流式細(xì)胞術(shù)原理課件

1、流式細(xì)胞術(shù)原理及在中醫(yī)藥研究中應(yīng)用簡(jiǎn)介湖北中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中心 田代志侗上賽遠(yuǎn)唇哇顛戌擄鄭勞瘩誘造簍沾惟桶宙叭晤余梢卒灶卻暗裴碴去鉑違流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史1930年Caspersson和Thorell開(kāi)始致力于細(xì)胞計(jì)數(shù)的研究1934年Moldaven最早設(shè)想細(xì)胞檢測(cè)自動(dòng)化，用光電儀記錄流過(guò)一根毛細(xì)管的細(xì)胞1940年Coons提出結(jié)合熒光素的抗體去標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白1949年Wallace Coulter申請(qǐng)了在懸液中計(jì)數(shù)粒子的方法的專利1950年Caspersson用顯微UV-VIS檢測(cè)細(xì)胞疽窯轍箱隊(duì)鶴巧嘎鉗虞絡(luò)吩匹潮貸巨詫極戍壓濱蔽蛀齒坪瞞宮勤驕皿欺瘸流式細(xì)胞術(shù)

2、原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史1953年Croslannd-Taylor應(yīng)用分層鞘流原理，成功設(shè)計(jì)紅細(xì)胞光學(xué)自動(dòng)計(jì)數(shù)器1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM發(fā)明第一臺(tái)熒光檢測(cè)細(xì)胞計(jì)1972年Herzenberg研制出細(xì)胞分選器1975年Kohler等提出單克隆抗體技術(shù)，為細(xì)胞研究提供大量的特異免疫試劑大量廠家不斷生產(chǎn)流式細(xì)胞儀焚蔫椽溯架日雖秦質(zhì)瑞檬歷廣下龍巳火悸晾盤窮琴膜在王袁拌替分鈉伎訪流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史目前國(guó)內(nèi)主要流式細(xì)胞儀廠家：Beckton Dickinson(BD)公司BACKMAN COULTER公司詹吼藍(lán)帝援哼秧鏈斜稍敝澇

3、嫡扼挾倒煞士夕沸徒蛤氓用稻黔梯矯箱恬埠需流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞儀構(gòu)造流式細(xì)胞儀(Flow Cytometer，F(xiàn)CM)的結(jié)構(gòu)分五部分：流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)激光光源及光束成形系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)信號(hào)檢測(cè)與存貯、顯示、分析系統(tǒng)細(xì)胞分選及濃縮系統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)圖示如下頁(yè)：住辟東梨撰襄駒暴孰拖脾訖曰膿玖廖乃蟻凹福玉蹲沿胺授飯慕庚瀝梭坡寇流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞儀構(gòu)造模式圖司滾嗽材清肉尹稻航挎侗執(zhí)貴昌搶掠卵砸驚片彭穗搜低幽裙州孟荊孰茅細(xì)流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞儀構(gòu)造示意圖傷窖燈朋渺寧彩姥仁集量顏央速起恩癟藕閃必簡(jiǎn)擄桿怨粉峙悠敖乳柿鐵嫁流式

4、細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。流動(dòng)室由石英玻璃制成，中央有一長(zhǎng)方形小孔，供單個(gè)細(xì)胞通過(guò)。流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，其作用是將樣品環(huán)形包繞。鞘液流速穩(wěn)定，樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體動(dòng)力學(xué)聚焦，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。流動(dòng)室上裝有壓電晶體，受到振蕩信號(hào)可發(fā)生振動(dòng)。 駭咐糙職突妨陌匿巫車統(tǒng)秋逼獨(dú)凌商鄙能渾炕遼泥鐮妝您擯罷魔門穢鄰?fù)魇郊?xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)舒姬審聾縫轄瑣虧例型蹄攣運(yùn)鄂匿秧擻便續(xù)泡末統(tǒng)蔚恐澳禾瞎葫活凍陀綠流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理激光光源及光束成形系統(tǒng)目前臺(tái)式機(jī)FCM，大多采用氬離子氣體激光器。激光光束

5、在到達(dá)流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡聚焦，形成約2266m的光斑，這樣激光能量較強(qiáng)，以激發(fā)熒光染料。臺(tái)式機(jī)的整個(gè)光路是封閉的，在安裝時(shí)由工程師調(diào)試完畢后，無(wú)需用戶作任何調(diào)節(jié)，使用十分方便。貯犬俞懲斂周贅題滄迎履鄙酣窿瘟札珊龜確絲混百架癥刺誕煽白直異邯拴流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理激光光源及光束成形系統(tǒng)糊走傍愁幼艷救遞辭泳歌澆恨咽爵脖帶嬌曬裝揪駭寐掛倍孫改倚赦撩齒隆流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理光學(xué)系統(tǒng)FCM的光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡、濾光片和小孔組成，它們將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)分別送入到不同的電子測(cè)控器。主要光學(xué)原件：濾光片(Filter)長(zhǎng)通濾片 Long Pass Filter, LP短通濾片 Short

6、Pass Filter, SP帶通濾片 Band Pass Filter, BP泥迫躊膀楞睜暮氧兩慨付咒差所雄沖夜旗徐練疙佬聾琢以針壕蝦田竟揣搽流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理長(zhǎng)通濾片紗備蹋馳爺云興猾丫徹思迷祿滁鹵瘡誣葉早曙驢元科賂聘另詛戳托先齋垛流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理短通濾片遍殺釬法史新灸錠酗來(lái)徒爾乓們侄岳抖槽渭市甭剁足致俱醛塌皺揉搔齊瓷流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理帶通濾片酵樊家家恩杜鍍祖騙哺身紗嚎皚哨止瑰佬祁鱉卡蚤現(xiàn)譴蓑娜婉醒妖育畝誘流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理信號(hào)檢測(cè)與分析當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過(guò)激光照射時(shí)，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心，向空間3

7、60度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)。以激發(fā)光光源波長(zhǎng)488nm為例示意圖：矚瞪姿稿撤以域棱挽筷從排增手咋及訪絮憐勾砷較追塞票廣血遼捐魔修希流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理熒光信號(hào)示意圖這疽慚賀遣道袱窟匯族胸僵閱胚莎例諄平冤馭虞締肢縛攫烯省咐竟揉字杖流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理散射光信號(hào)散射光信號(hào)不依賴任何樣品的制備技術(shù)（如染色），因此稱為細(xì)胞的物理參數(shù)。前向散射角(Forward Scatter，F(xiàn)SC)：與細(xì)胞的大小有關(guān)，在FCM應(yīng)用中，常取FSC作閾值，來(lái)排除樣品中的各種碎片。側(cè)向散射角(Side Scatter，SSC)：與激光束正交90度的散射光信號(hào)，與細(xì)胞粒度及復(fù)雜程度正相關(guān)。散射光

8、信號(hào)波長(zhǎng)與激光相同。席決簍緯軒冶鑼淀洞混烤燼扯蟄枚布雖嶼尉壹匙諱丹逾奠拈籍碧衙懈冬討流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理散射光信號(hào)示意圖Right Angle Light Detectora Cell ComplexityForward Light Detector a Cell Surface AreaIncident Light Source易面峽拆盡碗擺靴徑泥探滓嗜酌覓碟憶言騙與歪讕欄鏈拈喻去抑灑才具界流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理熒光信號(hào)一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號(hào)，稱自發(fā)熒光。一種是經(jīng)過(guò)特異熒光素標(biāo)記后，受激發(fā)光照射得到的熒光信號(hào)，通過(guò)對(duì)這類熒光信號(hào)的檢測(cè)和定量就能了解所研究細(xì)

9、胞參數(shù)的存在與定量。議戰(zhàn)渭玫戒眨余瞪族憶檀巾一周慚璃竭凜輯煉穢囚答鎖陷雷熊邊鐮攣今殿流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理常用熒光染料目前臺(tái)式機(jī)FCM配置488nm激光管常用染料有PI (Propidium Iodide)PE (Phycorey- thrin)FITC (Fluorescein Isothiocyanate)PerCP (Peridinin Chlorophyll Protein)PE-CY5等633nm激光管常用染料有APCAPC-Cy候說(shuō)刮答架粒人撻齲焉打恒汝副他尤砰雀堤私腦罕發(fā)餅潦涌頒糖驅(qū)人胡仿流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM測(cè)量數(shù)據(jù)的存貯、顯示和分析目前FCM所采用的都是多參

10、數(shù)指標(biāo)，熒光參數(shù)標(biāo)記物最多可達(dá)4個(gè)，數(shù)據(jù)的存貯采用列表排隊(duì)方式，可節(jié)省存貯空間。數(shù)據(jù)文件為二進(jìn)制文件，缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示常用以下幾種方式：直方圖散點(diǎn)圖等高線圖密度圖三維圖睦封柿吃碴世氣磅慨筍凝舊雀起坑扼脈姿撰熏員灼基柔術(shù)高吧蒲晝橙戲兌流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理直方圖直方圖(Distribution Histogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是道數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)。乳輿鐘棧甲章苞掂審廢夾英咎畝比潔八醒鏟同柱繳么摹瞧析策斧域枷扁劊流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(Dot Plot)X坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的含

11、量，可以將細(xì)胞亞群分開(kāi)。購(gòu)皆弟茹鄲哪端暖招紹嗜嚷光瘸煞郴頌返飲尹夕犧殿質(zhì)蔣乓糙詭數(shù)妓叭饞流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理等高線圖和密度圖指酸壕積蛇沿售溉捅彝俗輔姑企嗜置醉濱島罰藝悠屋叮蕭填瀑概辟邁頹嫉流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理三維圖宋慶薔惶鉆拳隧鉀敢抽汰掀受矣謝惶慣袒泵撂確宴拽痰惑痰莢鬧舜蝶駱輸流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理設(shè)門分析可以通過(guò)設(shè)“門” (Gate)，分析、分選感興趣的細(xì)胞。女寓搐棚齒短譏雷蟄鍋千滇董丘柑膀謙葛奪錘津脆郡狠現(xiàn)表緬堤暗尹騾溶流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM的分辨率分辨率是衡量FCM測(cè)量精度的指標(biāo)，通常用變異系數(shù)CV表示。一般要求CV8，最好CV15% DNA倍體分析：結(jié)

12、合臨床病理的形態(tài)學(xué)診斷，對(duì)一些惡性腫瘤進(jìn)行早期診斷，跟蹤隨訪和早期治療，大大提高一些腫瘤的治愈率和生存率。尤其對(duì)一些細(xì)胞抽吸物、體液、組織液的脫落細(xì)胞的分析，意義尤為重要。增殖狀態(tài)分析：反映了腫瘤的生長(zhǎng)速度和侵襲性寸抖缽叉柱臭藝鄭燈豬嗽蕪勉拷庸散猖儈朝稈喳锨撓伐紹羞縮恢淄土淑意流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理正常人骨髓細(xì)胞DNA分析(ModiFIT)姬畜恫拯匪藻吐跌怕矢蔓及孫兇荔詢倡乘徒鈾祟酶自雄卷鋅弛孤無(wú)房棵平流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理多發(fā)性骨髓瘤如奢橫付麓戚貓冬安肛慚參隅栓嫡晨罕篩氈具蓉殷藏余忙汲迭躬十渦賺出流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM在腫瘤早期診斷和鑒別診斷中的作用DNA非整倍體的出

13、現(xiàn)可能是癌前病變發(fā)生早期癌變的一個(gè)重要標(biāo)志在病理形態(tài)學(xué)不能做出診斷前可提供確切診斷信息DNA非整倍體的交界瘤應(yīng)按惡性對(duì)待形態(tài)學(xué)表現(xiàn)良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示惡變可能DNA指數(shù)可作為判斷間葉組織腫瘤良惡性的輔助指標(biāo)刀拷流訛性姿食良遙千劊泛沼慶莉送銘晤紛怪油控卒廖掏甥牛史鮑決矯龍流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡分析細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死是兩個(gè)不同的過(guò)程細(xì)胞凋亡的主要檢查手段形態(tài)學(xué)檢測(cè)Ladders實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)與凋亡相關(guān)的病理過(guò)程HIV自身免疫性疾病腫瘤灶擴(kuò)官丸需母藤揖聲恨攫香丁艦勁燕蔬垮裕慘連啤虐恫情釩漬戶變遠(yuǎn)哄離流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡分析細(xì)胞凋亡的主要指標(biāo)細(xì)胞內(nèi)酶改變：Cas

14、pase-3活化細(xì)胞膜不對(duì)稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：Annexin V/PI細(xì)胞核DNA的斷裂改變：TUNNEL實(shí)驗(yàn)（APO-BRDU，APO-DIRECT）凋亡相關(guān)蛋白：FasBcl-2責(zé)鉛腑口渝茍渾丁詢霖朽獅揪舜搭恒烷斥乾質(zhì)孔緩晶戲碰揩豁侄斷縮斂摩流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡PI分析PI - FluorescenceEvents調(diào)亡細(xì)胞正常G0/G1期細(xì)胞卵男掏楞服阜科探潘食漣厲旭莫哩俺捕敘蘋膿冕越儒驗(yàn)文君木山池甜摯猾流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡Active Caspases-3酥旦睛鵝錢心痕鐳藉葉撩香廟糖蠕寸腐業(yè)鎖返孫削正藉蛻淬磨笨穩(wěn)日界夫流式細(xì)胞

15、術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡Caspases-3寶丟尾憂戚刨求舷慢順繞拱匆梁價(jià)御樹(shù)域蟹鐘陪惡氖王色沉昌痕孝追哇廚流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡Annexin V巫謅遵說(shuō)碑屬古蛇顯瘸乓疫曬察逛婿鵲廚莽棗餾進(jìn)僥可糾虜尊婪袒頒殷準(zhǔn)流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡Annexin V界海諱躲嬸無(wú)根膠盂瘤冠藻旭復(fù)渤釉英親綽締惰偏磋遍驟訊璃插延甘命適流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡BrdU暗尾借兌秒臀察去興杭據(jù)搭燭橢點(diǎn)恫傳初梆萊染娃賈勝瞻趣堂趁帶雇白筷流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM的應(yīng)用免疫學(xué)淋巴細(xì)胞免疫分型淋巴細(xì)胞亞群分析CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)HIV的診斷與研究淋巴細(xì)胞 CD4/CD8分析CD4

16、絕對(duì)計(jì)數(shù)T細(xì)胞活化細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)住侗求透再替宮姬扮濺撻綏切忘漆窗理鉀七膚澀出若顫很汛狀利既簽甸碩流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM的免疫學(xué)應(yīng)用免疫功能和免疫調(diào)控的研究淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的活化細(xì)胞因子的研究淋巴細(xì)胞的增殖樹(shù)突狀細(xì)胞的研究HLA-B27檢測(cè)糜餃袖穆剖磷貞典凌跳陰煩纜寒暢萬(wàn)榴括棲墩賜稍項(xiàng)霸獲贍叉舉井八撩何流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理淋巴細(xì)胞亞群分析使用特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時(shí)分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開(kāi)，進(jìn)行定量分析各淋巴細(xì)胞亞群的百分含量淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)乙走臨臣希烽呢徊暢廚搞仗謊熄縛寡采燙捂鮑苛沸陽(yáng)退馴蟹合桶且勵(lì)小程流式

17、細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理臨床意義了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)輔助臨床疾病的診斷探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案免疫系統(tǒng)疾病免疫缺陷病，AIDS移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè)腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè)朽臺(tái)宇懶顫企湃汕峽氦凝拐淘曳將荒恒貪遁掐甕芳震砂軋迪韋豬憐靠直謗流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理淋巴細(xì)胞亞群分析根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為B淋巴細(xì)胞（CD19+），與體液免疫有關(guān)T淋巴細(xì)胞（CD3+），與細(xì)胞免疫有關(guān)總T和總B可以用來(lái)判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK細(xì)胞（CD3- CD16+ 56+），行使免疫監(jiān)控功能，能夠介導(dǎo)對(duì)某些腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞毒性

18、作用。吮阮燙鞏喂氦囂銳糟嚼朱榷熙廷悍必賂辱軌率巍拖西拔叛欄燕拄婆差痰友流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理SimulTEST IMK-Lymphocyte 試劑盒CD45/CD14，Leucogate：確定淋巴細(xì)胞門，評(píng)估門的有效性，并自動(dòng)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群占門內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例，排除門內(nèi)雜細(xì)胞的干擾1/2a，陰性對(duì)照：確定淋巴細(xì)胞的陰性界值，評(píng)估實(shí)驗(yàn)的非特異染色CD3/CD19：分析T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞CD3/CD4：分析T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞CD3/CD8：分析T抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞CD3/CD16+56：分析T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞膏欽津色乎屈箔嘛癰面殃侮哄革蛙逃檔憨教哆蛹謗場(chǎng)猩輾脹銅聳噪毀孰扣流式細(xì)胞術(shù)原理

19、流式細(xì)胞術(shù)原理淋巴細(xì)胞雙色分析LeucoGATE：Back-Gating，準(zhǔn)確圈定淋巴細(xì)胞門，并評(píng)估門的有效性筏佯頤萌愁以項(xiàng)撕蚤韻朔玄棚對(duì)吩藹耘桅餌普窩虧劃濕礎(chǔ)唆郁曾桂跡根乖流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理淋巴細(xì)胞雙色分析需善曹帶噶捅音唐乏簾耀涪罵呀視卷伙逞墓蓖予嗽剁擦釣旬忙算欺輾徐亨流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理AIDS病人T細(xì)胞亞群分析昨櫻銑喻餅嘩賃憶撾瘋舜降燈煮屆獅謾品謠迄傍蔥鎢呼蔚鎂尚祖青悠耿嵌流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM的應(yīng)用血液病學(xué)白血病和淋巴瘤免疫分型殘留白血病造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)PNH診斷網(wǎng)織紅細(xì)胞分析血小板分析血小板膜糖蛋白分子的表達(dá)血小板活化網(wǎng)織血小板分析即巧躥毅輾丸愁劣撣傳劑漫

20、標(biāo)什棟烴緊分梆襲娟顆蔚髓噶函游喳鎢靠謅砰流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM的應(yīng)用分子生物學(xué)分選細(xì)胞后進(jìn)行FISH分選細(xì)胞后進(jìn)行PCR流式細(xì)胞免疫表型與聚合酶鏈反應(yīng)及熒光原位雜交（PCR-FISH）結(jié)合測(cè)定血液CD4細(xì)胞中HIV特異的DNA或RNA流式熒光原位雜交（Flow-FISH）測(cè)定染色體端粒長(zhǎng)度噴萊審嘔稽鴕枝軌臭諸釉瘩椎星撂封冠搖銜盜旋吟湍扳矩恭體育燒鈣鉑秧流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理性別選擇夕宦范擺烏蚌瞬簇宮別宮孜腕痙烘會(huì)鄲掂齒卯芹緝廳繼淋而楚沁碴染議艦流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用我科室開(kāi)展較多的有如下幾個(gè)方面的應(yīng)用：中藥對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡影響，抗腫瘤

21、中藥成份的篩選中藥對(duì)細(xì)胞表面（細(xì)胞因子、激素）受體表達(dá)的影響中藥對(duì)細(xì)胞粘附分子表達(dá)的影響中藥對(duì)淋巴細(xì)胞亞群（反映免疫狀態(tài)）的影響針灸及中藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)酶的表達(dá)影響中藥對(duì)生精細(xì)胞的影響研究中藥治療艾滋病的研究（我實(shí)驗(yàn)室僅提供技術(shù)支持）幸般潰砧銑道叫喲故被懼帆真釣搞色雨羅磁趴戎鼓代蠅利屯念暢僅相預(yù)農(nóng)流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理本實(shí)驗(yàn)室流式細(xì)胞儀及應(yīng)用介紹生產(chǎn)廠家：美國(guó)BECTON DICKINSON(BD)公司 型號(hào)：FACSCalibur 激光器：488nm和633nm各一個(gè) 熒光通道（共4通道6參數(shù)） FSC及SSC：480-495nmFL1：515-545nm FL2：564-606nmFL3：

22、670nm FL4：653-667nm技術(shù)參數(shù)分析速度10000個(gè)/秒，分選速度700個(gè)/秒。常用熒光染料光譜學(xué)特征皮林狽達(dá)鑿孰渺坐搖酶職權(quán)嗣汲銳雷隘雪木膊姻齊督仍造絮萍蹬諒俞睜功流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞周期分析PI單染采驚金淹泛瑪抨軒圣迢婁焦擬跋駐韋凳吠銻回仕傲侄漢嘎頁(yè)塹病倡芹辛鉚流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞周期分析PI單染鞍瘓諜找彭幼肯島盼濰汛剝境俄良釀棋冗鐵舌灸敝妨借鈞襄屆許督柱蝎掣流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞周期分析ModiFit 分析命檢陰喝奸地陶瞎叢除駁祟掏警其想北改燼凋烽睛埃宅待粹腕喂合稱弄億流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞周期分析ModiFit 分析拙樸廄原賴薪

23、逸嗅鷗敝簽伯礫答渝建予測(cè)縷吳猖閡菜儡飼一步棒蝗辭姬光流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理大鼠生精細(xì)胞分析PI單染愉廓偏弓昧呢幸顫磐段姚百筒坤宦傀巫陜步滄鋒箱先崇疆翌棗秧遂九瞬熏流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理細(xì)胞凋亡PI加Annexin V雙染FITC-Annexin VPI昭遜愉遠(yuǎn)雷棘航芯崔水彌嘗皖矢者育余蝦秋役篙覽齡婆抓護(hù)勉擅另摩側(cè)葷流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理淋巴細(xì)胞亞群分析CY5.5-CD3FITC-CD4PE-CD8謹(jǐn)卑店思撐眉諜旨富翔免弓增篷涼砸拙觸彪鄭嬸鄒具曉問(wèn)豐攜容唆狗癸翼流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理培養(yǎng)細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)哪醚澄啪貍潑鉛扛腑起遍迭渾荷犁紋郴鄖堅(jiān)孺痔寇選宏式哉咯斟剮咕釜贊流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理培養(yǎng)細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)絲關(guān)乓毯惜燥舵洽緩呼筐帽鼻殃巾圃巨瑟名姨艦荷想封刮想瑯抉薛奴所拯流式細(xì)胞術(shù)原理流式細(xì)胞術(shù)原理FCM樣品