沙門(mén)氏菌幾種檢測(cè)方法簡(jiǎn)介與比較-食品安全課件

1、 國(guó)內(nèi)外沙門(mén)菌檢測(cè)方法介紹中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所郭云昌DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美國(guó)獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國(guó)授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。1884年任美國(guó)農(nóng)業(yè)部畜牧局 首任局長(zhǎng)。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門(mén)菌一詞，就是為紀(jì)念他而以 他的名字命名的。沙門(mén)菌（Salmonella）沙門(mén)菌（Salmonella） 沙門(mén)菌屬（Salmonella）是一大群寄生于人類(lèi)和動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱(chēng)為沙門(mén)桿菌。沙門(mén)菌（Salmonella） 目前至少有67種O抗原和2000個(gè)以上血清型，所致疾病稱(chēng)沙門(mén)

2、菌病。 腸熱癥：是傷寒病和副傷寒病的總稱(chēng)，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。 急性腸炎(食物中毒):是最常見(jiàn)的沙門(mén)桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。 敗血癥：常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。 大小0.61.023um，無(wú)芽胞，一般有鞭毛(雞沙門(mén)菌除外)，無(wú)莢膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為3537，最適pH值為6.87.8。沙門(mén)菌生物學(xué)性狀不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門(mén)菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能

3、還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。 沙門(mén)菌生物學(xué)性狀沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn)三糖鐵（TSI）尿素酶試驗(yàn)陰性（黃）陽(yáng)性（紅）沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)陰性（液面黃）陽(yáng)性（液面紅） VP試驗(yàn) 陽(yáng)性（紅色）陰性（不變）沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn)賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)對(duì)照 陽(yáng)性（紫） 陰性（黃）丙二酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性（蘭） 陰性（不變）ONPG試驗(yàn)陽(yáng)性（黃） 空白沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn)國(guó)內(nèi)外沙門(mén)菌檢測(cè)方法（傳統(tǒng)方法） 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)FDA （Food & Drug Administration） AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS （FOOD

4、 SAFETY AND INSPECTION SERVICE） ISO加拿大官方食品微生物分析方法 凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品前增菌法25gBPW225mL36 1 一般4h，干蛋品18h24h10mLMM（或TTB）100mL10mLSC100mL直接增菌法25g滅菌生理鹽水25mL檢樣勻液25mL MM（或TTB）100mL檢樣勻液25mL SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/A H2S結(jié)果 ），靛基質(zhì)，尿素，KCN，賴(lài)氨酸沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn)甘露醇 山梨醇H2S 靛 尿KCN 賴(lài)H2S 靛 尿KCN 賴(lài)/非如左述的各種反應(yīng)結(jié)

5、果沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn) ONPG 沙門(mén)氏菌非沙門(mén)氏菌42 18h24h36 1 18h24h42 18h24h36 1 18h24h36 1 40h48h36 1 18h24h 微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789.4-2003 出口食品沙門(mén)氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗(yàn)方法 肉類(lèi)、蛋品緩沖胨水（BPW）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）37 4h or 2024h直接選擇性增菌亞硒酸鹽胱氨酸（SC） 四硫磺酸鹽煌綠（TTB）37 24 2h BS & DHL (亞利桑那菌瓊脂) 前增菌37 2448h TSI & 賴(lài)氨酸脫羧酶TSI & 尿素酶 37 2

6、448h生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)（“O”抗原，“Vi”抗原） 42 20 2h 37 2448h結(jié)果判定檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 017092 樣品（20類(lèi)）25g225mL 乳糖肉湯（LB）or 胰酪胨大豆肉湯（ TSB）or 煌綠溶液 （BG）or通用前增菌肉湯（UPB）or營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）or 再造脫脂奶粉 or 四硫酸鹽煌綠（TT）pH6.80.2 242 h 35RVTT 430.2 or 352.0 242h 242h 420.2BS & XLD & HE 242h 35TSI & LIA非沙門(mén)菌沙門(mén)菌非沙門(mén)菌LIA+LIA TSI K/ALIA TSI A/A &尿素酶，H抗原（多價(jià)H抗血

7、清或Spicer-Edwards flagellar (H) test ），賴(lài)氨酸脫羧酶，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MRVP,西蒙氏檸檬酸鹽5種商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)（API 20E, Enterotube II, Enterobacteriaceae II,MICRO-ID, or Vitek GNI）&O抗原&H抗原細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)（FDA/BAM）第五章 沙門(mén)菌屬肉、禽和蛋品中沙門(mén)菌的分離和鑒定USDA/FSIS MLG 4.02樣品BPW or BPW（含結(jié)晶紫）351 20-24hBGS & DMLIA or XLT442 0.5

8、 2224h0.5 0.05mL10mL TT0.1 0.02mL10mL mRV42 0.5 2224h35 1 1824h & 48hTSI & LIA血清學(xué)試驗(yàn)商業(yè)生化試劑盒或自動(dòng)鑒定系統(tǒng) or傳統(tǒng)生化鑒定（AOAC Official Method 967.27 or Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae）報(bào)告結(jié)果 肉制品中沙門(mén)菌的分離和鑒定 FDA&USDA/FSIS乳糖肉湯緩沖蛋白胨水TTB肉湯RV肉湯TTB肉湯RV肉湯BSXLDHEXLT42倍改良LIABGS生化篩選 （LIA,TSI） 鑒定及確證試驗(yàn) 葡萄

9、糖 脲酶試驗(yàn) 衛(wèi)矛醇 動(dòng)力試驗(yàn) 吲哚 MR-VP測(cè)試 氰化鉀 粉紅酒石酸鹽瓊脂 乳糖 水楊苷 賴(lài)氨酸脫羧酶 西蒙氏枸櫞酸鹽 丙二酸 蔗糖血清學(xué)試驗(yàn)AOAC沙門(mén)菌檢測(cè)方法AOAC Official Method 967.25Salmonella in FoodsPreparation of Culture Media and ReagentsAOAC Official Method 967.26Salmonella in Processed FoodsDetectionAOAC Official Method 967.27Salmonella in FoodsIdentificationAOAC

10、 Official Method 967.28Salmonella in FoodsSerological Tests食品中的沙門(mén)菌檢測(cè)方法AOAC 967.25967.28處理樣品1mL+10mLSC1mL+10mLTT35 242hXLD & HE & BS35 242h（BS 24h&48h）35 242hTSI & LIA35 242h純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物MAC or XLD or HE尿素酶尿素酶非沙門(mén)菌H抗原，LIA，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原吲哚 & H血清KCN & LIA非沙門(mén)菌非沙門(mén)菌補(bǔ)充生化試驗(yàn)酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MRVP,

11、西蒙氏檸檬酸鹽非沙門(mén)菌沙門(mén)菌25g樣品225mL BPW35 or 37 1620 h0.1mL+10mL RV10mL+100mL SC42 24h35 or 37 24h&48h酚紅煌綠瓊脂 （亮綠瓊脂） & 第二種選擇性平板35 or 37 2024h無(wú)典型菌落再培養(yǎng)1824h典型菌落（pink red）營(yíng)養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落每個(gè)平板選5個(gè)菌落35 or 37 1824hTSI，尿素酶，賴(lài)氨酸脫羧酶，ONPG，VP，吲哚血清學(xué)試驗(yàn)（O抗原，Vi抗原，H抗原）報(bào)告結(jié)果送參考實(shí)驗(yàn)室分型ISO 6579:1993(E) 微生物沙門(mén)菌檢測(cè)的通用方法25g樣品營(yíng)養(yǎng)肉湯or緩沖胨水or煌綠 水溶液or

12、胰蛋白酶大豆肉湯35 1824 h1mL+9mL SC1mL+9mL TBG35 242h42.5 242hBS & BGS35 242h & 48 2h純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物MACTSI &LIA&尿素瓊脂O多價(jià)血清，H多價(jià)血清食品中沙門(mén)菌的分離和鑒定加拿大HPB方法商業(yè)生化試劑盒或自動(dòng)鑒定系統(tǒng)報(bào)告MFHPB-20沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法VIDAS（生物梅里埃公司） BAX （杜邦公司） 沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法VIDAS 應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的全自動(dòng)免疫分析儀 ，用熒光分析技術(shù)通過(guò)固相吸附器，用已知抗體來(lái)捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過(guò)激發(fā)光源檢測(cè)，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽(yáng)

13、性標(biāo)本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高，速度快，可以在48小時(shí)的時(shí)間內(nèi)快速鑒定沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157：H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。VIDAS 沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法DUPONT Qualicon BAX System 應(yīng)用DNA分子核酸探針或基因探針技術(shù)制造的全自動(dòng)PCR分析儀。將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標(biāo)記，加入已變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達(dá)到鑒定樣品中DNA的目的。DUPONT Qualicon BAX System 商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEK GNI+ 應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進(jìn)行測(cè)試

14、，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。先制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后將菌懸液接種到各種細(xì)菌的小卡上，將其放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)，每隔一定時(shí)間，儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)培養(yǎng)基的發(fā)酵情況，并換算成能被計(jì)算機(jī)所接受的生物編碼。最后由計(jì)算機(jī)判定，打印出鑒定結(jié)果。VITEK商品化生化鑒定系統(tǒng)API 20E API 20E 生化鑒定是根據(jù)快速酶促反應(yīng)及代謝產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的一種細(xì)菌編碼鑒定法，廣泛應(yīng)用于臨床、食品中革蘭氏陰性桿菌的快速鑒定。API 20E第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果判定ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSO