小鼠卵巢去勢致骨質(zhì)疏松癥模型

1、(&Cloud-CloneCorp.小鼠卵巢去勢致骨質(zhì)疏松癥模型卵巢是卵子發(fā)育和激素產(chǎn)生的器官，其受到下丘腦和垂體促性腺激素的雙重調(diào)控(卵泡雌激素FSH)和黃體生成素(LH)。LH是在下丘腦垂體促性腺激素釋放激素(GnRH)的作用下以脈沖的方式分泌，在正反饋?zhàn)饔孟抡T發(fā)排卵所需的LH峰。在卵巢，F(xiàn)SH受抑制素的雙重負(fù)反饋調(diào)節(jié)，并受到性激素尤其是雌激素、孕激素的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。雌激素在調(diào)節(jié)骨代謝及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性方面有著重要的作用，雌激素水平低下被認(rèn)為是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的主要原因。雌性大鼠雙側(cè)卵巢摘除是一個(gè)較成熟的動物模型，可以成功建立模擬雌激素缺乏而導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松動物模型。這也為研究雌激素缺乏對人體

2、其他系統(tǒng)的損害奠定了基礎(chǔ)。雌激素是體內(nèi)重要的激素，它對骨代謝有著重要的作用。在對小鼠進(jìn)行去勢手術(shù)后，機(jī)體處于一種低雌激素的微環(huán)境，骨轉(zhuǎn)換過程加速，骨代謝加強(qiáng)，成骨細(xì)胞量降低，破骨細(xì)胞活躍，從而導(dǎo)致機(jī)體骨量丟失以及正常生理結(jié)構(gòu)的破換，容易導(dǎo)致骨質(zhì)疏。研究顯示雌激素缺乏后，小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞成骨能力顯著降低，這與骨質(zhì)疏松發(fā)生有關(guān)；而且雌激素缺乏后，會加重牙周炎的程度，這與雌激素缺乏后降低了牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖與成骨能力有關(guān)。許多已知的骨代謝相關(guān)因子都受到雌激素的調(diào)控。在成骨細(xì)胞，雌激素能夠促進(jìn)代謝生長因子IGF-I的合成與分泌，同時(shí)抑制骨吸收相關(guān)因子，如白介素T(IL-1)及白介素-6(IL-6

3、)、前列腺素、腫瘤壞死因子(TNF)等。雌激素也可以促進(jìn)骨保護(hù)素(OPG)的合成與分泌，而這種激素在抑制破骨細(xì)胞的功能方面有著重要的作用。多方證據(jù)表明，在卵巢切除術(shù)后或絕經(jīng)后，由于骨小梁的快速缺失而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。1實(shí)驗(yàn)動物SPF級Balb/c小鼠，健康，雌性未孕，46W，體重為18g20g.2實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動物。3實(shí)驗(yàn)周期12W4建模方法小鼠3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉后仰臥，腹部脫毛。在無菌條件下于腹股溝水平沿腹中線剪開皮膚及肌層，暴露腹腔。分離子宮并摘除卵巢，清理傷口后分兩層縫合皮膚及基層，待小鼠清醒后，將其放回潔凈

4、籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。(&Cloud-CloneCorp.術(shù)后3天，每只小鼠每天注射4萬單位青霉素，防止感染。對照組僅摘除卵巢周圍約1g脂肪，而保留卵巢，其余處理相同。12W取材，X線測量各組小鼠骨密度(bonemineraldensity，BMD),再腹腔注射麻醉，摘眼球取血，室溫靜止2h,4C離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80C冰箱保存?zhèn)溆谩Ｈ⌒∈竺劰菢?biāo)本用于病理學(xué)檢測。5模型的評價(jià)1卵巢去勢后小鼠體重、雌二醇及骨密度變化去勢組大鼠體重增長迅速，活動能力下降，毛色缺乏光澤而略灰暗，而對照組小鼠體重增加緩慢,毛色光亮，活動正常。去勢組雌二醇水平及股骨BMD顯著下降。2.骨形態(tài)學(xué)染色取各組小鼠脛骨標(biāo)本，置入10%中性甲醛緩沖固定液中(pH=7.2-7.4,4C)固定24-48h，再經(jīng)10%EDTA-2Na緩沖液(pH=7.4，4C)脫鈣，隔5-7d更換脫鈣液；脫鈣完全后，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，縱向石蠟包埋，5um連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。對照脛骨骨小梁密集，相互交織成網(wǎng)狀；模型組骨小梁數(shù)目明顯減少，骨小梁變薄，呈斷裂狀。3細(xì)胞因子的檢