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1、bo bardxera巴德生物科技有限公司1.目的規(guī)范單克隆抗體標(biāo)記熒光PE （快速標(biāo)記法）標(biāo)準(zhǔn)操作程序適用范圍適用于本公司抗體標(biāo)記熒光PE （快速標(biāo)記法）操作術(shù)語(yǔ)和定義藻紅蛋白，簡(jiǎn)稱“PE”。相對(duì)分子質(zhì)量較大，約為240kD，最大吸收峰為564nm。職責(zé)和權(quán)限實(shí)驗(yàn)員負(fù)責(zé)實(shí)施本規(guī)范，主管負(fù)責(zé)人監(jiān)督執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)試劑.5.1溶液配制0.01mol/L PBS溶液配制0.01mol/L Phosphate Buffered Saline， pH 7.40試劑名稱配方量批號(hào)用量Water1Lbo巴德生物科技有限公司NaCl (MW 58.44)0.799gKH2PO4(MW 136.09)0.2gKCl
2、 (MW 74.55)0.2gNa2HPO4 - 12H2O (MW 358.14)2.89g調(diào)節(jié)pH 7.40后，加水定容至1.0L，再調(diào)節(jié)pH至7.40，過(guò)濾備用。Storage Buffer，pH 7.40試劑名稱配方量批號(hào)用量0.01mol/L PBS/BSA0.5%NaN30.1%調(diào)節(jié)pH 7.40后，加水定容至1.0L，再調(diào)節(jié)至pH 7.40。5.2其他試劑bo巴德生物科技有限公司試劑名稱廠家批號(hào)活化液（modifier）淬滅劑（quencher）PE熒光素6.操作流程6.1抗體活化將抗體用0.01mol/L PBS稀釋為1mg/mL，加入 mL活化液（體積比為抗體溶液：反應(yīng)活化液
3、=10:1）,旋渦振蕩器混勻后，室溫避光反應(yīng)10min。6.2與PE反應(yīng)形成共軛物將抗體混合液（步驟6.1）加入 mg PE熒光素中（加入量：抗體與熒光素質(zhì)量比為1:1），在室溫條件下避光反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)開始時(shí)間： 至結(jié)束時(shí)間 ：；（或2-8度條件下避光過(guò)夜）。6.3熒光淬滅向共軛物（步驟6.2）中加入 mL淬滅劑（淬滅劑添加量按抗體體積：淬滅劑體積=10:1添加）?；靹蚝螅覝胤跤?0分鐘，去除游離的熒光素的熒光效應(yīng)。淬滅開始時(shí)間：至結(jié)束時(shí)間：。6.4層析將共軛物（步驟6.3）層析柱分離，進(jìn)一步去除游離的熒光素或抗體。bo bardxera巴德生物科技有限公司6.5保存收集得到的標(biāo)記抗體（步驟6.4
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