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文檔簡介

1、第1頁,共32頁。API系統-構成:試條由特別選擇的生化反應小管API試條有多種類 各有相應的數據庫 所有生化結果以同時間一并閱讀第2頁,共32頁。API系統 試條由10, 20, 50.測試組成不等 結果:鑒定百分率 基本單位:條目(Taxa)- 種(Pseudomonas Aeruginosa)- 生物型號(E. Coli 1)- 屬(Salmonella Spp.)- 一群菌種(Aeromonas hydrophilia/cavicie) 所引用的分類學跟國際認可的一樣- International Journal of Systematic Bacteriology 資料庫整個系統的心

2、臟第3頁,共32頁。優(yōu)點:-標準化,簡易化-在制造過程中,進行質控-FDA標準-用家可用ATCC菌種進行質控-系統化-操作簡易-快速報告-20年經驗,擁有菌種資料25000,鑒定系統的發(fā)源生化測試750-1500文獻第4頁,共32頁。選條的標準第5頁,共32頁。革蘭氏陰性桿菌分類 革蘭氏陰性桿菌氧化酶 +非腸道菌鑒定API 20NE腸道桿菌鑒定API 20E氧化酶 -第6頁,共32頁。革蘭氏陽性桿菌分類革蘭氏陽性桿菌觸酶 -觸酶 +短小脫色含有異染顆粒slight discoloration(granulations)短球桿菌延長狀桿菌細小不透光菌落20-25C 有動力37C 無動力李斯特菌鑒

3、定API Listeria乳酸菌鑒定API 50CHL棒狀桿菌鑒定API Coryne大體積產芽孢桿菌芽孢菌鑒定API 50CHB第7頁,共32頁。定向試驗第8頁,共32頁。革蘭氏陽性球菌分類革蘭氏陽性球菌凝固酶葡萄球菌鑒定API STAPH觸酶 -觸酶 +金黃色萄葡球菌溶血鏈球菌鑒定API STREP+-第9頁,共32頁。-在細菌學里最普遍的染色方法革蘭氏染色步驟G()G()- 染色前,所有細胞是透明的- 結晶紫著色後用碘增加染料與菌體結合- 乙醇從G() 菌體洗脫結晶紫- 用番紅液復染,革蘭氏陰性菌呈粉紅色,革蘭氏陽性菌呈蘭紫色第10頁,共32頁。接解酶試劑- 原 理 - 傳統方法H2O2

4、2H2O + O2接 解 酶玻片法試管法第11頁,共32頁。氧化酶試驗- 原 理 :TMPD氧化 TMPD氧 化 酶(TMPD = 2甲基一對一苯撐二胺)貨號: 55922紙片:浸泡飽和TMPD儲存: 2-8C于暗處有效期: 1年組成: 2x30片小瓶裝 紙片貨號: 70460儲存: 2-30C于暗處組成: 1個小瓶 液體試劑(深紫色)(透明)第12頁,共32頁。氧化酶紙片法第13頁,共32頁。液體 氧化酶試劑試劑方法:- 用2個試管載1-2ml無菌水- 第一管為陰性對照: 加一滴OX試劑- 第二管為測試管: 加可疑菌落然后再加二滴OX試劑- 比較二支管的顏色: 陰性對照:透明, 淺紫色 結果

5、:OX(-) : 透明,淺紫色OX(+): 紫色, 深紫色第14頁,共32頁。生化鑒定容易使用第15頁,共32頁。API結果原理:-生化結果組合跟資料庫內的典型條目(Taxa)作出比較-經計算後,鑒定百比率(%Id)機會率,指示出不同菌類的比較T值(T index)=指示出在同一個菌類的相似程度第16頁,共32頁。生化鑒定可靠及具創(chuàng)意的選擇最典型生化普菌種 XT 值資料庫生化結果 (菌種 X) (菌種X)第17頁,共32頁。API結果跟據T值及%Id的組合,作出評語:(i)Excellent Identification %Id 99.9及T0.75(ii)Very good Identifi

6、cation %Id 99.9及T0.75(iii)Good Identification %Id 90.9及T0.25(iv)Acceptable Identification %Id 80.0及T0(v)Doubtful profile其中一個生化反應出現嚴重違反典型生化結果第18頁,共32頁。API 20E / Rapid 20E- 腸道桿菌科細菌在環(huán)境中及動物產品中非常普遍,其中部份 (沙門氏、耶爾森氏)是致病菌-API 20E是常規(guī)鑒定中的標準-其他新鑒定系統比較的金標準-方便使用,4或24小時出報告第19頁,共32頁。API 20E試劑條接種要點先做氧化酶試驗,氧化酶為陰性時接種A

7、PI 20E,氧化酶為陽性時接種API 20NE試劑條塑料培養(yǎng)盒中加水5 ml,放入試劑條,記錄標本資料。取1個1mm 大小,1824hr菌齡的菌落,分散于5ml懸浮液(20150)中,使達0.5 Mac Farland 濁度。小心沿內壁加菌懸液到微量生化杯中。其中:有U形框標記的項目(CIT、VP、GEL),將菌液加滿;有下劃線標記的(ADH、LDH、ODC、H2S、URE、),加好菌懸液后,用無菌液體石蠟封口。剩余的菌液可用于涂玻片、染色,接種于非選擇性平板做次代培養(yǎng)。蓋好孵育盒蓋,放置幾分鐘,觀察每個微量杯都應呈陰性反應的顏色。孵育盒放入37攝氏度溫箱培養(yǎng)24小時。第20頁,共32頁。A

8、PI 20E反應結果閱讀要領()一、若GLU(葡萄糖)為陽性,則記錄GLU的結果,在TDA、IND、VP孔中加入相應的附加試劑,1分鐘內讀取TDA、IND的結果,510分鐘內讀取VP的結果。同時讀并記錄取其它反應的結果,用生化鑒定結果組成一個7位數編碼。二、若GLU(葡萄糖)為陰性,但有多于2個的反應呈陽性,則按上述方法讀取并記錄結果。三、若GLU(葡萄糖)為陰性(非發(fā)酵菌),且其它呈陽性的反應不多于2個,則不要加試劑,放回溫箱中再培養(yǎng) 24 hr后按第一條的方法讀取結果。同時用次代培養(yǎng)物接種2個API OF培養(yǎng)基證實葡萄糖代謝類型;接種1個API M培養(yǎng)基觀察動力;劃線接種MacConkey

9、平板。培養(yǎng)24hr后將其結果記錄到API 20E報告單,與生化鑒定結果一起得到一個9位數編碼。第21頁,共32頁。API 20E反應結果閱讀要領()ONPG:淡黃色黃色為陽性,無色為陰性。ADH、LDC、ODC、URE以苯酚紅為指示劑,橙色紅色為陽性,黃色為陰性。CIT:管口處出現蘭色為陽性,黃色綠色為陰性。H2S:黑色為陽性,無色淺灰色為陰性。 TDA、IND、VP加試劑后出現紅色為陽性,不出現紅色為陰性。 GEL:黑色素擴散為陽性,不擴散為陰性。GLUARA為糖類的酸化反應,指示劑溴百里香酚蘭顯黃色為陽性,藍、綠色為陰性。第22頁,共32頁。GLU為陰性時,記錄其結果,并在GLU孔中按先后

10、順序分別加一滴NIT 1和NIT 2試劑,出現紅色時 NO2為陽性,N2為陰性;不出現紅色時,加少許Zn粉,此時出現紅色,則NO2為陰性,N2為陽性。有動力,MOB為陽性,無動力則為陰性。 麥康凱平板上生長,McC為陽性,不生長為陰性OF培養(yǎng)管下部變色為發(fā)酵型,OF-F為陽性,下部不變色OF-F為陰性;OF培養(yǎng)管上部變色為發(fā)酵型,OF-O為陽性,上部不變色OF-O為陰性API 20E反應結果閱讀要領()第23頁,共32頁。API 20NE-非發(fā)酵G(-)桿菌存在于空氣、水及表面-部份細菌(如綠膿假單胞菌)為致病菌-試條主要由傳統生化反應及同化反應小管 所組成-64條目(Taxa)-非發(fā)酵G(-

11、)桿菌的標準鑒定方法第24頁,共32頁。API 20NE試劑條接種要點(1)先做氧化酶試驗,陽性者接種API 20NE。塑料培養(yǎng)盒中加水5 ml,放入試劑條,記錄標本資料。取1824hr菌齡的菌落,分散于ml鹽水(20040)中,使達0.5 MacFarland 濁度(A液)。取A液200 ul(滴),加入AUX培養(yǎng)液中,小心混勻避免產生氣泡,制成同化試驗接種液(B液)。用A液按API 20E相同的方法接種生化試驗杯孔(NO3PNPG其中,GLU,ADH,URE用液體石蠟封口)第25頁,共32頁。用B液接種同化試驗杯孔(下面有三條紅線者)。使液面與杯口平齊B液黏度很大,特別注意不要使菌懸液堵住

12、杯口,形成大的氣泡,影響反應結果。嚴格無菌操作,避免空氣中的雜菌污染同化試驗剩余的A液可用于涂玻片、染色,接種于非選擇性平板做次代培養(yǎng)。蓋好孵育盒蓋,放置幾分鐘,觀察每個微量杯都應呈陰性反應的顏色。孵育盒放入30攝氏度溫箱培養(yǎng)24小時。API 20NE試劑條接種要點(2)第26頁,共32頁。API 20NE 技術要點同化試驗項目接種要求- 接種液面與杯口平齊,太多或不足會造成錯誤結果。第27頁,共32頁。API 20NE反應結果閱讀要領()一生化試驗:不要打開塑料培養(yǎng)盒蓋,先讀取從GLU到PNPG的生化試驗結果并記錄之在NO3杯孔中按先后次序分別加入一滴NIT1和NIT2試劑,出現紅色NO3為

13、陽性不出現紅色時,加少許Zn粉,此時出現紅色,則NO3為陰性,分鐘內不出現紅色,則NO3陽性TPR杯孔中加一滴James試劑,立即出現紅色為陽性不出現紅色為陰性二同化試驗:從杯口上方往下看,紅線模糊或菌懸液變渾濁,表明有菌生長,為陽性否則,為陰性偶有弱生長者可記錄為或第28頁,共32頁。三在報告單上做出一個位數編碼,查編碼手冊或API LAB軟件四如果,查不到編碼,或給出提示“IDENTIFICATION NOT VALID BEFORE 48-HR INCUBATION”,立即用液體石蠟將NO3和TRP封口繼續(xù)培養(yǎng)小時,再讀結果而NO3 和TRP要記錄培養(yǎng)24小時的結果API 20NE反應結果閱讀要領()第29頁,共32頁。API STAPH-凝固酶陰性葡萄球菌于環(huán)境污染中常見-其中以金黃葡萄球菌為代表-以Kloos and Schleifer Classification為基礎-試條由傳統方法及發(fā)酵反應小管組成-22個條目(葡萄球菌及微球菌)第30頁,共32頁。API STAPH 技術要點(i)附加試驗第21 - 溶葡萄球菌素 (lysostaphi

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