11中藥分析與鑒定3班

1、誠(chéng) 信我，所呈交的（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或而使用過(guò)的材料。我承諾，（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、。（設(shè)計(jì)）作者（簽名）：年月日目錄摘要-1 前言02 儀器與材料22.1 儀器22.2 藥材與試劑23 方法33.1總黃酮含量測(cè)定方法33.2方法學(xué). 33.3單方法43.4中總黃酮提取的正交試驗(yàn)54 結(jié)果64.1 方法學(xué)結(jié)果64.2 單結(jié)果94.3總黃酮提取的正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果115. 125.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇：125.2 提取條件影響程

2、度分析125.3 顯色反應(yīng)分析136 結(jié)論13參考文獻(xiàn)14綜述16致謝23正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選中總黃酮的提取工藝研究摘要：目的 利用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選中總黃酮的提取工藝。方法 以蘆丁為對(duì)照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，用紫外分光光度法在 510nm波長(zhǎng)處測(cè)定總黃酮的含量。采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以中總黃酮含量為考察指標(biāo)，乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取溫度 4 個(gè)對(duì)中總黃酮中總黃酮的最佳提取工藝為 60%乙醇，70 倍量，80，的提取的影響。結(jié)果回流提取 2h。結(jié)論 經(jīng)試驗(yàn)證明，該提取工藝重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，易于操作，便于推廣，對(duì)進(jìn)一步的工藝開(kāi)發(fā)和中總黃酮的研究有較好的參考價(jià)值。：

3、；總黃酮；正交實(shí)驗(yàn)；紫外-可見(jiàn)分光光度法Study on Extraction Technology of Total Flavonoids inSyzygium jam(L.) Alston by Orthogonal DesignAbstract: Objective To optimize extraction technology of total flavonoids inSyzygium jam(L.) Alston. Methods The ultraviolet spectrootometry methodwas used to measure the total flavon

4、oids content in enol extract of Syzygiumjam(L.)Alstonwithdifferentpolarsolventextraction,withsodiumnitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxide as color reagent and the rutin as standardum absorption wave-length of 510nm. By L9(34) orthogonalsubstance and theexperimental design, with Syzygium jam(L.) A

5、lston, as index of total flavonoidswere investigated enol concentration, extraction time, enol dosage andextraction temperature four factors on the extraction total flavonoids in Syzygiumjam(L.) Alston. Results The optimum extraction pros total flavonoids inSyzygium jam(L.) Alston was 60% enol, 70 t

6、imes the amount of refluxextraction, 80, and 2h.Proven by the experiment, the extractiontechnology is well reproducible, accurate and reliable, easy to operate and spread. Ithas a great reference value to further development of the technology and the research of total flavonoids in Syzygium jam(L.)

7、Alston.Key words: Syzygium jam(L.) Alston; total flavonoids; orthogonalexperiment; UV-Vis spectrootometry1 前言屬常綠喬木1，收載(Syzygium jam(L.) Alston)為桃于省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第一冊(cè))，又有名稱(chēng)為水、響鼓、鈴鐺果、風(fēng)鼓和香果等，有此名稱(chēng)，是因?yàn)槠涔麑?shí)到成熟季節(jié)，會(huì)散發(fā)如玫瑰般的清新香味，同時(shí)果核可在果腔內(nèi)隨意滾動(dòng)，搖動(dòng)起來(lái)有響聲。原產(chǎn)于馬來(lái)群島、及我國(guó)的海南省，集中分布在亞洲熱帶地區(qū)，也有分布在亞洲帶至溫帶，以及大洋洲的部分地區(qū)。在我國(guó)現(xiàn)在主要分布于海南、廣東、廣西

8、、福建、云南和等地區(qū)，大半處于半野生狀態(tài)2。多生長(zhǎng)在陰濕之地，喜光喜陰，喜溫暖濕潤(rùn)的氣候，因此常生長(zhǎng)在小溪邊或者低濕的溝谷里；耐肥沃耐澇，不耐貧瘠干旱，因此濕潤(rùn)且肥沃的土壤較適宜其生長(zhǎng)。作用繁多，來(lái)源廣泛，資源甚多，且價(jià)廉易得。的根系發(fā)達(dá)，且生長(zhǎng)情況較好，因此具備強(qiáng)抗風(fēng)性，同時(shí)還具有抗二氧化硫、抗氯氣、抗機(jī)動(dòng)車(chē)尾氣、抗粉塵等功能，常用于園林綠化、防護(hù)植物。民間有將其采摘鮮食，有將其用于釀酒，有將其曬干制成涼茶。而在藥用方面，其作用也是不容小覷的，的藥用部位包括葉、干燥莖、花和果實(shí)。據(jù)相關(guān)資料研究記載，搗爛可以用來(lái)治療痘瘡，果實(shí)浸酒有安胎、止嘔之功效，可促進(jìn)胰島細(xì)胞再生而起作用，莖的藥效為溫中散

9、寒、溫肺止咳、降逆止嘔， 可用治療胃寒呃逆、肺虛寒咳等證3-6。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明莖提取物具有抗菌7,8、抗炎、鎮(zhèn)痛9、10和抗氧化11等作用，在臨床應(yīng)用中對(duì)于金黃色葡萄球菌、皮膚炎癥疼痛、等病癥的治療具有廣闊前景。黃酮類(lèi)化合物是廣泛存在于自然界的一大類(lèi)天然有機(jī)化合物，是植物在長(zhǎng)期自然選擇過(guò)程中產(chǎn)生的一類(lèi)次生代謝產(chǎn)物，是在體內(nèi)主要由莽草酸途徑和乙酸-丙二酸途徑生物的一類(lèi)產(chǎn)物。目前，黃酮類(lèi)化合物泛指兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)三個(gè)碳原子相互聯(lián)結(jié)形成的一系列化合物，它分布廣泛，主要存在于高等植物及羊齒植物的根、莖、葉、花、果實(shí)等中，其中以被子植物分布最多。黃酮類(lèi)化合物在植物體內(nèi)大半以與糖結(jié)為苷類(lèi)的形式存在，少部分

10、以游離形式存在。黃酮類(lèi)化合物具有許多重要的生理、生化作用清除生物體內(nèi)的基，具有抗氧化作用12，具有抗腫瘤、調(diào)血脂、抑制血小板、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗骨質(zhì)疏松等各種作用13-16。黃酮類(lèi)化合物的這些生理活性在抗衰老和預(yù)防治療人類(lèi)的腫瘤、心病等疾病這些方面具備重要意義。正交設(shè)計(jì)法是研究多多水平的一種設(shè)計(jì)方法，是試驗(yàn)優(yōu)化的一種常用技術(shù)。正交設(shè)計(jì)法建立在概率論、數(shù)量統(tǒng)計(jì)之上，運(yùn)用排列整齊的正交表安排試驗(yàn)方案，再經(jīng)過(guò)綜合比較和對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，達(dá)到減少試驗(yàn)次數(shù)而能快速獲得最優(yōu)試驗(yàn)方案的目的。正交設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單可行，數(shù)據(jù)點(diǎn)分布均勻，可減少不必要的人力物力財(cái)力等資源的浪費(fèi)，在現(xiàn)代泛17。工藝和提取工藝的研究

11、中應(yīng)用廣在對(duì)的研究中，與生理特性、栽培技術(shù)、引種情況、物種比較等方面相關(guān)的比較多，雖然已有文獻(xiàn)了屬植物中總黃酮的提取工藝研究，但其中莖提取工藝優(yōu)化研究仍是甚少。亮18等人研究以葉居多，具體到確定了海南黃酮的最佳提取條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1:20，提取溫度80，提取時(shí)間3h。由此可將其結(jié)果作為參考，對(duì)莖中總黃酮的提取條件進(jìn)行更進(jìn)一步的研究。在我國(guó)資源量巨大，用途眾多，是值得大力開(kāi)發(fā)的植物資源，且中草藥的具體化學(xué)成分提取、研究與應(yīng)用日益受到重視，國(guó)內(nèi)外開(kāi)發(fā)中草藥植物的力度也在不斷加大。近年來(lái)，植物藥以其天然低毒、來(lái)源豐富的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類(lèi)化合物更是以其廣譜的生理、藥理作用引人矚目

12、。因此，以黃酮類(lèi)化合物為活性成分的植物藥的開(kāi)發(fā)、研究和加工越發(fā)受到科學(xué)家們的重視。作為石岐涼茶的成分之一的，目前仍非常少以藥物的出現(xiàn)在市面上，由此可見(jiàn)，隨著該相關(guān)技術(shù)的日趨成熟，中的黃酮類(lèi)化合物的開(kāi)發(fā)利用更具有廣闊的前景。綜上所述，在我國(guó)資源豐富，藥用層面利用卻較少，本次實(shí)驗(yàn)研究可確定莖中總黃酮的最佳提取條件，為科學(xué)研究莖的藥理作用、研發(fā)相關(guān)藥物新劑型、推廣藥物的生產(chǎn)等提供可靠的數(shù)據(jù)。有效的提取方式是進(jìn)行其他研究的先決條件，本次研究有助于更進(jìn)一步對(duì)各相關(guān)資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。2 儀器與材料2.1 儀器名稱(chēng)來(lái)源UV1102 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)天美科學(xué)儀器KQ-500 型超聲波 CP225D 型電子天

13、平 AUY 型電子天平HH-S4 數(shù)顯恒溫水浴鍋KQ3200DE 型數(shù)控超聲波UV1102 紫外分光光度計(jì)器昆山市超聲儀器德國(guó)Sartorius 公司（中國(guó)）金壇市醫(yī)療儀器廠器昆山市超聲儀器天美科學(xué)儀器GZX-9246MBE 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱WS70-1 型紅外快速干燥器博迅實(shí)業(yè)醫(yī)療設(shè)備廠鞏義市予華儀器公司DFY-300 搖擺式高速萬(wàn)能機(jī)溫嶺市機(jī)械2.2 藥材與試劑名稱(chēng)來(lái)源蘆丁對(duì)照品批號(hào) 100080-201409，中國(guó)食品藥品檢定藥材3 批，由市益和堂制藥提供乙醇精細(xì)化工亞硝酸鈉市百世化工硝酸鋁市科密歐化學(xué)試劑氫氧化鈉廣州化學(xué)試劑廠超純水3 方法3.1總黃酮含量測(cè)定方法3.1.1 對(duì)照品溶

14、液的的取蘆丁對(duì)照品 6mg，精密稱(chēng)定，置于 20mL 容量瓶，加 70%乙醇溶液適量，振搖使其溶解，用 70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，蘆丁濃度為 0.3080mg/mL。同法配制對(duì)照品儲(chǔ)備液，蘆丁濃度為 2.920mg/mL。3.1.2 供試品溶液的取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精密稱(chēng)定，加 70%乙醇溶液 70mL，加熱回流提取 2h，提取液趁熱過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?70%乙醇溶液溶解，轉(zhuǎn)移至 25mL量瓶中，加 70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。3.2 方法學(xué)3.2.1 線性關(guān)系精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液I0.5、1.0、1.5、2.0 和 2.5mL，分別置于

15、 10mL 容量瓶中，加入 5%亞硝酸鈉溶液 0.5mL，6min 后，加入 10%硝酸鋁 0.5mL，6min后，再加入 4%氫氧化鈉 5mL，加入 70%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置 15min，作為對(duì)照品系列溶液，以不含蘆丁的空白溶液為參比，于 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品濃度(X)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)對(duì)照品吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.2.2 精密度試驗(yàn)取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精密稱(chēng)定，按“3.1.2”項(xiàng)下方備供試品溶液，精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，重復(fù)6次，分別測(cè)定其吸光度，計(jì)算吸光度的RSD。3.2.3 穩(wěn)定

16、性試驗(yàn)取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精密稱(chēng)定，按“3.1.2”項(xiàng)下方備供試品溶液，精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，分別在0、0.5、1.0、1.5、2.0和2.5h時(shí)，測(cè)定其吸光度，計(jì)算吸光度的RSD。3.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精密稱(chēng)定，按“3.1.2”項(xiàng)下方備供試品溶液6份，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮含量的平均值和RSD。3.2.5 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的供試品粉末(總黃酮的含量為5.888mg/g)9份，每份約0.5g，精密稱(chēng)定，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0和1.5mL，按“3

17、.1.2”項(xiàng)下方法操作，供試品溶液，每個(gè)濃度3份，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮的平均回收率和RSD。3.2.6 樣品含量測(cè)定取3個(gè)不同批次，每批次三份的密稱(chēng)定，按“3.1.2”項(xiàng)下方法操作，粉末（過(guò)三號(hào)篩）共9份，每份1.0g，精供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度值，計(jì)算每批次含量及其RSD。中總黃酮的3.3 單方法3.3.1 乙醇濃度對(duì)提取的影響取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精確稱(chēng)定，共5份，分別加入50%、60%、70%、80%和90%乙醇溶液，按“3.1.2”項(xiàng)下方備供試品溶液，分別精

18、密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮的含量，繪制相關(guān)折線圖。3.3.2 提取時(shí)間對(duì)提取的影響取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精確稱(chēng)定，共5份，分別加入70%乙醇溶液50mL，加熱回流提取時(shí)間分別為1.0、1.5、2.0、2.5和3.0h，其余操作按“3.1.2”項(xiàng)下方備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮的含量，繪制相關(guān)折線圖。3.3.3 料液比對(duì)提取的影響取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精確稱(chēng)定，共5份，分別加入70%乙醇溶液50mL、60mL、70mL、80mL和90mL，其余操作按“3.1.2”

19、項(xiàng)下方備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮的含量，繪制相關(guān)折線圖。3.3.4 提取溫度對(duì)提取的影響取粉末(過(guò)三號(hào)篩)1.0g，精確稱(chēng)定，共5份，按“3.1.2”項(xiàng)下方法操作，提取溫度分別設(shè)在60、70、80和90，供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算總黃酮的含量，繪制相關(guān)折線圖。3.4中總黃酮提取的正交試驗(yàn)總黃酮的性質(zhì)，了乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取溫度4根據(jù)個(gè)，并結(jié)合以上單試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置43水平正交試驗(yàn)見(jiàn)表1，根據(jù)因總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。正交試

20、驗(yàn)素水平表，以數(shù)據(jù)處理采用正交試驗(yàn)直觀分析法，統(tǒng)計(jì)不同水平下提取出中總黃酮含量的平均含量，以極差R進(jìn)行分析。表1 正交優(yōu)選水平乙醇濃度(A)(%)提取時(shí)間(B)(h)料液比(C)(g:mL)提取溫度(D)()水平1236070801.522.51:601:701:807080904 結(jié)果4.1 方法學(xué)結(jié)果4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立對(duì)照品溶液于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度結(jié)果見(jiàn)表2，以對(duì)照品濃度(X)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)對(duì)照品吸光度值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制而成的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=9.600 10-3X-1.030 10-2(r=0.9998)(r0.9990)，見(jiàn)圖1 。結(jié)果表明，蘆丁在15.407

21、7.00g/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。表2總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果濃度(g/mL)吸光度15.4030.8046.2061.6077.000.1380.2860.4330.5750.732圖 1 含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線4 1儀密試試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，吸光度的RSD為0.12%。結(jié)果表明，所使用儀器精密度良好。表3 儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）吸光度值平均值RSD（%）1234560.4460.4470.4460.4470.4460.4460.4460.124試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，吸光度的RSD為0.48%。結(jié)果表明，此樣品于室溫條件下放置2.5h內(nèi)穩(wěn)定。表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）時(shí)間（h）吸光度

22、值平均值RSD（%）00.51.01.52.02.50.4500.4470.4510.4510.4460.4480.4490.484.1.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5，吸光度的RSD為0.77%。結(jié)果表明，此方法重復(fù)性良好。表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）總黃酮含量（mg/g）平均值（mg/g）RSD（%）吸光度值1234560.4500.4400.4460.4480.4420.4395.9645.8525.8885.9265.8785.8445.8920.774.1.5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 6，計(jì)算得出總黃酮的平均回收率為 99.4%，RSD 為 1.4%。符合分析要求。表6 加

23、樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=3)稱(chēng)樣量(g)測(cè)得量(mg)原含量(mg)加入量(mg)平均回收(%)RSD(%)低0.50010.50040.50020.50010.50030.50070.50040.50050.50034.3924.3534.4185.8375.8895.8767.2837.2707.3352.9452.9462.9452.9452.9462.9482.9462.9472.9461.4471.4071.4732.8932.9442.9284.3364.3234.38998.82.3中100.00.89高99.30.814.1.6 樣品含量測(cè)定結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 7，3 個(gè)不同批次

24、的 RSD 分別為 0.55%、0.49%、1.1%，符合分析要求。表7 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)批次稱(chēng)樣量（g）吸光度值總黃酮含量（mg/g）平均值（mg/g）RSD（%）11.0021.0011.0020.4470.4420.4445.9255.8785.8635.8880.5521.0021.0031.0020.5880.5950.5917.7647.8427.8147.8080.4931.0011.0021.0000.5240.5320.5216.9507.0196.8706.9461.14.2 單結(jié)果4.2.1 乙醇濃度影響結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表 8，圖 2，總黃酮提取含量隨溶劑濃度增加而

25、變化，60%70%乙醇溶液提取出的總黃酮含量最大。表 8 乙醇濃度的選擇乙醇濃度(%)總黃酮含量（mg/g）1234550607080905.3215.5326.1855.6235.301圖 2 乙醇濃度對(duì)提取的影響4提取時(shí)結(jié)果見(jiàn)表 9，圖 3，其他取率逐漸增加，1.5h2.5h 為不變，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，總黃酮的提總黃酮的最佳提取時(shí)間范圍。表 9 提取時(shí)間的選擇提取時(shí)間(h)總黃酮含量（mg/g）123451.01.52.02.53.05.9056.0146.3276.3526.365圖 3 提取時(shí)間對(duì)提取的影響4料液結(jié)果見(jiàn)表 10，圖 4，料液比對(duì)劑體積的變化而變化，1:601:80 為總黃

26、酮的提取效率的影響隨著提取溶總黃酮最佳提取料液比范圍。表 10 料液比的選擇料液比總黃酮含量（mg/g）123451:501:601:701:801:905.5945.7536.1076.0015.729圖 4 料液比對(duì)提取的影響44 提取影結(jié)果見(jiàn)表 11，圖 5，隨著提取溫度的升高，總黃酮的提取率逐漸增加，7090為總黃酮的最佳提取溫度范圍。表 11 提取溫度的選擇提取溫度()總黃酮含量（mg/g）1234607080905.2955.4026.0426.352圖 5 提取溫度對(duì)提取的影響4.桃總提取正交優(yōu)選果根據(jù)總黃酮的性質(zhì)，了乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取溫度4，并結(jié)合以上單試驗(yàn)結(jié)果，

27、設(shè)置43水平正交試驗(yàn)見(jiàn)表1，根據(jù)因個(gè)總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。正交試驗(yàn)素水平表，以數(shù)據(jù)處理采用正交試驗(yàn)直觀分析法，統(tǒng)計(jì)不同水平下提取出總黃酮含量的平均含量，以極差R進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表12。表 12 正交試驗(yàn)結(jié)果分析乙醇濃度(%)提取時(shí)間(h)料液比(g:mL)提取溫度()總黃酮含量(mg/g)試驗(yàn)號(hào)123456789K1 K2 K3K1 平均值K2 平均值K3 平均值極差11122233317.6415.9015.835.8805.3005.2770.60312312312315.9717.2216.185.3235.7405.3930.41712323131216.

28、5916.4516.785.5305.4835.5930.11012331223114.7717.4317.174.9235.8105.7230.8875.0516.4596.1345.3715.1015.4255.5475.6624.612極差R的結(jié)果表明，乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取溫度4對(duì)總黃酮提取含量的影響的顯著性為：提取溫度乙醇濃度提取時(shí)間料液比。蒲桃總黃酮加熱回流提取的最優(yōu)水平搭配為A1B2C2D2，即乙醇濃度為60%，提取時(shí)間為2h，料液比1:70，提取溫度80為中總黃酮的最佳提取工藝。在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)值為6.499mg/g，RSD為0.35%，符合方法優(yōu)選出

29、來(lái)的工藝條件準(zhǔn)確可靠。值，說(shuō)明該55.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇：取對(duì)照品溶液經(jīng)顯色處理后，以不含蘆丁的空白溶液為參比，將待測(cè)液比色皿中，置于比色池中，在200600nm波長(zhǎng)段掃描測(cè)定最大吸收度，結(jié)果顯示，對(duì)照品及供試品均在510nm處有最大吸收，故選擇510nm為測(cè)定波長(zhǎng)。5.2 提取條件影響程度分析5.2.1 溶劑濃度的影響提取黃酮類(lèi)化合物的乙醇液濃度一般在60%95%之間，60%左右濃度的乙醇溶液適合提取黃酮苷類(lèi)，90%95%的乙醇溶度適于提取游離黃酮。故本次實(shí)驗(yàn)中采取了50%、60%、70%、80%、90%五個(gè)梯度濃度，由實(shí)驗(yàn)中可看出隨著乙醇濃度的上升，提取出來(lái)的黃酮量先上升后下降。實(shí)驗(yàn)中

30、所出現(xiàn)的乙醇液濃度增大導(dǎo)致黃酮提取量減小的現(xiàn)象，可能是因?yàn)榇嬖诓糠执既苄噪s質(zhì)有關(guān)。隨著乙醇液濃度增大，這部分雜質(zhì)溶出率也增大，與黃酮類(lèi)化合物競(jìng)爭(zhēng)，并且和乙醇-水分子進(jìn)行結(jié)合，使得黃酮類(lèi)化合物溶出減少。5.2.2 提取時(shí)間的影響由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，總黃酮的提取量呈現(xiàn)先陡然上升后平緩上升的趨勢(shì)，從2h后總黃酮的提取量增加量微乎其微，提取率趨于穩(wěn)定。綜合耗時(shí)長(zhǎng)短、經(jīng)濟(jì)利益、資源耗費(fèi)量等多方面，可確定1.5h2.5h為理想的提取時(shí)間范圍。5.2.3 料液比的影響料液比，指固態(tài)的“料”的質(zhì)量與作為浸提液的“液”的體積的比。本次實(shí)驗(yàn)中料液比的為g/mL，總黃酮的提取率隨著所用提取溶劑體積

31、的增大先增大后減小，料液比太大時(shí)，可能由于乙醇濃度大而產(chǎn)生如“5.2.1”項(xiàng)中所述情況，導(dǎo)致黃酮溶出率減小。5.2.4 提取溫度的影響區(qū)間設(shè)置為6090。單將提取溫度的結(jié)果顯示，一定范圍內(nèi)提高溫度，可以促進(jìn)中總黃酮溶出，在此區(qū)間內(nèi)，提取率與溫度成正比。5.3 顯色反應(yīng)分析本實(shí)驗(yàn)利用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮過(guò)程中，采用比色法，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，在提取液中加入亞硝酸鈉與硝酸鋁后,亞硝酸鈉起還原作用，被還原的黃酮類(lèi)化合物再與鋁鹽生成絡(luò)和物,最后加入氫氧化鈉溶液，生成2-羥基查耳酮使提取液顯色,從而可在510nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)吸收峰，進(jìn)行含量測(cè)定。這種顯色的化合物不穩(wěn)定,在實(shí)驗(yàn)操作中可

32、以明顯感受到這個(gè)特性，因此，實(shí)際操作中，應(yīng)該安排好實(shí)驗(yàn)步驟與操作時(shí)間，盡量在相同實(shí)驗(yàn)條件、相同環(huán)境條件下，且在短時(shí)間內(nèi)快速測(cè)出吸光度,這樣才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確度.6 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用乙醇液加熱回流提取方法對(duì)中的總黃酮進(jìn)行提取，選用蘆丁作為對(duì)照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，用紫外分光光度法在510nm處測(cè)定所提取的總黃酮的含量。實(shí)驗(yàn)中采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取溫度4個(gè)中總黃酮含量為指標(biāo)，乙對(duì)提取的影響，結(jié)果可看出4個(gè)因總黃酮提取含量的影響的顯著性為：提取溫度乙醇濃度提取時(shí)間料液比。由正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選出來(lái)的總黃酮加熱回流提取最佳提取條件為：乙醇濃度為60%

33、，提取時(shí)間為2h，料液比1:70，提取溫度80。該方法優(yōu)選出來(lái)的工藝簡(jiǎn)單易操作，穩(wěn)定性好，經(jīng)濟(jì)可行，便于推廣使用。在實(shí)際生產(chǎn)中，同時(shí)也要考慮溶劑消耗，濃縮回收溶劑的耗能等，根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整工藝。參考文獻(xiàn)1中國(guó)中國(guó)植物志編輯.中國(guó)植物志：第五十三卷：第一分冊(cè)M.:科學(xué)，1984：68.23.熱帶帶果樹(shù)J.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)，2006，（02）：43.J.園林，2007，29（3）：翁、海南、洋79-80.省食品藥品監(jiān)督管理局.4省中藥材標(biāo)準(zhǔn):第一冊(cè)M.廣州：科技，2004：200.56J.廣西植物， 2012,（04）：155.溫放，.帶優(yōu)樹(shù)種J.福建熱作科技,1992,（03-04）：48.7

34、Djipa CD,Delmee M, Quetin-Leclercq J. Antimicrobial activity of bark extracts ofSyzygium jam(L.)alston (Myrtaceae)J.Ethnoarmacol, 2000，71(1/2):307.8 Murugan S,Devi P,Parameswari NK,etal. Antimicrobial activity of Syzygiumjam9 Aviljam10against pathogensJ.Jarm Sci,2011,3（2）：44.nena N,Quero L,etal.Anti

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36、究J.食品科學(xué)，2008，（02）：383-386.13延璽，等.黃酮類(lèi)化合物生理活性及研究進(jìn)展J.有機(jī)化學(xué)，2008，28（09）：1534-1544.14楊，.植物黃酮的抗腫瘤作用及構(gòu)效關(guān)系的研究進(jìn)展J.中醫(yī)， 2011，29（9）：35-38.15，李，等.黃酮類(lèi)稀土配合物抗骨質(zhì)疏松癥應(yīng)用展望J.時(shí)針國(guó)醫(yī)，2012，23（06）：1503-1504.16，張揚(yáng)，等.黃酮類(lèi)調(diào)節(jié)脂肪平衡與降低心疾病發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展J.正交設(shè)計(jì)法在藥物農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（09）：5259-5351.工藝研究中的應(yīng)用J.齊魯藥事， 2011，17（11）：668-669.18亮，鴻,汪，等.海南葉黃酮的

37、提取及抗氧化性研究J.生物質(zhì)化學(xué)工程，2010，44（2）：27-30.綜述中總黃酮的研究?jī)r(jià)值1的基本信息屬桃屬，為常綠喬木或小喬木。別名有水、香果、響鼓、風(fēng)鼓和鈴鐺果。原產(chǎn)于、馬來(lái)群島和菲律賓等地，在我國(guó)的栽種歷史頗為悠久。集中分布在亞洲帶，我國(guó)境內(nèi)主要包括海南、廣西、福建、云南等地。喜溫暖多濕的氣候，喜光耐陰；喜濕潤(rùn)，常生長(zhǎng)在溪邊或溝谷低濕的地方，耐陰濕耐澇，不耐干旱，比較適宜生長(zhǎng)在肥沃濕潤(rùn)的酸性土壤或沖積土上1-3。具有多領(lǐng)域作用可制成果膏、果餞；可研制成為花茶；入藥，是沙溪涼茶的主要成分之一，有抗菌4， 5、抗其果實(shí)、炎6、莖7和抗氧化8等作用；其次還可用于園林綠化或作為觀賞植物2。2

38、的化學(xué)成分2.1 揮發(fā)油類(lèi)揮發(fā)油的化學(xué)成分在不同部位中存在差異，莖中主要為酸類(lèi)化合物，而花為單萜、倍半萜、及其二者的氧化物。其中含量最高的成分為丁香烯-5-醇，而花莖中的揮發(fā)油主成分均為十六酸9。2.2 黃酮類(lèi)10使用破碳電極，值為4.0的磷酸鹽緩沖溶液，差分脈沖法對(duì)的蘆丁含量進(jìn)定，測(cè)得蘆丁質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.7mg/g，另外采用分光光度法測(cè)得的黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.5mg/g。2.3 三萜類(lèi)化合物都11在莖化學(xué)成分研究中，分離得到6個(gè)三萜酸類(lèi)化合物，對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別分析后，結(jié)果找到5個(gè)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)（除了麥珠子酸），并且結(jié)果表明蒲桃莖乙酸乙酯提取物的主成分之一是三萜酸類(lèi)化合物。此外，中還有其他化學(xué)成分，

39、如鞣酸類(lèi)，以及其他含量較少的成分。3的藥理作用3.1 抗氧化12對(duì)海南、果實(shí)中的原花青素進(jìn)行體外抗氧化活性的相關(guān)藥理研究，通過(guò)分析研究海南原花青素分別對(duì) DP基、超氧陰離子自由基、羥基和亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化半抑制劑量，得出海南原花青素總抗氧化、還原力明顯高于 VC、金屬離子螯合力高于 EDTA 的結(jié)論。由此表明海南蒲桃原花青素具有較強(qiáng)的清除基與抗氧化活性等體外生物活性。3.2邱雪蓮7等人用海南籽提取物以不同劑量連續(xù) 15d 對(duì)自發(fā)性 2 型KK/4pj-Ay/J 小鼠灌胃給藥，結(jié)果試驗(yàn)組小鼠的空腹血糖和糖耐量得到顯著改善，而對(duì)小鼠體重影響不大。3.3 抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛Djipa CD4等人采用瓊脂

40、稀釋法對(duì)樹(shù)皮提取物的抗菌活性進(jìn)行體外測(cè)試，他們研究發(fā)現(xiàn)樹(shù)皮提取物對(duì)于抑制金黃色葡萄球菌尤其有效，對(duì)凝固酶葡萄球菌也有一定作用，由此證明了樹(shù)皮提取物具有抗菌活性。D. vila, N. Pea6等人對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行皮下注射，通過(guò)熱板試驗(yàn)、福爾試驗(yàn)和握力試驗(yàn)，分別評(píng)估提取物對(duì)熱刺激性皮膚疼痛、炎癥性皮膚疼痛和肌肉疼痛的鎮(zhèn)痛效果，研究證明提取物能對(duì)皮膚疼痛產(chǎn)生一個(gè)持久的鎮(zhèn)痛效果，可媲美于。對(duì)炎癥性皮膚疼痛，其療效高于抗炎藥雙氯芬酸。在對(duì)抗肌肉疼痛方面，正常情況下并沒(méi)有明顯改變，但對(duì)于炎癥引起的肌肉疼痛，蒲桃提取物可顯著降低肌肉痛覺(jué)敏感度。由此表明了提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用。4的用途4.1 食用果實(shí)

41、為核果狀漿果。果肉呈白色，味酸甜，水分較少，可供鮮食、制果膏果醬、制蜜餞等，果汁經(jīng)發(fā)酵后還可制成飲料。此外，始花期為 2 月，盛花期 5 月份，6 月底為末期，但 7 月到 12 月仍保持開(kāi)放少量花。可見(jiàn)花期長(zhǎng)且花量大，因此市場(chǎng)上又用花窨制低檔烏龍茶，制成花茶；且花花粉花蜜均較多，香氣濃，又可成為良好的蜜源1,2,13。4.2 藥用與崗梅、鐵等共同組成石岐外感涼茶，具有疏風(fēng)清熱、解暑消食、冒14。鎮(zhèn)咳等功效，臨床用于治療外感發(fā)熱、頭痛、咳嗽等癥狀和預(yù)防流行具有抗炎抗菌等功效，可用于治療痘瘡、腸炎、痢疾。提取物具有降低血糖之功效，可用于治療。果肉可治呃逆不止，肺胃虛寒所致咳嗽。海南蒲提取物對(duì) L

42、6 細(xì)胞砷療當(dāng)中15。有緩解作用，可考慮將其應(yīng)用到砷的治4.3 園林應(yīng)用屬植物，桃，常綠喬木或灌木，樹(shù)形優(yōu)美，樹(shù)冠茂密，生長(zhǎng)快速，根系發(fā)達(dá)，具有強(qiáng)抗二氧化硫能力，可抗污染、防風(fēng)，是良好的園林綠化樹(shù)種，且其枝繁葉茂，花香淡雅，亦可作為園景觀賞植物3。5 黃酮的藥理作用據(jù)各種文獻(xiàn)及相關(guān)資糧記載，黃酮作為一類(lèi)低分子的天然活性物質(zhì)，具有對(duì)意義的多種生理活性。16等人使用四種不同濃度的異黃酮溶液進(jìn)行對(duì)豬油的抗氧化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)表明，異黃酮具有清除羥基、超氧陰離子基等作用，并且異黃酮中所含羥基個(gè)數(shù)及羥基位置的差異可能會(huì)影響其抗氧化能力。黃酮具有抗腫瘤功效，可通過(guò)從多方面作用于腫瘤細(xì)胞而起到抑制腫瘤發(fā)生、增殖、

43、遷移、侵襲等效果，包括抑制細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和影響細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)等17。黃酮類(lèi)物質(zhì)對(duì)心系統(tǒng)也有明顯的作用，其藥理作用主要有抑制血小板功能以減少血小板，降低甘油三酯、低密度脂蛋白等以調(diào)節(jié)血脂水平，防止過(guò)氧化的低密度脂蛋白損傷細(xì)胞，和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等方面18。此外，黃酮類(lèi)化合物的共同藥理作用還有抗炎、抗、抗骨質(zhì)疏松等19,20。6 黃酮的提取方法黃酮類(lèi)化合物存在植物體內(nèi)種類(lèi)繁多，狀態(tài)不一，其對(duì)應(yīng)的提取方法也各式各樣，有溶劑提取法、超聲提取法、超濾法、超臨界流體萃取法、酶解法、微波提取法、大孔樹(shù)脂吸附法等21-23。6.1 溶劑提取法水提法由于提取效率差，雜質(zhì)多，后處理繁雜，故不常用。常用的提

44、取溶劑為甲醇和乙醇，而由于乙醇無(wú)毒安全性高，實(shí)際生產(chǎn)和研究中往往更傾向于乙醇。極性小的溶劑，如氯仿、乙醚等和高濃度的醇（90%95%）更適于提取苷元；苷類(lèi)宜用極性較大的溶劑提取，如甲醇、乙醇、等，醇濃度為 60%左右為宜。6.2 超聲提取法超聲波提取原理是利用超聲波在液體中產(chǎn)生“空穴作用”，破壞植物細(xì)胞和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而增加細(xì)胞內(nèi)容物通過(guò)細(xì)胞膜的能力，有助于黃酮類(lèi)化合物的與溶出。超聲波提取操作極其簡(jiǎn)便，設(shè)備裝置簡(jiǎn)單，無(wú)需另置加熱，提取效率高，可以避免高溫對(duì)提取成分的破壞。6.3 微波提取法微波提取法是利用微波（頻率在 300300,000MHz 之間的電磁波）的高頻電磁波提取介質(zhì)，加速被提取成

45、分向提取溶劑界面的擴(kuò)散速率，縮短提取組分分子的擴(kuò)散時(shí)間，提高提取速率。微波提取法環(huán)保、提取率高、速度快、節(jié)省溶劑、副產(chǎn)物少，可對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究，擴(kuò)大其在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用。6.4 超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法常使用CO2作為溶劑，其原理是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系，即利用壓力和溫度對(duì)超臨界流體溶解能力的影響而進(jìn)行的。在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小的成分依次萃取出來(lái)。CO2 穩(wěn)定、安全性高、無(wú)毒、來(lái)源廣，該提取方法萃取速度快、效率高、且沒(méi)有溶劑殘留存在，屬于先進(jìn)高效的新生技術(shù)，但是技術(shù)要求高、價(jià)格昂貴，目前還難以投

46、入到實(shí)際大規(guī)模生產(chǎn)中。7中總黃酮的研究展望雖在傳統(tǒng)使用中歷史悠在食用及園林綠化應(yīng)用中較為常見(jiàn)，在民間使用頻率也不低，但其并未編入中民藥典當(dāng)中，在臨床藥物應(yīng)用中頻率低、范圍窄，沒(méi)有得到很好的推廣使用。一直以來(lái)對(duì)的研究處于不溫不火的層面，至今還沒(méi)有形成一個(gè)全面系統(tǒng)的研究成果。但也可以看到，近幾年國(guó)內(nèi)外對(duì)的藥理作用、化學(xué)成分鑒定、提取方法等方面的研究也在不斷深入。隨著化學(xué)用藥副作用多、開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng)、用藥相對(duì)昂貴等缺點(diǎn)的日益顯現(xiàn)，經(jīng)濟(jì)、來(lái)源廣、純天然的中藥藥物日益受到青睞。在我國(guó)資源豐富，價(jià)廉易得，且安全性高，而黃酮類(lèi)化合物具有多種對(duì)有利的生理活性，提取較易，且研究程度較高，因此，對(duì)中的總黃酮進(jìn)行研究開(kāi)發(fā)利用具備一定的可行性和經(jīng)