分析方法的確認與驗證管理規(guī)程

1、 分析方法的確認與驗證管理規(guī)程目的：明確分析方法的驗證和確認的管理制度，確保所采用的檢驗方法科學、合理，使檢驗結果的準確、可靠。范圍：適用于本公司的物料，中間產(chǎn)品，中間過程控制和產(chǎn)品的理化分析方法的驗證和確認，清潔方法的驗證。職責：質(zhì)量管理部、檢測中心對本規(guī)程的實施負責。1、內(nèi)容：1.1 分析方法驗證藥品質(zhì)量標準分析方法驗證的目的是證明所采用的方法適合相應的檢測要求。符合下情形之一的，應當對檢驗方法進行驗證。采用新的檢驗方法；檢驗方法需要變更的；采用中國藥典及其它法定標準未收載的檢驗方法；4）法規(guī)規(guī)定的其它需要驗證的檢驗方法； 表1：不同檢驗項目需要的驗證不同：內(nèi)容 項目 鑒別雜質(zhì)含量測定及溶

2、出量測定 定量 限度準確度- +- +精密度重復性- +- +中間精密度- +- +專屬性 + + +檢測限- -+ -定量限- +- -線 性- +- +檢測范圍- +- +耐用性- +- +注：.已有重現(xiàn)性的可不需通驗證中間精密度；.如一種方法不夠專屬可用其它方法予以補充；.視具體情況予以驗證。+正常要驗證的內(nèi)容，-表示不要驗證的內(nèi)容。1.2在建立藥品質(zhì)量標準時，應對分析方法中的各檢驗項目進行完整的驗證。1.3當藥品生產(chǎn)工藝變更時，制劑的組分變更、原分析方法修訂時，可根據(jù)變更的內(nèi)容決定對分析方法進行部分驗證還是完全驗證。1.4當原料藥合成工藝發(fā)生變更時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量

3、測定方法的專屬性就需要進行驗證，以證明有關物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入1.5當質(zhì)量標準中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進行檢測限、定量限、專屬性、準確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗證，證明修訂后的分析方法的合理可行。 1.6當變更達到一定程度時，則需要完整的驗證。如分析方法完全改變，則應按新方法進行完整的驗證。2.方法驗證的一般原則2.1通常情況下，檢驗方法需進行方法驗證。對于僅需按照實驗室日常測試操作步驟即可測定的檢驗項目不需進行方法驗證，如外觀、崩解時限、密度、重量、pH值、灰分、裝量、硫酸鹽等。2.2方法驗證的內(nèi)容應

4、根據(jù)檢驗項目的要求，結合所采用分析方法的特點確定。2.3 同一檢驗方法用于不同的檢驗項目會有不同的驗證要求。2.4方法驗證中需要驗證的檢驗項目 檢驗項目是為控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全有效而設定的測試項目。根據(jù)檢驗項目的設定目的和驗證內(nèi)容的不同，將需驗證的檢驗項目分類如下： （1）鑒別試驗；（2）雜質(zhì)的限度檢查；（3）雜質(zhì)的定量檢查； （4）含量測定，包括原料藥或制劑中有效成分的含量，制劑中其他成分（如防腐劑等）的含量，溶出度與釋放度等檢查中的溶出量以及含量均勻度。 除此之外還有一些物理項目的檢測如粒徑分布、旋光度、熔點和硬度，其要求與其它檢驗項目有所不同，通常在進行分析方法驗證應有不同的要求。

5、2.4.2鑒別的目的在于判定被分析物是目標化合物，而非其它物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強的專屬性和耐用性。2.4.3雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無機雜質(zhì)，有機雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測定兩部分。用于限度檢查的分析方法驗證側重專屬性、檢測限和耐用性。用于定量測定的分析方法驗證強調(diào)專屬性、準確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。 含量測定對準確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準確度和線性等要求。3.方法驗證內(nèi)容主要依據(jù)中國藥典2010年版附錄A藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則。3.1準確度 準確度系指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度

6、，一般用回收率（)表示。準確度應在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。驗證方法：準確度應在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，至少用9個測定結果進行評價。例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定。 準確度是定量測定的必要條件，因此含量測定、雜質(zhì)定量測定均需驗證準確度。含量測定準確度的驗證方法 原料藥可用已知純度的對照品或供試品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定的結果進行比較。 制劑可用含巳知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加人已知量的被測物進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定結果進行比較。 如該檢驗方法已經(jīng)測試并求出了精密度、線性

7、和專屬性，在準確度也可推算出來的情況下，這一項可不必再做。雜質(zhì)的定量測定準確度驗證方法 可向原料藥或制劑中加人已知量雜質(zhì)進行測定。 如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。 在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應因子或不能測得對原料藥的相對響應因子的情況下，可用原料藥的響應因子。應明確表明單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當于主成分的重量比（)或面積比（)。數(shù)據(jù)要求 應報告已知加人量的回收率（)，或測定結果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或可信限。3.2精密度 精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一

8、般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在相同條件下，由同一個檢驗人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一個實驗室，不同時間由不同檢驗人員用不同設備測定結果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同檢驗人員測定結果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。驗證方法：精密度可從重復性、中間精密度、重現(xiàn)性三個層次考察。重復性 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結果進行評價。例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定，或將相當于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結果進行評價。中間精密度 為考察隨機變動因素對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人

9、員、不同設備。重現(xiàn)性 法定標準采用的檢驗方法，或在不同實驗室之間進行方法轉移時，應進行重現(xiàn)性試驗。例如，建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現(xiàn)性結果均應記載在起草說明中。應注意重現(xiàn)性試驗用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結果。數(shù)據(jù)要求 均應報告標準偏差、相對標準偏差和可信限。3.3專屬性 專屬性系指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質(zhì)檢査和含量測定方法，均應考察其專屬性。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。專屬性驗證方法 鑒別試驗用于確認被測成分符合其特征。

10、專屬性要求證明其其能與可能共存的物質(zhì)或結構相似化合物區(qū)分，含被測成分的供試品呈正反應，而不含被測成分的供試品以及結構相似或組分中的有關化合物，應均呈負反應。對于藥品，輔料不得干擾其有效成分的鑒別。雜質(zhì)測定，包括限度檢查和定量測定。作為純度檢查，所采用的分析方法應確保可檢出被分析物中雜質(zhì)的含量測定，如有關物質(zhì)、重金屬、有機溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。其專屬性驗證的有： 方法1：在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具有適當?shù)臏蚀_度與精密度。 方法2：在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過測定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與

11、另一個已驗證的方法或藥典方法比較結果?；驅υ嚇佑脧姽庹丈?，高溫，高濕，酸（堿）水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑，并比對破壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。含量測定 含量測定的目的是得到試樣中被分析物的含量測定或效價的準確結果。其專屬性驗證的有： 方法1：在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向試樣中加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測定結果。 方法2：在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過測定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與另一個已驗證的方法或藥典方法比較結果?；驅υ嚇佑脧姽庹丈洌邷?，高濕，酸（堿

12、）水解或氧化的方法進行加速破壞，用兩種方法進行含量測定，比較測定結果。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測進行峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。 和色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應符合要求。 色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明諸成分在圖中的位置，色譜法的分離度應符合要求。3.4檢測限 檢測限（LOD或DL）系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的雜質(zhì)測定，應通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下： 方法1：非儀器分析目視法，即用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出

13、的最低濃度或量。 方法2：信噪比法，用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。非儀器檢驗目視法 用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。信噪比法 用于能顯示基線噪聲的檢驗方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時相應濃度或注人儀器的量確定檢測限。數(shù)據(jù)要求 應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結果。3.5定量限 定量限（LOQ或QL）系指試樣中被測

14、物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應確定方法的定量限。雜質(zhì)定量測定驗證方法常用信噪比法確定，一般以信噪比為10:1時相應濃度或注人儀器的量確定定量限。3.6線性 線性系指在設計的測定范圍內(nèi)，檢測結果與試樣中被測物的濃度直接呈正比關系的程度。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定量測定和含量測定均需驗證線性。 線性的驗證方法 應在規(guī)定的測定范圍內(nèi)測定線性關系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5個濃度的供試樣品，每個濃度各一份，每份供試樣品檢測3次，以測得的響應信號作為被測物濃

15、度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經(jīng)數(shù)學轉換，再進行線性回歸計算。數(shù)據(jù)要求 應列出回歸方程、相關系數(shù)和線性圖。3.7范圍 范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 范圍應根據(jù)檢驗方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，需涵蓋的最低濃度范圍應至少為標示量的80%120%；制劑含量均勻度檢査，需涵蓋的最低濃度范圍應至少標示量的為70%130%，根據(jù)劑型特點，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬； 溶出度或釋放度的溶出量測定，需涵蓋的最低濃度范圍應為限度的20%,對于具有不同劑量的同種藥品，但測

16、試溶液濃度一樣的前提下，只需進行一個劑量的線性試驗（應涵蓋限度的20%），該試驗即可用于該種藥品的所有劑量。如規(guī)定了限度范圍，則應為下限的-20%至上限的+20%； 雜質(zhì)測定，需涵蓋的最低濃度范圍應根據(jù)初步實測，擬訂為規(guī)定限度的20%。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時進行，用百分歸一化法，則線性范圍應為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%。推薦包含LOQ規(guī)定限度的+20%。3.8耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。 開始研究檢驗方法時，就應考慮其耐用性。經(jīng)試驗，應說明小的變動能否符合系統(tǒng)適用性試驗要求，以確保方法有效。如

17、果通過耐用性研究發(fā)現(xiàn)分析方法對某個或某些測試條件敏感或要求苛刻，則應在方法中予以寫明。方法耐用性的影響因素 被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時間等。 高效液相色譜法（HPLC）中典型影響耐用性的變動因素有：流動相的組成和pH值；不同品牌或不同批號的同類型色譜柱；柱溫、流速等。氣相色譜法（GC)中典型影響耐用性的變動因素有：不同品牌或不同批號的同類型色譜柱、固定相、不同類型的載體；柱溫、進樣口和檢測器溫度等。方法確認 4.1方法確認的目的是通過方法確認來證明方法在本實驗室條件下的適用性。4.2方法確認適用于：物料和產(chǎn)品中不需要進行驗證的檢驗方法以及藥典方法和其它已驗證的法定標準，在實驗室批準使

18、用前需做方法確認。 4.3方法確認不適用于：實驗室日常測試操作步驤不需要進行方法確認，例如（包括但不限于）干燥失重、熾灼殘渣、各種濕法化學步驟如酸值和簡單的儀器方法如pH計，除非有特殊要求。 4.4方法確認的確認方式 對于方法確認，通常采用如下兩種方式： 方式一：由兩名檢驗人員分別獨立對同一批產(chǎn)品進行檢驗（如有可能，使用不同的儀器），比較兩人的檢測結果來證明方法在本實驗（人員、分析儀器、試劑等）的適用性方式二：根據(jù)確認目的和評估結果選擇相關檢驗項目進行確認，如表2所示： 表2檢驗項目確認內(nèi)容檢驗項目準確度精密度專屬性檢測限定量限線性范圍耐用性原料藥鑒別（HPLC法)否否可能否否否否否有關物質(zhì)（

19、HPLC法）否可能是否否否否含量測定（HPLC法)否可能可能否否否否制劑 鑒別（HPLC法)否否是否否否否否溶出度可能是是否可能否否否有關物質(zhì)可能是是否是否否否含量測定可能是是否否否否否備注：“是”代表該項內(nèi)容需要確認， “否”代表該項內(nèi)容不需要確認。 “可能”代表該項內(nèi)容需根據(jù)實際情況評估確認。如遇特殊情況，仍應根據(jù)具體檢驗對象和情況而定。5.方法再驗證5.1方法再驗證適用范圍在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行部分或完整的再驗證，以保證分析方法可靠。當原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進行驗證，以證明有關物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應無干擾。 當制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗證。當原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和準確度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進行再驗證。 當質(zhì)量標準中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢