土壤酸性磷酸酶活性測定方法

1、土壤酸性磷酸酶活性的測定原理該方法以對硝基苯磷酸二鈉（即pNPP）為基質(zhì)，基質(zhì)在土壤酸性磷酸酶的催化下水解生成 黃色色的對硝基苯酚（即pNP），該黃色溶液在410nm處有最大吸收光值，根據(jù)對硝基苯酚 的生成數(shù)量與黃色溶液的吸光度呈正比來進行定量分析，以此來反映土壤酸性磷酸酶的活 性，采用的是對硝基苯磷酸二鈉比色法。測定方法稱取壤土 0.2g、砂土 0.5g、粘土 0.1g風干土于10mL離心管中，加入0.2 mL甲苯和4 mL ph6.5磷酸緩沖液，再加1 mL 0.05 mol/L對硝基苯磷酸二鈉溶液（用磷酸緩沖液配制）， 搖勻后加蓋，放進3637C的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)1個小時；培養(yǎng)完成后取出

2、加入0.5 mol/L的CaCl2 1 mL及0.5 mol/L的NaOH 4 mL，搖勻；而后在2500r/min下離心5min；取上層清夜于10ml離心管4000r/min下再離心5min.取上清液在410 nm處比色，并記錄吸收光值。標準曲線的制作取13支玻璃試管，按順序編號，并按表2加入試劑。表2對硝基苯酚標準曲線配制表離心管號0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、0.005?mol/mLpNP (mL ) 0、10、0.01、11、0.02、120.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.080.09H2O (mL )0.8、0.100.79、0.110.78、0.120

3、.77、0.76、0.75、0.74、0.73、0.720.71pNP 的含量(?mol)0、0.700.00005、0.690.0001、0.680.00015、0.0002、0.00025、0.0003、0.00035、 0.00040.000450.0005搖勻0.2mol/LpH6.5 磷酸緩沖液(mL)0.5mol/L CaCl2 (mL)0.5mol/L NaOH (mL)混勻后，轉(zhuǎn)入10mL的離心管中，0.000550.0006414在2500r/min下離心5min，再在4000r/min下離心5min以0號作為對照，在A410nm波長下測光吸收值，并記錄光吸收值A(chǔ)410。以吸光值為橫坐標、對硝基苯酚的含量為縱坐標計算直線回歸方程y=a+bx及相關(guān)系 數(shù)R，即對硝基苯酚含量n （?mol） =a+bX A410.計算方法土壤酸性磷酸酶的活性用每克土中的對硝基苯酚的微克數(shù)表示，即（?g/ h g W） =nXMX稀 釋倍數(shù)/ （WXt）式中：n一標準曲線上查得樣品中對硝基苯酚的濃度（?mol）；