新版生物化學(xué)檢驗常用技術(shù)ppt

1、第三章(Zhang) 生物化學(xué)檢驗常用技術(shù)第一頁，共六十七頁。第一節(jié)(Jie) 光譜分析技術(shù)吸收光譜(Pu)分析技術(shù)發(fā)射光譜分析技術(shù)散射光譜分析技術(shù)第二頁，共六十七頁。一、吸收(Shou)光譜分析法第三頁，共六十七頁。40.575光(Guang)源單色(Se)器吸收池檢測器顯示器鎢燈、鹵鎢燈 3501000氫燈、氘燈 180360濾光片棱鏡光柵玻璃比色皿石英比色皿第四頁，共六十七頁。5(一)、分(Fen)光光度技術(shù)的基本原理1、吸光度(Du)與透光度(Du) A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I 當(dāng)光線通過均勻、透明的溶液時可出現(xiàn)三種情況：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有

2、一部分光透過溶液。設(shè)入射光強度為I0，透射光強度為I，I和I0之比稱為透光度，即：T = I/I0 T100%為T%稱為百分透光度。透光度的負(fù)對數(shù)稱為吸光度即：入射光 I0透射光 I第五頁，共六十七頁。62、Lambert-Beer定(Ding)律Lambert-Beer定律是討論溶液吸光度同溶液濃度和溶液層(Ceng)厚度之間關(guān)系的基本定律，該定律是分光分析的理論基礎(chǔ)。 A = KLCA 為吸光度；K 為比例常數(shù)，稱為吸光系數(shù)；L 為溶液層厚度，稱為光徑；C 為溶液濃度 Lambert-Beer定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體當(dāng)一束平行單色光通過均勻的非散射樣品時，吸光度與

3、溶液層厚度和溶液濃度成正比。L第六頁，共六十七頁。第七頁，共六十七頁。Lambert-Beer定律適用于:可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射(She)的液體以及分散均勻的固態(tài)或氣態(tài)樣品.單色光 均勻介質(zhì)吸收物質(zhì)無相互作(Zuo)用3、Lambert-Beer定律的應(yīng)用條件4、Lambert-Beer定律的偏離現(xiàn)象溶液：稀溶液、化學(xué)變化光學(xué); 非單色光、散射和折射儀器; 光源、實驗條件第八頁，共六十七頁。 在分光光度法中，為消除顯色劑及樣品中各種共存有色物質(zhì)產(chǎn)生的干擾、抵消比色皿和試劑對入射光的影(Ying)響而用來調(diào)節(jié)儀器百分透光率為100%的溶液。5、空(Kong)白溶液的選擇 蒸餾水 試劑

4、樣品不含待測元素 不顯色1、溶劑空白：不加樣品和任何試劑，用純?nèi)軇ㄈ缯麴s水或其他有機(jī)溶劑）作參比溶液。 選擇原則：當(dāng)顯色劑及其它試劑均無色，被測試樣中又無其他有色離子時，選用溶劑參比。2、試劑空白：用不加樣品，而顯色劑和其他試劑都相同的溶液作參比溶液。 選擇原則：當(dāng)顯色劑本身有顏色或其它試劑有顏色，被測試樣中又無其他有色離子時，選用試劑參比。3、樣品空白：用不加顯色劑的樣品溶液作參比溶液。 選擇原則：當(dāng)試樣溶液有顏色，而試劑、顯色劑均無顏色時，選用樣品空白。4、平行操作空白：按樣品分析完全相同的操作步驟，用不含待測元素的樣品進(jìn)行平行操作， 以消除操作過程中引入干擾雜質(zhì)所帶來的誤差。 選擇原則

5、：當(dāng)操作過程中由于試劑、器皿、水和氣等因素引入了一定量的被測試樣組分的干擾離子5、不顯色空白：可將一份試樣加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?，將被測組分掩蔽起來，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑 和其它試劑均按照操作手續(xù)加入，以此作為參比溶液，這樣可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。 選擇原則：當(dāng)顯色劑和被測試樣均有顏色時，可選用此法。第九頁，共六十七頁。(二)、分光光度法在生化檢驗中的應(yīng)(Ying)用靈(Ling)敏度高、操作簡便、應(yīng)用廣泛1、對未知化合物進(jìn)行定性分析2、對待測物質(zhì)進(jìn)行定量測定定性依據(jù)：最大吸收波長max和摩爾吸光系數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)曲線法和比較法第十頁，共六十七頁。11(1).標(biāo)準(zhǔn)曲線(Xian)法 根

6、據(jù)Lambert-Beer定律，液體的濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比(Bi)關(guān)系。配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度應(yīng)包含高、中、低濃度范圍），按標(biāo)本處理方法作相同處理，在特定波長下測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)，將對應(yīng)各點連成一條通過原點的直線，這條直線稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測溶液測定吸光度后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出其相應(yīng)的濃度。方法：第十一頁，共六十七頁。5.標(biāo)準(zhǔn)溶液設(shè)置的濃度范圍足夠大。第十二頁，共六十七頁。132比(Bi)較法 CR=(AR Cs)/As 己知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本作同樣處理，使用相同的空白，同時測定(Ding)標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)本的吸光度，根據(jù)測定(Ding)的吸光度及標(biāo)

7、準(zhǔn)品濃度，可直接計算出標(biāo)本的濃度，計算公式為：第十三頁，共六十七頁。二、發(fā)射光譜分析(Xi)法 處于激發(fā)態(tài)(Tai)的待測元素，原子回到基態(tài)(Tai)時以輻射的形式釋放出能量，由此而產(chǎn)生的光譜稱為發(fā)射光譜，對元素進(jìn)行定性與定量分析的方法。發(fā)射光譜是指樣品本身產(chǎn)生的光譜被檢測器接收；吸收光譜是光源發(fā)射的光譜被樣品吸收了一部分，剩下的那部分光譜被檢測器接收?；鹧婀舛确晒夤舛确ǖ谑捻?，共六十七頁?；鹧婀舛确ㄊ且曰鹧鏋榧ぐl(fā)光源，用光電檢測系統(tǒng)測量被測元素所發(fā)射的輻射強度來進(jìn)行定量分析的方(Fang)法。它是一種簡化的發(fā)射光譜分析法（一）、火焰光度(Du)法FP640火焰光度計火焰光度法分析示意圖第

8、十五頁，共六十七頁?；鹧?Yan)光度法的特點應(yīng)(Ying)用范圍窄靈敏快速準(zhǔn)確設(shè)備簡單試樣溶液于數(shù)分鐘內(nèi)可完成測定火焰光源穩(wěn)定性高，干擾少，誤差為25，可用于微量分析和常量分析分析堿金屬與堿土金屬，絕對靈敏度可達(dá)0110106 g被測試樣易被火焰激發(fā)，產(chǎn)生的譜線較簡單，且均在可見光區(qū)，故使譜線分離和測量的設(shè)備簡單主要用于堿金屬和部分堿土金屬的測定第十六頁，共六十七頁。1、激發(fā)(Fa)條件影響火(Huo)焰光度分析的因素2、試樣的種類和組成3、試液中共存離子對測定有影響4、儀器的質(zhì)量火焰溫度要適當(dāng)，溫度過低靈敏度下降，溫度太高則堿金屬電離嚴(yán)重，影響測量的線性關(guān)系。第十七頁，共六十七頁。（二）、

9、熒(Ying)光分光光度法化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量（如光能、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時，過剩的能量可(Ke)以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）。利用物質(zhì)吸收較短波長的光能后發(fā)射較長波長特征光譜的性質(zhì)，對物質(zhì)定性或定量分析的方法。熒光的定義：某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長較長的光。熒光產(chǎn)生的原理：熒光分光光度法分析測定蛋白質(zhì)、核酸、維生素等;對某些激素及其代謝產(chǎn)物的測定;當(dāng)化合物含量太少,一般分析方法靈敏度不夠時,使用熒光分析技術(shù)就能解決測定問題。第十八頁，共六十七頁。三、散射光譜分析(Xi)法透射比濁與散(San)射比濁是免疫比濁的常見的兩種方

10、法，其反應(yīng)的原理一樣，只是檢測的光信號與儀器的檢測器有區(qū)別。1、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展。不足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，檢測的周期較長。2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速。其缺點是需特定的分析儀器，試劑價格高。光的散射用單色光照射透明溶液時，大部分按原來方向透射，而一小部分則按不同的角度散射開來。散射光譜分析法利用懸浮顆粒混濁液的散射光強度或?qū)θ肷涔鉁p弱的原理進(jìn)行定量分析的方法。第十九頁，共六十七頁。第二節(jié) 電化學(xué)分(Fen)析技術(shù)第二十頁，共六十七頁。一(Yi)、電位分析法 ISE利用電極電

11、位與濃度的關(guān)系測(Ce)定物質(zhì)含量的電化學(xué)分析方法。電位分析法一類用特殊敏感膜制成，對溶液中某種特定離子有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器離子選擇電極 ISE電解質(zhì)溶液中參與電化學(xué)反應(yīng)的離子的有效濃度第二十一頁，共六十七頁。第二十二頁，共六十七頁。 離子選擇性電極的類型和品種很多，外形也差異很大；但基本結(jié)(Jie)構(gòu)都包括：對特定離子有選擇性響應(yīng)的薄膜(敏感膜或傳感膜)、內(nèi)參比溶液與內(nèi)參比電極。 敏感膜將內(nèi)側(cè)參比溶液與外側(cè)的待測離子溶液分開，是電極的關(guān)鍵部位。 ISE基(Ji)本結(jié)構(gòu)內(nèi)參比電極電極殼體內(nèi)參比溶液敏感膜離子選擇性電極結(jié)構(gòu)示意圖第二十三頁，共六十七頁。電(Dian)極電(Dian)位第二十

12、四頁，共六十七頁。電極電位(Wei)測量在電位分析中，構(gòu)成電池(Chi)的兩個電極，其中一個，其電位值隨待測離子濃(活)度的變化而變化，能指示待測離子的濃(活)度，稱為指示電極，或離子選擇性電極。指示電極而另一個電極，其電位不受試液組成變化的影響，具有較恒定的數(shù)值，只是作為測量電位的標(biāo)準(zhǔn)，稱為參比電極(參考電極)。 參比電極離子選擇性電極：電位法測定溶液中某種定離子活度的指示電極；能在多種離子存在的混合液中，選擇性地響應(yīng)該特定離子，指示出這種離子活度變化情況，測定離子的活度或濃度。第二十五頁，共六十七頁。 選擇性好 在多數(shù)情況下，共存的離子干擾小，對組成復(fù)雜的試樣往往不需要分離處理就可直接測定

13、。 靈敏度高 電位法(Fa)的檢出限為10-510-8 mol/L，適于微量組分的測定，電位滴定法適于常量分析。 快速 儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析快速、測定范圍寬、不破壞試液，易于實現(xiàn)分析自動化。 缺點 需要有專用的離子選擇性電極。電位分析法(Fa)的特點：第二十六頁，共六十七頁。3、離子選擇性電極的分類和主要類型根據(jù)國際純粹及應(yīng)用(Yong)化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）的建議，離子選擇性電極一般采用如下分類： 根據(jù)國際純粹及應(yīng)用化學(xué)(Xue)聯(lián)合會(IUPAC)的建議，離子選擇性電極一般采用如下分類： 常用的離子選擇電極第二十七頁，共六十七頁。玻璃(Li)膜電極第二十八頁，共六十七頁。氣敏(M

14、in)電極如，二氧化碳?xì)饷綦姌O：微孔氣體滲透膜(Mo)憎水但能透氣(由醋酸纖維、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯等材料制成)。測定時，CO2氣體通過微孔滲透膜與中介溶液接觸(中介液是0.001mol/L的NaHCO3)；由于CO2與H2O結(jié)合生成碳酸，從而影響到碳酸氫鈉的電離平衡。氣敏電極通過界面發(fā)生化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行工作的，離子電極用來指示中介液中某一離子活度的變化。溶解在水溶液中的氣體，只要能生成可用離子選擇性電極檢出的離子，均可用氣敏電極測定。用pH玻璃電極間接測定CO2的含量 氣敏電極是一種氣體傳感器，測定溶液中的氣體含量。原理：利用待測氣體對某一化學(xué)平衡的影響，使平衡中某特定離子的活度發(fā)生變化，來測

15、定試液中被測氣體的分壓(含量)。 在氣敏電極的中介溶液中放入玻璃電極。測量時，控制試液的酸堿度，使CO2通過氣透膜擴(kuò)散加入氣敏電極；引起中介溶液pH的改變。測定中介溶液的pH值，即可計算出試液中CO2的濃度。第二十九頁，共六十七頁。第三十頁，共六十七頁。 CO2 + H2O = HCO3- + H+ NH3 + H2O = NH4+ + OH- SO2 + H2O = HSO3- + H+ 2NO2 + H2O = NO3- + NO2- + H+ H2S + H2O = HS- + H3O+ HCN + H2O = H3O+ + CN- HF + H2O = H3O+ + F- 凡是溶于水釋

16、放H+的反應(yīng)，都可以用pH玻璃電極檢出；而后三種分別可以用S2-、CN-、F-等離子選擇性(Xing)電極來檢測?？捎?Yong)電極測定的氣體第三十一頁，共六十七頁。 酶的催化(Hua)反應(yīng)專一強；酶電極有極高的選擇性。作為一種生物傳感器，酶電極特別適用于生物醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域。酶電(Dian)極 選擇適合的指示電極 制成具有催化活性的水不溶性酶膜 把酶膜固定在電極的表面(酶的固定化) 酶電極的制作過程將生物酶涂布在離子選擇性電極或其它傳感器的敏感膜上，通過酶催化作用，使待測物質(zhì)產(chǎn)生能在該電極上響應(yīng)的離子或化合物，間接測定該物質(zhì)。脲酶催化分解尿素產(chǎn)生NH3、CO2，溶于水可得到不同產(chǎn)物NH

17、3、CO2、NH4+、HCO3-等，可用相應(yīng)的離子選擇性電極來檢測它們，間接得到尿素的含量。常用的固定化技術(shù)有：吸附、試劑交聯(lián)、共價鍵合、 包埋法(酶與載體聚丙酰胺混合后直接包在電極敏感部分形成酶凝膠層)。第三十二頁，共六十七頁。幾種酶電極的品種與性(Xing)能測定物質(zhì)酶檢測物測定范圍(mol/L)葡萄糖葡萄糖氧化酶O210-42*10-2尿素(脲)脲酶NH310-510-2膽固醇膽固醇氧化酶H2O210-510-2L谷氨酸谷氨酸脫氫酶NH4+10-410-1L賴氨酸賴氨酸脫羧酶CO210-410-1第三十三頁，共六十七頁。 標(biāo)準(zhǔn)(Zhun)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)比較法 標(biāo)準(zhǔn)加入法 離子選擇性電極的分

18、(Fen)析方法1、直接法：2、間接法：樣品不經(jīng)稀釋，直接由電極測量離子活度。樣品經(jīng)緩沖溶液稀釋后由電極測量離子活度。用測定離子的純物質(zhì)配制一系列已知活度或濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用離子計測定，繪制電極電位與活度對數(shù)的關(guān)系曲線；然后在相同條件下測定樣品，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得濃度。將已知的小體積標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入已知較大體積的待測液中，根據(jù)加入前后電位值變化，求得待測液中被測離子得濃度。第三十四頁，共六十七頁。二、電導(dǎo)分(Fen)析法電(Dian)導(dǎo)分析法在外電場作用下，以電解質(zhì)溶液中正負(fù)離子遷移為基礎(chǔ)的電化學(xué)分析法。什麼是電導(dǎo)？衡量電解液導(dǎo)電能力的量度值這里所說的電導(dǎo)是指電解質(zhì)溶液中正、負(fù)離子在外電場作用下的遷

19、移而產(chǎn)生的電流傳導(dǎo)導(dǎo)電能力與溶液中正負(fù)離子的數(shù)目、離子所帶的電荷量、離子在溶液中遷移的速率等因素有關(guān)利用電解質(zhì)溶液的電導(dǎo)值來確定物質(zhì)含量的分析方法利用溶液的電導(dǎo)與溶液中離子數(shù)目的相關(guān)性建立分析方法第三十五頁，共六十七頁。第三節(jié) 干化(Hua)學(xué)分析技術(shù) 將液體檢測樣品直接加到含有試劑的固相載體上發(fā)生(Sheng)反應(yīng)，依照反應(yīng)結(jié)果定量測定樣品中特定成分的濃度或活動的一項技術(shù)。 干化學(xué)分析技術(shù)是以酶法為基礎(chǔ)的一類分析方法，又有干試劑化學(xué)或固相化學(xué)之稱。干化學(xué)分析第三十六頁，共六十七頁。一、干(Gan)化學(xué)分析技術(shù)的基本原理根據(jù)多層膜(Mo)測定方法不同，可將多層膜(Mo)分為3種類型：反射光度法

20、差示電位法熒光反射光度法熒光技術(shù)競爭免疫技術(shù)第三十七頁，共六十七頁。反射光度(Du)法第三十八頁，共六十七頁。 漫反射光是指從光源發(fā)出的光進(jìn)入樣品內(nèi)部，經(jīng) 過多次反射、折射、散射及吸收后返(Fan)回樣品表面的光 朗伯定律描(Miao)述入射光和吸收光之間的關(guān)系KubelkaMunk 理論描述一束單色光入射到一種既能吸收光，又能反射光的物體上的光學(xué)關(guān)系。第三十九頁，共六十七頁。差示(Shi)電位法第四十頁，共六十七頁。二、干化學(xué)分析技術(shù)在臨床(Chuang)檢驗中的應(yīng)用反射光度(Du)法系統(tǒng)膠片涂層技術(shù)袋式分析儀第四十一頁，共六十七頁。第四十二頁，共六十七頁。儀(Yi)器檢測: 三、干化學(xué)分析

21、技術(shù)的(De)影響因素 反射光度計 標(biāo)準(zhǔn)灰色試劑條 離子選擇電極干式化學(xué)分析儀 標(biāo)準(zhǔn)條校準(zhǔn)頻度: 質(zhì)控物: 干片試劑的儲存與使用: 溫度和濕度:第四十三頁，共六十七頁。第三節(jié) 電泳(Yong)分析技術(shù)正極負(fù)極帶負(fù)電粒子帶正電粒子帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著(Zhuo)與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象 電泳：電泳技術(shù):利用電泳現(xiàn)象將多組分樣品分離、分析的技術(shù)電泳儀:可以實現(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器第四十四頁，共六十七頁。一、電泳分析技術(shù)的基(Ji)本原理溶液中粒子(Zi)的帶電狀態(tài)兩性電離及兩性電解質(zhì):等電點時蛋白質(zhì)分子在電場中不會移動。 溶液的pH值離等電點越遠(yuǎn)，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也

22、越快。等電點pI :某一溶液中粒子所帶的正、負(fù)電荷相等，即凈電荷為零時溶液的pH值。第四十五頁，共六十七頁。電泳遷(Qian)移率影響電泳的(De)因素1、分子的形狀和性質(zhì)2、電場強度電場強度大，速度快，產(chǎn)熱多，變性；電場強度小，速度慢，產(chǎn)熱少，區(qū)帶模糊第四十六頁，共六十七頁。473、電(Dian)泳緩沖溶液維持電泳介(Jie)質(zhì)pH恒定,并起導(dǎo)電作用第四十七頁，共六十七頁。 溶液的酸堿度決定被分離物質(zhì)的解(Jie)離程度和帶電性質(zhì)及所帶凈電荷量。pH與pI差值越大，粒子帶電量越多。緩沖溶液不能過酸過堿，以免(Mian)使蛋白質(zhì)發(fā)生變性，pH一般4.5-9.0為宜。第四十八頁，共六十七頁。緩沖

23、溶液的離子強(Qiang)度影響緩沖容量、電泳速度和產(chǎn)熱效應(yīng)兼顧上述效應(yīng)將緩沖溶液離子強度設(shè)置(Zhi)在一個合適的范圍，一般設(shè)在0.050.1mol/L為宜第四十九頁，共六十七頁。4、支持介(Jie)質(zhì)紙的吸附作用最大，醋酸纖(Xian)維素膜的吸附作用較小。吸附作用和電滲作用5、蒸發(fā)第五十頁，共六十七頁。二(Er)、常用電泳技術(shù)及應(yīng)用按電(Dian)泳方式分類1. 移動界面電泳2. 區(qū)帶電泳3. 穩(wěn)態(tài)電泳帶電分子的移動速率通過觀察界面的移動來測定帶電荷的分子在具有滲透能力的介質(zhì)上的遷移分子顆粒的電泳遷移在一定時間后達(dá)到穩(wěn)態(tài)第五十一頁，共六十七頁。按電(Dian)泳支持物分類第五十二頁，共六

24、十七頁。第五十三頁，共六十七頁。(五) 等電聚焦(Jiao)電泳 (IEF)第五十四頁，共六十七頁。第五節(jié) 基因擴(kuò)增技(Ji)術(shù) 在體(Ti)外將微量的目的基因片段大量擴(kuò)增，以得到足量的DNA供研究分析和檢測鑒定用的技術(shù)聚 合 酶 鏈 反 應(yīng)Polymerase Chain Reaction（PCR）第五十五頁，共六十七頁。一、PCR反(Fan)應(yīng)基本原理第五十六頁，共六十七頁。含Mg2+的(De)緩沖液dNTPs耐熱DNA聚合(He)酶Tag DNA聚合酶特異性引物一對分別與待擴(kuò)增DNA序列兩端互補的寡核苷酸片段。模板DNAPCR反應(yīng)體系第五十七頁，共六十七頁。PCR基本反應(yīng)(Ying)步驟

25、變(Bian)性95C延伸72C退火Tm-5C循環(huán)2530次使模板DNA完全變性成單鏈。同時引物自身和引物之間存在的局部雙鏈得以消除使引物和模板DNA退火結(jié)合此溫度下DNA聚合酶以dNTP 為底物催化DNA鏈的延長三個步驟為一個循環(huán)，每次循環(huán)產(chǎn)物作為下一輪模板進(jìn)入下一輪循環(huán)第五十八頁，共六十七頁。第一(Yi)輪循環(huán)5/3/3/5/5/5/5/5/引(Yin)物A引物B變性（95）6075859590807065555045403530退火（60）延伸（72）DNA-PolDNA-Pol溫度第五十九頁，共六十七頁。第二輪(Lun)循環(huán)5/5/5/3/3/5/5/5/引(Yin)物A引物B6075

26、859590807065555045403530變性（95）退火（60）延伸（72）5/5/5/5/溫度DNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-Pol第六十頁，共六十七頁。第三(San)次循環(huán)5/5/5/5/5/5/5/60758595908070655550454035305/變(Bian)性（95）退火（60）延伸（72）溫度DNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-Pol第六十一頁，共六十七頁。基因組DNADNA樣品第一次循(Xun)環(huán)第二(Er)次循環(huán)第三次循環(huán)第四次循環(huán)待擴(kuò)增序列引物A引物B3/5/3/5/5/3/5/3/第六十二頁，共六十七頁。一種新的核酸微量分析技術(shù)。尤其在定(Ding)量RT-PCR中具有重要價值。實現(xiàn)了PCR技術(shù)從定性到定量的飛躍。實時