植物組織培養(yǎng) 論文

1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)【摘要】植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細胞具有全能性這個理論，近幾十年來發(fā) 展起來的一項無性繁殖的新技術(shù)。我分別從植物組織的培養(yǎng)方法、 植物組織培養(yǎng)步驟、植物組織培養(yǎng)的優(yōu)點來學習植物組織培養(yǎng)技 術(shù)?！娟P(guān)鍵詞】植物組織培養(yǎng)、離體培養(yǎng)、試管苗、培養(yǎng)基植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細胞具有全能性這個理論，近幾十年來發(fā)展起來 的一項無性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離 出符合需要的組織.器官或細胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件 下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。一、植物組織的培養(yǎng)方法1、非試管微組織快繁非試管微組織快繁技術(shù)是將

2、外植體（一般要求帶一葉一芽）放置在室 內(nèi)外普通沙子培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，利用植物腋芽自然倍增達到快速繁殖的 目的。一般植物715天可以生長出根系。此技術(shù)投資低，操作環(huán)節(jié)少。2、試管組織培養(yǎng)試管組織培養(yǎng)是將外植體（即離體組織、器官或細胞）放置在試管等 器皿中在無菌的條件下進行組織培養(yǎng)獲得試管苗。二、植物組織培養(yǎng)步驟1、培養(yǎng)材料的采集要根據(jù)培養(yǎng)目的適當選取材料，選擇原則：易于誘導、帶菌少。要選 取植物組織內(nèi)部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取 有傷口的或有病蟲的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料， 決不要在雨天、陰天或露水未十時取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼 吸旺盛的組

3、織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。培養(yǎng)材料的消 毒從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些 污染源一旦帶人培養(yǎng)基，便會造成培養(yǎng)基污染。因此，植物材料必須經(jīng)嚴 格的表面滅菌處理，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。（一）試劑：乙醇、吲哚乙酸（IAA）或2 , 4 - D （生長素類 似物）、氯化汞（升汞）或次氯酸鈉、6-芐基氨基腺嘌吟（6-BA ） MS培 養(yǎng)基、0.1 mol/L NaOH 與 0.1 mol/L HCl（二）配制培養(yǎng)基（1 ）愈傷組織誘導培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基（蔗糖含量為10 g/L , 2,4 -D含量為2 mg/L，瓊脂10 g/L ）。（2 ）試驗培養(yǎng)

4、基：在 MS培養(yǎng)基中加入IAA和6 - BA。吲哚乙酸（IAA）先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6-芐基氨基腺嘌 吟先用少量0.1 mol/L HCl溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。（三）儀器設備培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（100mL ），燒杯， 量筒，培養(yǎng)皿，棉線，接種箱或超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀， 容量瓶，移液管，牛皮紙。（四）培養(yǎng)基滅菌將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至pH 5.8，趁熱分裝于100 mL 三角燒瓶中，每瓶約20 mL。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，用一層稱量紙和一層 牛皮紙包扎瓶（管）口，并用棉線扎牢，然后在高壓滅菌鍋中121 C

5、（ 1kg/cm 2 ）下滅菌20 min。取出三角燒瓶放在臺子上，冷卻后備用。接 種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時 滅菌。2、培養(yǎng)材料的消毒（一）先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或 吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。（二）在無菌壞境中將材料放入70%酒精中浸泡30-60秒。（三）再將材料移入漂白粉的飽和液或0.01%升汞水中消毒10分鐘。（四）取出后用無菌水沖洗三、四次。3、制備外植體將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、 嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2-0.5厘米厚的

6、小片， 這就是外植體。在操作中嚴禁用于觸動材料。4、接種和培養(yǎng)（一）接種在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種4-10個。（二）封口接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無菌膠帶封口。（三）溫度培養(yǎng)基大多應保持在25C左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別 對待。（四）增殖外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數(shù)，需 要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng) 基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個月左右后，可視情況進行再增殖。（五）根的誘導繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進行 生根培養(yǎng)。1

7、個月后即可獲得鍵壯根系。5、組培苗的練苗移栽試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進入自然環(huán)境，必須進行煉苗。一 般移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自 來水把根系上的營養(yǎng)基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消 毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98% 左右），但基質(zhì)不宜過濕，以防爛苗。三、植物組織培養(yǎng)的優(yōu)點1、占用空間小，不受地區(qū)、季節(jié)限制。2、培養(yǎng)脫毒作物。3、培養(yǎng)周期短。4、可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化制品。5、可短時間大量繁殖，用于拯救瀕危植物。6、可誘導之分化成需要的器官，如根和芽。7、解決有些植物產(chǎn)種子少或無的難題。8、不存在變異，可保持原母本的一切遺傳特征。9、投資少，經(jīng)濟效益高。10、繁殖方式多，試用品種多。近50年來，植物組織培養(yǎng)已滲透到生物學的各個領(lǐng)域，廣泛應用于農(nóng)業(yè)、 醫(yī)藥業(yè)、林業(yè)和工業(yè)，并產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益和社會效益，成為生物學的重要 研究技術(shù)和當代生物科學