志賀氏菌的檢驗(yàn)

1、志賀氏菌的檢驗(yàn)(jinyn) 1、志賀氏菌的生物學(xué)性狀(xngzhung) 2、志賀氏菌的流行病學(xué) 3、志賀氏菌的致病性 4、志賀氏菌的檢驗(yàn)共三十八頁一、志賀氏菌的生物學(xué)特性(txng)志賀氏菌屬（Shigella） 的細(xì)菌（通稱痢疾桿菌），是細(xì)菌性痢疾的病原菌人類對(duì)痢疾桿菌有很高的易感性。在幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志賀氏菌和大腸桿菌都屬于腸桿菌科，根據(jù)DNA雜交研究結(jié)果表明，志賀氏菌屬的四個(gè)種和大腸桿菌屬在生化(shn hu)上是難以區(qū)分的，因?yàn)橛挟a(chǎn)氣的志賀氏菌，也有乳糖陰性、不產(chǎn)氣、不運(yùn)動(dòng)的大腸桿菌，有些大腸桿菌也能引起痢疾狀的腹瀉。共三十八頁腸桿菌科中常見各屬細(xì)菌(xjn)

2、腸桿菌科共同特性，都是革蘭氏陰性小桿菌，好氧或兼性厭氧，沒有芽孢。 屬 代表種 致病性 埃希氏菌屬 大腸埃希氏菌 腸道外感染， 急性腹瀉志賀氏菌屬 痢疾志賀氏菌 細(xì)菌性痢疾愛德華氏菌屬 遲純愛德華氏菌 蛇類等血?jiǎng)游锏恼Ｄc道寄居菌 偶見于健康人或腹瀉者糞便內(nèi)沙門氏菌屬 傷寒沙門氏菌 腸熱癥、急性腸炎、敗血癥枸櫞酸桿菌屬 弗勞地氏枸櫞酸桿菌 條件致病菌，引起繼發(fā)性感染克雷伯氏菌屬 肺炎克雷伯氏菌 肺炎，泌尿系、創(chuàng)傷感染 敗血癥等 腸桿菌屬 產(chǎn)氣桿菌 很少引起原發(fā)性感染哈夫尼亞菌屬 蜂窩啥夫尼亞菌 對(duì)人無致病性沙雷氏菌屬 粘質(zhì)沙雷氏菌 件致病菌，引起泌尿系 呼吸道及創(chuàng)傷感染 變形桿菌屬 通變形桿菌

3、 食物中毒，泌尿系、呼吸道感染 等耶爾森氏菌屬 鼠疫(shy)耶爾森氏菌 鼠疫(shy)歐文氏菌屬 草原居民歐文氏菌 植物寄生菌 從人體腸道及化膿扁桃體中分離到共三十八頁1、志賀氏菌的形態(tài)學(xué)特征(tzhng)：志賀氏菌屬細(xì)菌的形態(tài)與一般腸道桿菌(gnjn)無明顯區(qū)別，為革蘭氏陰性桿菌，長約2-3 m ,寬0.5-0.7 m 。不形成芽胞，無莢膜，無鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，有菌毛。共三十八頁 革蘭氏染色法 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)廣泛(gungfn)使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。 ）涂片固定。）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。）自來水沖洗。）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。）水洗，用吸水紙吸去水分。）

4、加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。）蕃紅染色液染10秒鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。下面是革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽性桿菌。共三十八頁革蘭氏正反應(yīng)(fnyng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)(fnyng)菌體都呈紅色。 下面是革蘭氏陰性桿菌(gnjn)和革蘭氏陽性桿菌(gnjn)。 和革蘭氏陽性桿菌。革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌。共三十八頁志賀氏菌掃描電鏡照片(zhopin)共三十八頁志賀氏菌掃描電鏡照片(zhopin)共三十八頁志賀氏菌的透射電鏡照片(zhopin) 共三十八頁2、志賀氏菌的培養(yǎng)(piyng)特性需氧或

5、兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37，最適pH為6.4-7.8。37培養(yǎng)18-24小時(shí)后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2mm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大(jio d)，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，無菌膜形成。共三十八頁菌落(jnlu)形態(tài)學(xué)Bacterial Colony Morphology-關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細(xì)菌(xjn)的重要手段。共三十八頁共三十八頁細(xì)菌(xjn)在肉湯培養(yǎng)基中的生長1. uniform turbidity, or diffuse growth2.

6、 flocculent (clumps)3. sediment, and4. ring or pellicle growth on surface共三十八頁3、志賀氏菌的生化(shn hu)特性本菌屬都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。大多不發(fā)酵乳糖，僅宋內(nèi)氏菌遲緩發(fā)酵乳糖。靛基質(zhì)產(chǎn)生不定，甲基紅陽性，VP試驗(yàn)陰性，不分解尿素，不產(chǎn)生H2S。根據(jù)(gnj)生化反應(yīng)可進(jìn)行初步分類。共三十八頁志賀氏菌生化(shn hu)反應(yīng)分類志賀氏菌屬的細(xì)菌對(duì)甘露醇分解能力不同，可分為二大組。A、不分解甘露醇組：主要為志賀氏菌。又根據(jù)能否產(chǎn)生靛基質(zhì)，進(jìn)一步分靛基質(zhì)陽性(yngxng)（1、3、4、5、6、9、10型）和

7、靛基質(zhì)陰性（2、7、8型）的志賀氏痢疾菌。B、分解甘露醇組：包括福氏、鮑氏、宋內(nèi)氏菌。再按乳糖分解情況，分為遲緩分解乳糖的宋內(nèi)氏和不分解乳糖的福氏和鮑氏菌。后者進(jìn)一步再根據(jù)靛基質(zhì)產(chǎn)生與否，分靛基質(zhì)陽性（福氏菌1、2、3、4、5型和鮑氏菌5、7、9、11、13、15型）和靛基質(zhì)陰性（福氏菌6型和鮑氏菌1、2、3、4、6、8、10、12、14）二類。共三十八頁共三十八頁4、志賀氏菌的抗原(kngyun)構(gòu)造與分型志賀氏菌屬細(xì)菌的抗原結(jié)構(gòu)由菌體抗原（O）及表面抗原（K）組成。主要抗原有三種。型特異性抗原、群特異性抗原、表面抗原（K抗原）。根據(jù)抗原構(gòu)造的不同，按最新國際分類法，將本屬細(xì)菌分為四個(gè)群、4

8、5個(gè)血清型（包括(boku)亞型）附：志賀氏菌抗原分類。共三十八頁志賀氏菌屬抗原(kngyun)的分類 菌 名 血 清 分 類 生 化 特 性 群 型 亞 型 甘露醇 鳥氨酸脫羧酶 志賀氏菌 A 112 - - 福 氏 菌 B 16 1a、1b、2a、2b、3a、3b + - x、y變種(binzhng) 3c、4a、4b. 5a. 5b 鮑 氏 菌 C 118 + - 宋內(nèi)氏菌 D 1 + + 共三十八頁志賀氏菌屬抗原(kngyun)的分類 A群：也稱志賀氏菌群，有12個(gè)血清型。不發(fā)酵甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶，與其他各群細(xì)菌無血清學(xué)聯(lián)系。B群：也稱福氏菌群，已有14個(gè)血清型（包括(boku)亞

9、型和變種）。發(fā)酵甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶。抗原結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，各型間有交叉凝集。每一福氏菌型具有二種抗原，即型特異性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌株中，后者有許多種，存在于福氏各菌型中。例如福氏1b型除含有1型特異性抗原外，尚含有4、6群抗原。C群：也稱鮑氏菌群，有18個(gè)血清型，分解甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶。各型內(nèi)無交叉凝集。D群：也稱宋內(nèi)氏菌群，僅有一個(gè)血清型。分解甘露醇，有鳥氨酸脫羧酶，遲緩發(fā)酵乳糖。有、相之分。共三十八頁5、志賀氏菌的抵抗力志賀氏菌屬在外界環(huán)境中的生存力，以宋內(nèi)氏最強(qiáng)，福氏菌次之，志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤(trng)中能存活34天，37水中存活20天，在糞便內(nèi)（室溫）存活1

10、1天。日光直接照射30分鐘，56-6010分即被殺死，對(duì)高溫和化學(xué)消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被殺死，對(duì)氯霉素、磺胺類、鏈霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。共三十八頁6、志賀氏菌的變異性S-R型變異：菌落可由光滑型變?yōu)榇植谛?，同時(shí)常伴有生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造和致病性的變異。在機(jī)體內(nèi)，尤其在慢性患者和恢復(fù)期患者，志賀氏菌可發(fā)生變異而失去(shq)原來的生化和抗原特性，成為不典型菌株。但其中部分不典型菌株，可通過10%膽汁肉湯等返祖為典型菌株。故在慢性患者或帶菌者糞便檢查時(shí)，對(duì)這類菌株要特別注意，必須多次反復(fù)檢查。因這對(duì)傳染源的發(fā)現(xiàn)及控制有重要意義。耐藥性變異毒力變異與其他變異共三十八頁二、志賀

11、氏菌的流行病學(xué)(li xn bn xu)人和靈長類是志賀氏菌的適宜宿主，營養(yǎng)不良的幼兒、老人及免疫缺陷者更為易感。 志賀氏菌病常為食物爆發(fā)型或經(jīng)水傳播。 和志賀氏菌病相關(guān)的食品包括色拉（土豆、金槍魚、蝦、通心粉、雞），生的蔬菜，奶和奶制品，禽，水果，面包制品，漢堡包，和有鰭魚類。 志賀氏菌在擁擠和不衛(wèi)生條件下能迅速傳播，經(jīng)常(jngchng)發(fā)現(xiàn)于人員大量集中的地方如餐廳、食堂。 食源性志賀氏菌流行的最主要原因是從事食品加工行業(yè)人員患菌痢或帶菌者污染食品，食品接觸人員個(gè)人衛(wèi)生差，存放已污染的食品溫度不適當(dāng)?shù)?。共三十八頁三、志賀氏菌的致病性志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾，主要通過消化道途徑傳播。根據(jù)宿

12、主的健康狀況和年齡，只需少量病菌（至少為10個(gè)細(xì)胞）進(jìn)入，就有可能致病。致病因素(yn s)：志賀氏菌的致病作用，主要是侵襲力、菌體內(nèi)毒素個(gè)別菌株能產(chǎn)生外毒素。志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾可分為兩類:A、急性細(xì)菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型。 B、慢性細(xì)菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。 免疫性：病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不穩(wěn)定。共三十八頁四、志賀氏菌的檢驗(yàn)(jinyn)1、增菌稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶內(nèi)，固體食品用均質(zhì)器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用金屬匙

13、或玻璃棒研磨使其乳化，于36培養(yǎng)68h。 培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長情況而定，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁時(shí)即應(yīng)中止培養(yǎng)。2、分離和初步生化試驗(yàn)(shyn) 取增菌液1環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)；另取1環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板各1個(gè)，于36培養(yǎng)1824h。 志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無色透明不發(fā)酵乳糖的菌落。共三十八頁HE平板原理(yunl)及反應(yīng)不發(fā)酵(f jio)乳糖的腸道菌，可能就是志賀氏菌。 發(fā)酵乳糖的某種腸桿菌不發(fā)酵乳糖的某種腸道菌，而且產(chǎn)生硫化氫，可能是沙門氏菌 不發(fā)酵乳糖的腸道菌，可能就是志賀氏菌。 共三十八頁SS平板(pngbn)原理及反應(yīng)大腸桿菌或者別的

14、發(fā)酵(f jio)乳糖的腸桿菌 是沙門氏菌。有黑色中心。如果沒有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了。共三十八頁麥康凱瓊脂(qingzh)平板共三十八頁EMB平板照片(zhopin)及原理共三十八頁挑取平板(pngbn)上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管。一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落，以防遺漏，經(jīng)36培養(yǎng)1824h，分別觀察結(jié)果。動(dòng)力(dngl)試驗(yàn)三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)的原理1. Pseudomonas aeruginosa：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile 2志賀氏菌3沙門氏菌4大腸

15、桿菌 共三十八頁互動(dòng)(h dn)：志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖(r tn)，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該是什么現(xiàn)象？沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣。共三十八頁下述培養(yǎng)(piyng)物可以棄去嗎？a.在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長的培養(yǎng)物；b.在1824h內(nèi)發(fā)酵(f jio)乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物；c.不分解葡萄糖和只生長在半固體表面的培養(yǎng)物；d.產(chǎn)氣的培養(yǎng)物；e.有動(dòng)力的培養(yǎng)物；f. 產(chǎn)生硫化氫的培養(yǎng)物。共三十八頁 凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵(f jio)，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志

16、賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無動(dòng)力的菌株，可做血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。共三十八頁3、血清學(xué)分型挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。先用4種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果(rgu)由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查；如果呈現(xiàn)凝集，則用A1、A2、B群多價(jià)和D群血清分別試驗(yàn)。如系B群福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見表1。可先用群因子血清檢查，再根據(jù)群因子血清出現(xiàn)凝集的結(jié)果，依次選用型因子血清檢查。4種志賀氏菌多價(jià)血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價(jià)1、2、3分別檢查，并進(jìn)一步用118各型因子血清檢查。如果鮑氏多價(jià)血清不凝集，可用痢疾志

17、賀氏菌312型多價(jià)血清及各型因子血清檢查。共三十八頁4、進(jìn)一步的生化(shn hu)試驗(yàn)在做血清學(xué)分型的同時(shí)，應(yīng)做進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，即：葡萄糖銨西蒙氏檸檬酸鹽賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶pH7.2尿素KCN生長水楊苷和七葉(q y)苷的分解除宋內(nèi)氏菌和鮑氏13型為鳥氨酸陽性外，志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。必要時(shí)還應(yīng)做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物。共三十八頁已判定(pndng)為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應(yīng)進(jìn)一步做5%乳糖發(fā)酵(f jio)甘露醇棉子糖甘油的發(fā)酵靛基質(zhì)試驗(yàn)志賀氏菌屬4個(gè)生化群的培養(yǎng)物，應(yīng)符合該群的生化特性。但福氏6型的生化特性與A群或C群相似。共三十八頁5、噬菌體裂解(li ji)試驗(yàn) 噬菌體是寄生于細(xì)菌的病毒，它們(t men)隨同細(xì)菌分布于自然界中，噬菌體對(duì)于它們(t men)的 宿主細(xì)菌具有一定的特異性。故可利用噬菌體來鑒定某些細(xì)菌且對(duì)于某種菌作為一個(gè) 必要的鑒定項(xiàng)目。噬菌體對(duì)于它們(t men)的宿主細(xì)菌還具有型的特異性，因此可用于細(xì)菌的分型。應(yīng)用腸桿菌科噬菌體診斷法來檢驗(yàn)食品及食物中毒中的沙門氏菌，志賀氏菌性大腸埃希菌，也適用于食品從業(yè)人員的帶菌檢驗(yàn)。共三十八頁6、結(jié)果(ji gu)報(bào)告綜合生