知識(shí)和相當(dāng)部分的才華，方能正確篩選出值得觀察的對(duì)象。這是一個(gè)極為重要的選擇，往往決定幾個(gè)月工作的成敗。” -格雷格 有效的觀察指注意到某個(gè)事物，并通過(guò)將其與某個(gè)已知的事物相聯(lián)系，賦予其意義。因此，觀察既包括知覺(jué)因素，也包含思維因素。 培養(yǎng)科學(xué)觀察習(xí)慣，提高科學(xué)觀察能力 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮驮O(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，除觀察某些主要變化及

27、預(yù)期目標(biāo)外，也有必要觀察操作中的某些細(xì)微變化（Western)以及儀器設(shè)備的狀況等。認(rèn)真、細(xì)致、有始有終的觀察習(xí)慣：在實(shí)驗(yàn)觀察中，既須目的明確地觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，又須對(duì)可能發(fā)生的情況有充分估計(jì)和準(zhǔn)備。有效的科學(xué)觀察還須有良好的知識(shí)基礎(chǔ)，只有熟悉正常情況，才能注意到不尋常或未加釋明的現(xiàn)象。 觀察與思維緊密結(jié)合：觀察是一種理性知識(shí)參與下的認(rèn)知過(guò)程。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和判斷結(jié)果的判斷： 實(shí)事求是，必須排除任何操作因素引起的誤差； 判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性和可信性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 對(duì)所得到的結(jié)果進(jìn)行分析，要搞清該結(jié)果可能說(shuō)明的一切問(wèn)題，捕獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的全部信息； 分析結(jié)果與結(jié)果之間的相互關(guān)系和內(nèi)在的聯(lián)系；Qu

28、antitation analysis of TNF- induced apoptosis and necrosis by FCM實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和判斷結(jié)果的判斷： 實(shí)事求是，必須排除任何操作因素引起的誤差； 判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性和可信性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 對(duì)所得到的結(jié)果進(jìn)行分析，要搞清該結(jié)果可能說(shuō)明的一切問(wèn)題，捕獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的全部信息； 分析結(jié)果與結(jié)果之間的相互關(guān)系和內(nèi)在的聯(lián)系；兩型TNF體外殺瘤率兩型TNF體內(nèi)抑瘤率結(jié)果判斷中常見(jiàn)的邏輯錯(cuò)誤 不能讀懂結(jié)果的全部信息；不能邏輯分析不同結(jié)果之間的關(guān)系；看表面現(xiàn)象，缺乏本質(zhì)認(rèn)識(shí):TNFR1表達(dá)以先后而判斷因果：慢支治療與氣候以臆想代推理：利血平與新

29、藥視“同時(shí)”為“相關(guān)”：腦豬囊蟲(chóng)病與乙型腦炎“先入為主”、“喧賓奪主”：銀環(huán)蛇咬傷中毒致呼吸麻痹和休克；以偏概全、輕率概括：服用烏洛托品疣贅消失，引申出“烏洛托品可治療人類癌腫”的結(jié)論。 預(yù)先激活TM-TNF-反向信號(hào)對(duì) NK92細(xì)胞殺傷的影響讀出結(jié)果的全部信息TNFR封閉肽對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎腹腔巨噬細(xì)胞IL-1b mRNA的影響封閉肽 正常 關(guān)節(jié)炎野生型和C-28F突變型TM-TNF-a反向信號(hào)對(duì)I-kB降解的影響 I-kB1 2 3 4 5 61：對(duì)照；2：sTNFR1；3：轉(zhuǎn)染空載sTNFR1；4：轉(zhuǎn)染C-28F突變型TM-TNF-a+sTNFR1；5：轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF-a+sTNFR

30、1；6：轉(zhuǎn)染缺失胞漿段TM-TNF-a+sTNFR1。該結(jié)果提示什么？1 對(duì)照；2 COS-7；3 轉(zhuǎn)染空載；4 轉(zhuǎn)染C-28F 突變TM-TNF- ；5 轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF- Realtime PCRC-28F TM-TNF-突變體喪失誘導(dǎo)U937細(xì)胞轉(zhuǎn)錄iNOSmRNA的效應(yīng)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果肯定的條件是什么？Fig 4 Death mode switched from apoptosis to necrosis by memTNF-a mutant Y87F Cleaved caspase-3- cleaved PARP (89kDa)- -actin - 19kDa- 17kDaWild-

31、memTNF-control(MCF-7)Y87F memTNF-s-TNF- full length PARP (116kDa)C樣品排列不一致！NF-kB activation of Raji cell decreased after lipid rafts disruption After treatment of MCD, Raji cell were lysed and its lysis supernatant were used to NF-kB detection. NF-kB were detected by ELISA.如何下結(jié)論？mTNF expression vecto

32、r were transfected to Hela cell, and then use this cell as effect cell to kill human EVC-304 cell. Hela+TNFwt was transfected with wild type mTNF, Hela+TNF(-47) was transfected with mTNF mutated on -47 which deleted the palmitoylated site.Deletion of palmitoylated site has no effect on mTNF cytotoxi

33、ty 該結(jié)果能否說(shuō)明TNF不在脂筏里？為什么？前后結(jié)果內(nèi)在聯(lián)系提示什么？mTNF expression increased after MCD treatment. Raji Raji+MCD必須排除何種因素？如何排除？TNFR1TNFR2免疫共沉淀TNFR1TNFR2TNFR1TNFR2為何兩種受體共沉淀的信號(hào)分子一樣？TNFR2抗體檢測(cè)TNFR1抗體檢測(cè)TNFR抗體交叉實(shí)驗(yàn)科研項(xiàng)目的策劃與實(shí)施研究計(jì)劃的安排科研準(zhǔn)備工作和實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)的實(shí)施機(jī)遇靈感機(jī)遇在新發(fā)現(xiàn)中的作用巴斯德發(fā)現(xiàn)減毒病原體可以作為疫苗；細(xì)菌染色的最重要的方法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生革蘭發(fā)明的：他試圖對(duì)腎切片雙染，將細(xì)胞核染成紫色，微管

34、染成棕色，故用了龍膽紫，接著又用了碘溶液。他發(fā)現(xiàn)這樣處理過(guò)的組織，能用酒精使其迅速褪色，但某種細(xì)菌仍保持藍(lán)紫色，故將之用以辨別不同的細(xì)菌。離體青蛙心臟在生理鹽水中可保持跳動(dòng)半小時(shí)。一次，英國(guó)倫敦大學(xué)醫(yī)院的生理學(xué)家、內(nèi)科醫(yī)生林格發(fā)現(xiàn)他的離體青蛙心臟連續(xù) 跳動(dòng)了好幾小時(shí)。他非常驚訝，后來(lái)發(fā)現(xiàn)是他的實(shí)驗(yàn)助手在制作鹽水溶液時(shí)用的不是蒸餾水而是自來(lái)水。根據(jù)這個(gè)線索就不難斷定自來(lái)水中的哪些鹽分引起了生理活動(dòng)的增加。從而發(fā)現(xiàn)了格林氏溶液。Louis Pasteur1879使大家吃驚的是：幾乎所有這些家禽都經(jīng)受住了這次接種，而先前未接種的家禽，經(jīng)過(guò)了通常的潛伏期后則全部死掉了。這一點(diǎn)甚至連巴斯德自己或許也大吃

35、一驚，他沒(méi)有預(yù)料到這樣的成功。機(jī)遇只垂青那些懂得怎樣追求她的人。查理 . 尼科爾機(jī)遇在新發(fā)現(xiàn)中的作用巴斯德發(fā)現(xiàn)減毒病原體可以作為疫苗；細(xì)菌染色的最重要的方法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生革蘭發(fā)明的：他試圖對(duì)腎切片雙染，將細(xì)胞核染成紫色，微管染成棕色，故用了龍膽紫，接著又用了碘溶液。他發(fā)現(xiàn)這樣處理過(guò)的組織，能用酒精使其迅速褪色，但某種細(xì)菌仍保持藍(lán)紫色，故將之用以辨別不同的細(xì)菌。離體青蛙心臟在生理鹽水中可保持跳動(dòng)半小時(shí)。一次，英國(guó)倫敦大學(xué)醫(yī)院的生理學(xué)家、內(nèi)科醫(yī)生林格發(fā)現(xiàn)他的離體青蛙心臟連續(xù) 跳動(dòng)了好幾小時(shí)。他非常驚訝，后來(lái)發(fā)現(xiàn)是他的實(shí)驗(yàn)助手在制作鹽水溶液時(shí)用的不是蒸餾水而是自來(lái)水。根據(jù)這個(gè)線索就不難斷定自來(lái)水中的

36、哪些鹽分引起了生理活動(dòng)的增加。從而發(fā)明了格林氏溶液。 德拉姆 (H. E. Durham) 博士記述了通過(guò)抗血清發(fā)現(xiàn)細(xì)菌凝集的經(jīng)過(guò)如下： 那是1894年11月的一個(gè)值得紀(jì)念的早晨，我們都準(zhǔn)備好了要用法伊弗 (Pfeiffer) 提供給我們的培養(yǎng)液和血清去檢驗(yàn)他做的活體內(nèi)診斷反應(yīng)。格魯伯 (Gruber) 教授對(duì)我喊道：”德拉姆，這兒來(lái)，你瞧！”在用血清和弧菌的合劑進(jìn)行第一次注射前，他取了樣品放在顯微鏡下，看到了凝集。幾天以后，我們要用消毒過(guò)的小玻璃罐制作合劑時(shí)，正巧小玻璃罐都沒(méi)有消毒，所以我只好用消毒試管。放有培養(yǎng)液和血清混合物的試管插在那里片刻以后，我喊道：“教授先生，這兒來(lái)，瞧！”出現(xiàn)在他眼前的是沉積現(xiàn)象；就這樣，我們得到了兩種可用的方法：微觀的和宏觀的。 這一發(fā)現(xiàn)出人意外，事先沒(méi)有提出過(guò)假說(shuō)，這是在另一研究工作的過(guò)程中偶然發(fā)生的。由于偶然找不到消毒玻璃罐，發(fā)現(xiàn)了宏觀的凝集現(xiàn)象。(承蒙迪安 H. R. Dean 教授示我以德拉姆的手稿) 科研項(xiàng)目的策劃與實(shí)施研究