分子發(fā)光分析法分子熒光和磷光分析法

1、第十六章 分子(fnz)發(fā)光分析法一、 儀器與結(jié)構(gòu)流程instrument and general process 二、 熒光(ynggung)分析法和應(yīng)用fluorescence analysis and application三、 磷光分析法的應(yīng)用phosphorescence analysis and application第二節(jié) 分子熒光與磷光分析法molecular luminescenceanalysis molecular fluorescence and phosphorescence analysis 2022/7/25共十八頁(yè)一、儀器(yq)結(jié)構(gòu)流程 測(cè)量熒光的儀器主要由四

2、個(gè)部分(b fen)組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測(cè)器。 特殊點(diǎn)：有兩個(gè)單色器，光源與檢測(cè)器通常成直角。 基本流程如圖：?jiǎn)紊鳎哼x擇激發(fā)光波長(zhǎng)的第一單色器和選擇發(fā)射光(測(cè)量)波長(zhǎng)的第二單色器；光源：燈和高壓汞燈，染料激光器(可見與紫外區(qū))檢測(cè)器：光電倍增管。2022/7/25共十八頁(yè)儀器光路圖2022/7/25共十八頁(yè)儀器(yq)框圖該型儀器可進(jìn)行(jnxng)熒光、磷光和發(fā)光分析；2022/7/25共十八頁(yè)同步掃描(somio)技術(shù) 根據(jù)激發(fā)和發(fā)射(fsh)單色器在掃描過(guò)程中彼此間所保持的關(guān)系，同步掃描可分為固定波長(zhǎng)差()和固定能量差及可變波長(zhǎng)三種； 同步掃描技術(shù)可簡(jiǎn)化光譜，譜帶變

3、窄，減少光譜重疊，提高分辨率； 如圖。 合適的可減少光譜重疊；酪氨酸和色氨酸的熒光激發(fā)光譜相似，發(fā)射光譜嚴(yán)重重疊，但60nm時(shí)，只顯示色氨酸的特征光譜，實(shí)現(xiàn)分別測(cè)定。2022/7/25共十八頁(yè)可獲得三維光譜(gungp)圖的儀器 可獲得(hud)激發(fā)光譜與發(fā)射光譜同時(shí)變化時(shí)的熒(磷)光光譜圖2022/7/25共十八頁(yè)磷光(ln un)檢測(cè) 熒光(ynggung)計(jì)上配上磷光測(cè)量附件即可對(duì)磷光進(jìn)行測(cè)量。在有熒光(ynggung)發(fā)射的同時(shí)測(cè)量磷光。 測(cè)量方法：（1）通常借助于熒光和磷光壽命的差別，采用磷光鏡的裝置將熒光隔開。（2）采用脈沖光源和可控檢測(cè)及時(shí)間分辨技術(shù)。 室溫測(cè)量時(shí)，不需要杜瓦瓶。

4、2022/7/25共十八頁(yè)二、熒光(ynggung)分析方法與應(yīng)用1. 特點(diǎn)（1）靈敏度高 比紫外-可見分光光度法高24個(gè)數(shù)量級(jí)；為什么？ 檢測(cè)下限：0.10.1g/cm-3 相對(duì)靈敏度：0.05mol/L 奎寧硫酸氫鹽的硫酸溶液。（2）選擇性強(qiáng) 既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜；（3）試樣量少 缺點(diǎn)：應(yīng)用(yngyng)范圍小。2022/7/25共十八頁(yè)2.定量(dngling)依據(jù)與方法(1)定量(dngling)依據(jù) 熒光強(qiáng)度 If正比于吸收的光量Ia和熒光量子效率 ： If = Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10- l c ) If = I0(1-10- l c

5、 ) = I0(1-e-2.3 l c ) 濃度很低時(shí)，將括號(hào)項(xiàng)近似處理后： If = 2.3 I0 l c = Kc2022/7/25共十八頁(yè)（2）定量(dngling)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線(qxin)法： 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度；比較法： 在線性范圍內(nèi)，測(cè)定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度，比較；2022/7/25共十八頁(yè)3.熒光(ynggung)分析法的應(yīng)用(1)無(wú)機(jī)化合物的分析 與有機(jī)試劑配合物后測(cè)量；可測(cè)量約60多種元素。 鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂、稀土常采用熒光分析法； 氟、硫、鐵、銀、鈷、鎳采用熒光熄滅法測(cè)定； 銅、

6、鈹、鐵、鈷、鋨及過(guò)氧化氫采用催化熒光法測(cè)定； 鉻、鈮、鈾、碲采用低溫(dwn)熒光法測(cè)定； 鈰、銪、銻、釩、鈾采用固體熒光法測(cè)定(2)生物與有機(jī)化合物的分析 見表 2022/7/25共十八頁(yè)2022/7/25共十八頁(yè)2022/7/25共十八頁(yè)三、磷光分析法的應(yīng)用(yngyng)1.稠環(huán)芳烴分析 采取固體表面室溫(sh wn)磷光分析法快速靈敏測(cè)定稠環(huán)芳烴和雜環(huán)化合物（致癌物質(zhì)）；見表2.農(nóng)藥、生物堿、植物生長(zhǎng)激素的分析 煙堿、降煙堿、新煙堿，2，4-D等分析 檢測(cè)限0.01 g/cm-3 3.藥物分析和臨床分析 見表2022/7/25共十八頁(yè)2022/7/25共十八頁(yè)2022/7/25共十八頁(yè)

7、內(nèi)容(nirng)選擇第一節(jié) 分子熒光和磷光molecular fluorescence and phosphorescence第二節(jié) 分子熒光和磷光分析法molecular fluorescence and phosphorescence analysis第三節(jié) 分子發(fā)光(f un)分析chemiluminescence analysis結(jié)束2022/7/25共十八頁(yè)內(nèi)容摘要第十六章 分子發(fā)光分析法。第十六章 分子發(fā)光分析法。第二節(jié) 分子熒光與磷光分析法。2022/3/8。測(cè)量熒光的儀器主要由四個(gè)部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測(cè)器。儀器光路圖。60nm時(shí)，只顯示色氨酸的特征光譜，實(shí)現(xiàn)分別測(cè)定。熒光計(jì)上配上磷光測(cè)量附件即可對(duì)磷光進(jìn)行測(cè)量。既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸