蔡永通創(chuàng)新答辯課件

1、軟珊瑚Sarcophyton tortuosum內(nèi)生真菌SarcoF5代謝產(chǎn)物研究報(bào)告人：蔡永通指導(dǎo)老師：李厚金副教授圖1 扭曲肉芝軟珊瑚的照片海底照片水上照片實(shí)驗(yàn)背景一、軟珊瑚Sarcophyton tortuosum1986年本院天然室的蘇鏡娛等從軟珊瑚Sarcophyton tortuosum中得到2個(gè)罕見(jiàn)的四環(huán)四萜化合物；2004年中山大學(xué)藥學(xué)院藍(lán)文健等又從該軟珊瑚分離得到3個(gè)新的四萜化合物。發(fā)表的文章：1 J.Y.Su, T.S.Peng et a1. Studies on the Chinese Soft Coral,The Structure of Methyl sartortu

2、oate. Acta Chem.sinica,1986,1,101.2 Jingyu Su, kanghou Long, Tangsheng Pang. The Structure of Methyl Isosartortuoate,a Novel Tetracyclic Tetraterpenoid from the Soft Coral Sarcophy tontortuosum. J.Am.Chem.Soc. 1986,108,177.3 Jingyu Su, Kanghou Long, Tangshen Peng et al.,Determination of Molecular an

3、d Crystal Stucture of a Unique New Tetraterpenoid-Methyl Sartotuoate.Science Sinica (SeriesB),1988,10 ,1172.4 Zeng Long-Mei, Lan Wen-Jian, Su Jing-Yu, Zhang Guang-Wen, Feng Xiao-Long, Liang Yong-Ju, Yang Xiao-Ping. Two new cytotoxic tetracyclic tetraterpenoids from the soft coral Sarcophyton tortuos

4、um. Journal of Natural Products. 2004, 67(11), 1915-8.5 Lan W-J, Li H-J, Yan S-J, Su J-Y, Zeng L-M. New tetraterpenoid from the soft coral Sarcophyton tortuosum. Journal of Asian Natural Products Research. 2007, 9(3-5), 267-271.圖2 四萜結(jié)構(gòu)圖(1) 以上分離得到的四萜化合物對(duì)老鼠S180，CNE-2， P-388，HT-29，CNE-1顯示了不同程度的抑制作用。 化合

5、物活性 因?yàn)檫@些四萜化合物具有顯著的抗癌活性，因此在醫(yī)藥方面有很好的應(yīng)用價(jià)值，但是因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)復(fù)雜，合成比較困難，因此對(duì)尋找其生源途徑的研究變得非常重要。共附生或內(nèi)生微生物（真菌、細(xì)菌、藍(lán)菌等）是與海洋動(dòng)植物處于共生、共棲、寄生或附生的關(guān)系的微生物。從海洋附生微生物中分離得到許多具有生理活性的化合物。 海洋植物和無(wú)脊椎動(dòng)物產(chǎn)生的活性物質(zhì)實(shí)際上是由與其共附生的微生物產(chǎn)生的？二、海洋共附生微生物分離得到的這些四萜化合物是來(lái)源于軟珊瑚本身，還是由軟珊瑚附生微生物產(chǎn)生而在珊瑚體內(nèi)積累？通過(guò)分離和純化軟珊瑚的共附生微生物，并且系統(tǒng)地研究附生微生物的代謝產(chǎn)物，將能揭示這些具抗腫瘤活性的四萜類化合物的真正來(lái)源

6、。菌種的篩選 我們課題已經(jīng)開(kāi)展了該珊瑚附生微生物的分離工作，已經(jīng)分離、純化了30多株真菌和細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)一株真菌（SarcoF5）在GYP培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。 (A) 培養(yǎng)10天的生長(zhǎng)情況 (B) 培養(yǎng)20天的生長(zhǎng)情況 (C) 培養(yǎng)30天的生長(zhǎng)情況 (D) 培養(yǎng)40天的生長(zhǎng)情況圖3 SarcoF5生長(zhǎng)情況圖微生物的培養(yǎng) 以葡萄糖(10g/L)、蛋白胨(3g/L)、酵母膏(1g/L)、100%人工海水(粗海鹽23g/L)、pH7.5為培養(yǎng)基（GYP培養(yǎng)基）配制150L培養(yǎng)液分裝到若干個(gè)1000ml的錐形瓶中，在124高溫高壓下滅菌1h。接入菌種扭曲肉芝軟珊瑚內(nèi)生真菌SarcoF5，28下靜置培養(yǎng)40天

7、。 代謝產(chǎn)物的提取 待內(nèi)生真菌SarcoF5長(zhǎng)到40天后，用紗布過(guò)濾，培養(yǎng)液用乙酸乙酯提取三次，菌體用甲醇浸泡。合并乙酸乙酯提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，濃縮得到棕色提取物43.16g，菌體的甲醇提取物也得到45.2g。培養(yǎng)液提取物的分離圖4 分離流程圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖5 分離得到化合物結(jié)構(gòu)圖結(jié)構(gòu)鑒定SarcoF5-1 實(shí)驗(yàn)分離出來(lái)的SarcoF51（青霉酸）是一種無(wú)色針狀的晶體，分子式為C8H10O4,相對(duì)分子量為170.16 。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)它的熔點(diǎn)為83, 極易溶于熱水、乙醇、乙醚和氯仿,但不溶于戊烷、己烷。圖6 SarcoF5-1結(jié)構(gòu)圖圖7 SarcoF5-1-1HNMR 圖8 SarcoF5-1-1

8、3CNMR 圖9 SarcoF5-1-DEPT-135 PositionCDEPTH234589101112172.0286.32171.17109.5857.88133.97114.3617.43CCHCCCH3CCH2CH35.233.935.21(10a)5.5010b)5.931.96表1 SarcoF51 NMR數(shù)據(jù)(1H NMR 300MHz，13C NMR 75MHz，CDCl3，TMS) SarcoF5-1互變反應(yīng) SarcoF5-1為青霉酸，是一個(gè)很強(qiáng)的多聚乙酰類霉菌毒素，首先由Alsberg等在1912年分離得到。Tautomerism of penicillic acid

9、. Munday, C. W. Nature (London, United Kingdom) (1949), 163 443-4. CODEN: NATUAS ISSN: 0028-0836. Journal language unav-ailable. CAN 43:31631 AN 1949:31631 CAPLUS the keto acid the lactone 結(jié)構(gòu)鑒定SarcoF5-2圖10 SarcoF5-2結(jié)構(gòu)圖 SarcoF5-2為無(wú)色透明針狀晶體，ESI-MSm/z 213.2(M1)+，分子式為C12H20O3。圖11 SarcoF5-2-1HNMR 圖12 Sarc

10、oF5-2-13CNMR 圖13 SarcoF5-2-DEPT-135 表2 SarcoF52 NMR數(shù)據(jù)(1H NMR 300MHz，13C NMR 75MHz，CDCl3，TMS) PositionCDEPTH2345689101112131415172.93124.87150.66203.9035.6327.2022.9443.6526.6222.8022.9422.80CCHCCCH2CHCH3CH2CHCH3CH3CH313.1536.60(4a)2.451.890.902.472.090.950.900.95結(jié)構(gòu)鑒定SarcoF5-3圖14 SarcoF5-3結(jié)構(gòu)圖 SarcoF5

11、-3為無(wú)色透明樹(shù)枝狀晶體，EI-MSm/z 228.2(M)+，分子式為C12H20O4，不飽和度為3。圖15 SarcoF5-3-1HNMR 圖16 SarcoF5-3-13CNMR 圖17 SarcoF5-3-DEPT-135 表3 SarcoF5-3 NMR數(shù)據(jù)(1H NMR 300MHz，13C NMR 75MHz，CDCl3，TMS)PositionCDEPTH1234568910121314151675.9332.3420.06151.32200.5618.66123.78172.1643.6927.0422.8522.85CHCHCH3CCCH3CHCCH2CHCH3CH39.264.871.951.020.866.24(9a)2.442.110.969.260.96正在開(kāi)展的研究研究不同培養(yǎng)條件下的代謝產(chǎn)物情況：1. 初步在GYP培養(yǎng)基中加入蒽酮，在培養(yǎng)液提取物中發(fā)現(xiàn)并分離得到了四萜化合物methyl sartortuoate。在此培養(yǎng)條件下進(jìn)行200L大規(guī)模的培養(yǎng)、提取工作已經(jīng)完成。系統(tǒng)的分離工作正待開(kāi)展。圖18 加入蒽酮后培養(yǎng)液提取物質(zhì)譜圖2. 利用甘油代替葡萄糖作為碳源，也培養(yǎng)了200升，提取、