腎臟移植肝臟移植三課件

1、第二十八章 移植免疫及其免疫檢測第1頁，共73頁。第一節(jié) 引起排斥反應(yīng)的靶抗原 一、主要組織相容性抗原 二、其他組織相容性抗原第二節(jié) 排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機制 一、超急性排斥反應(yīng) 二、急性排斥反應(yīng) 三、慢性排斥反應(yīng) 四、移植物抗宿主反應(yīng)第三節(jié) HLA分型 一、血清學(xué)分型法 二、細胞學(xué)分型法 三、分子生物學(xué)分型法第2頁，共73頁。第四節(jié) 常見的組織或器官移植 一、腎臟移植 二、肝臟移植 三、心臟移植與心肺聯(lián)合移植 四、骨髓與其它來源的干細胞移植第五節(jié) 排斥反應(yīng)的預(yù)防與治療 一、組織配型 二、移植物與受體的預(yù)處理 三、免疫抑制措施第3頁，共73頁。思考題小 結(jié)第六節(jié) 排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測 一、體液免

2、疫與細胞免疫水平檢測的臨床意義 二、尿微量蛋白檢測的臨床意義 三、急性時相反應(yīng)物質(zhì)檢測的臨床意義 四、免疫抑制劑體內(nèi)藥物濃度檢測的臨床意義第4頁，共73頁。 移植（transplantation）是指將健康細胞、組織或器官從其原部位移植到自體或異體的一定部位、用以替代或補償機體所喪失的結(jié)構(gòu)和（或）功能的現(xiàn)代醫(yī)療手段。被移植的細胞、組織或器官稱移植物（graft），提供移植物的個體稱為供體(donor)，接受移植物的個體稱為受體（recipient）或宿主（host）。 第5頁，共73頁。 自體移植 同系移植 同種異體移植 異種移植 原位移植 根據(jù)移植部位分類 異位移植 器官移植 移植物種類分類

3、 支架組織移植 細胞移植根據(jù)移植物來源分類移植的類型第6頁，共73頁。 移植名稱 供者、受者關(guān)系 舉例 自體移植 同一個體 自體斷肢再植，自體皮片移植 同系或同基因移植 同系或同基因 人的單卵雙生子間的器官移植 的個體間 同品系小鼠的皮片移植 同種異基因移植 同種不同基因 人與人之間的腎移植 的個體間 不同品系小鼠間的皮片移植 異種移植 異種動物間 狗的器官移植給猩猩 豬的器官移植給狗 移植種類和命名 第7頁，共73頁。第一節(jié) 引起排斥反應(yīng)的靶抗原主要組織相容性抗原其他組織相容性抗原 第8頁，共73頁。一、主要組織相容性抗原主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility

4、 complex,MHC）編碼的人類白細胞抗原（human leukocyte antigen,HLA），是不同個體間進行器官或組織細胞移植時發(fā)生排斥反應(yīng)的主要成分，這種代表個體特異性的同種抗原又稱組織相容性抗原(histocompatibility)或移植抗原(transplantation antigen)。 第9頁，共73頁。 父 母 HLA是人體多態(tài)性最豐富的基因系統(tǒng)。據(jù)1999年的統(tǒng)計，HLA復(fù)合物等位基因總數(shù)已達到1031個，其中HLA-B等位基因有301個 A9Cw3B7A2Cw2B13A1Cw1B5A3Cw4B8HLA的遺傳特征 單倍體遺傳 高度多態(tài)性第10頁，共73頁。在三類

5、HLA分子中，、類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原，尤其是HLA-DR位點的抗原分子 HLA的識別方式：直接識別間接識別HLA發(fā)揮雙重作用：介導(dǎo)宿主抗移植物反應(yīng)(HVGR); 參與移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)。 第11頁，共73頁。二、其他組織相容性抗原次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)組織特異性抗原第12頁，共73頁。第二節(jié) 排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機制移植排斥反應(yīng)（tranlplantation refection）是針對移植抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致移植物功能喪失或受者機體損害的過程。 第13頁，共73頁。排斥反應(yīng)分類： 超急性排斥反應(yīng) 急性排斥反應(yīng) 慢性排斥反應(yīng)第14頁，共73頁。預(yù)防措

6、施：ABO血型配型、細胞毒實驗一、超急性排斥反應(yīng)發(fā)生機制：受者體內(nèi)存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗原結(jié)合，激活補體和凝血系統(tǒng),導(dǎo)致血管內(nèi)凝血。預(yù)存抗體來源 ：1、供受者之間ABO 血型不合； 2、受者反復(fù)多次輸血、妊娠或既往作過移植處理措施：重新移植發(fā)生時間：血循環(huán)恢復(fù)后的數(shù)分鐘至12天內(nèi)第15頁，共73頁。分類：急性體液性排斥反應(yīng)：抗體激活補體，并有CD4+T細胞參與，導(dǎo)致急性血管炎急性細胞性排斥反應(yīng)：CD8+CTL細胞的細胞毒作用、CD4+T和巨噬細胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。二、 急性排斥反應(yīng) 發(fā)生時間：移植后數(shù)周至數(shù)月內(nèi)，是排斥反應(yīng)最常見的類型 處理措施：使用免疫抑制劑第16頁，共73頁

7、。 直接途徑（direct path）:殘留于供者移植物內(nèi)的抗原提呈細胞（過客細胞）對受者機體的免疫系統(tǒng)提供最初的抗原刺激。這種抗原性刺激，來自移植物中樹突狀細胞和單核細胞等表面富含的HLA-、-類分子 間接途徑 （indirect path）:通過受者體內(nèi)的抗原提呈細胞對具有同種異基因HLA-、-類分子的移植物實質(zhì)細胞的識別。無論是供者還是受者，其抗原提呈細胞提供的IL-1、IL-6等刺激信號，有助于觸發(fā)淋巴細胞的活化 急性排斥反應(yīng)中的兩條抗原提呈途徑第17頁，共73頁。同種移植排斥反應(yīng)的發(fā)生機制第18頁，共73頁。三、慢性排斥反應(yīng)發(fā)生時間：一般發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年 臨床特征：對免疫抑制

8、療法不敏感無特異性治療方法，最終需要重新進行器官移植 病理特點：血管壁細胞浸潤、間質(zhì)纖維化和瘢痕形成第19頁，共73頁。T細胞、巨噬細胞等介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)等免疫損傷。B細胞產(chǎn)生的抗體活化補體或通過ADCC破壞血管內(nèi)皮細胞。急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作所導(dǎo)致的移植物組織退行性變，此與細胞和體液免疫均有關(guān)系。非免疫相關(guān)因素，諸如局部缺血、再灌注損傷、微生物感染等。受者患有高血壓或糖尿病也可促使慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生引起慢性排斥反應(yīng)的因素第20頁，共73頁。定義：在骨髓移植時，供者骨髓中的免疫細胞啟動以受者細胞為靶抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)，引起攻擊受者的移植物抗宿主反應(yīng)。GVHD也可見于脾、胸腺和小腸移植。 四、

9、移植物抗宿主反應(yīng)發(fā)生機制：T細胞起主要作用 IL-2、IL-6、TNF-、IFN-等細胞因子參與 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等粘附分子參與第21頁，共73頁。第三節(jié) HLA分型方法 HLA分型方法的改進和不斷完善，使得HLA復(fù)雜的多態(tài)性更加顯現(xiàn)，亦推動了HLA與群體及自然選擇關(guān)系的研究，更促進了人們對疾病本質(zhì)的認識。 第22頁，共73頁。一、血清學(xué)分型法 應(yīng)用一系列已知抗HLA的特異性標準分型血清與待測淋巴細胞混合，借助補體的生物學(xué)作用介導(dǎo)細胞裂解的細胞毒試驗。耗時長不同批號抗血清結(jié)果常有不同 操作簡便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好 無需特殊設(shè)備 優(yōu)點缺點第23頁，共73頁。

10、用于HLA分型的微量細胞毒試驗第24頁，共73頁。死（著染）細胞（%）記分結(jié)果判斷0101陰性11202可疑陰性21504弱陽性51806陽性808強陽性0未試驗或不能讀數(shù)微量細胞毒試驗判定標準 第25頁，共73頁。HLA分型結(jié)果舉例第26頁，共73頁。二、細胞學(xué)分型法 以混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture,MLC）或稱混合淋巴細胞反應(yīng)（mixed lymphocyte reaction,MLR）為基本技術(shù)的HLA分型法。能用本法測定的抗原稱為LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。MLC分為單向MLC和雙向ML

11、C第27頁，共73頁。 將已知HLA型別的分型細胞用絲裂霉素C或X線照射預(yù)處理，使其失去增殖能力僅作為刺激細胞；而以具有增殖能力的受檢者外周血單個核細胞為反應(yīng)細胞。兩者混合培養(yǎng)時，反應(yīng)細胞可對刺激細胞發(fā)生應(yīng)答而增殖，用3H-TdR摻入法測定細胞增殖強度，從而判斷受檢細胞的HLA型別。 根據(jù)選用的刺激細胞類型分為：1陰性分型法 2陽性分型法 1. 單向MLC第28頁，共73頁。 遺傳型不同的兩個個體淋巴細胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細胞增殖，故稱雙向MLC。在此試驗中，各自的淋巴細胞既是刺激細胞，又是反應(yīng)細胞，反應(yīng)后形態(tài)上呈現(xiàn)的細胞轉(zhuǎn)化和分裂現(xiàn)象，可通過形態(tài)法計

12、數(shù)轉(zhuǎn)化細胞 。2. 雙向MLC本法不能判斷型別，只能說明供、受體HLA抗原配合程度 第29頁，共73頁。三、分子生物學(xué)分型法 分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，使得HLA的DNA分型技術(shù)應(yīng)運而生，并在開展DNA限制性片段長度多態(tài)性分析、DNA指紋圖、等位基因特異性寡核苷酸雜交等基礎(chǔ)上，引入多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)，使HLA分型得以在更精密的水平上進行。 第30頁，共73頁。限制性片斷長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析：最早建立的研究HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù) PCR-RFLP分型法：對DNA片段進行體外擴增，然后再用限制性內(nèi)切酶進行

13、酶切分析，可使限制性長度分析的敏感度大大增加 1. RFLP與PCR-RFLP分型法 第31頁，共73頁。序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO）是以PCR為基礎(chǔ)，將凝膠上擴增的HLA基因DNA轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜或尼龍膜，進而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物質(zhì)標記的寡核苷酸探針與之進行雜交，從而對擴增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。 2. PCR-SSO分型法 分類：斑點或印漬法反向斑點或印漬法PCR-SSO是類HLA分型應(yīng)用最廣泛的方法， 能夠鑒定所有已知序列的HLA-DR、DQ、DP等位基因第32頁，共73頁

14、。是近年發(fā)展起來的一項新技術(shù),將其與PCR-SSO結(jié)合應(yīng)用于HLA分型，可使分型趨于規(guī)?；妥詣踊绕湓贖LA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具優(yōu)勢。HLA的基因芯片分型法，實際上是PCR-SSO反向斑點或印漬法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型領(lǐng)域的應(yīng)用尚屬起步階段?；蛐酒?gene chip)第33頁，共73頁。原理：應(yīng)用設(shè)計的一套HLA等位基因的序列特異性引物（sequence specific primer,SSP）,對待測DNA進行PCR擴增，從而獲得HLA型別特異性的擴增產(chǎn)物3. PCR-SSP分型法 HLA基因擴增的特異性包括：座位特異性（locus-specific），如

15、HLA-A、B、-DRB1等；組特異性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特異性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。第34頁，共73頁。原理：對ssDNA進行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳時，因其序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNA多態(tài)性或點突變，有助于新的HLA等位基因或突變體的發(fā)現(xiàn)。 4.PCR-SSCP分型法 單鏈構(gòu)象特異性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）是以對待

16、測基因PCR擴增為基礎(chǔ)，對擴增的單鏈DNA（ssDNA）的HLA分型方法。特點：PCR-SSCP作為PCR-SSO的補充，在區(qū)分純合子和雜合子基因方面有其獨到之處，有利于排除SSO雜交的假性。第35頁，共73頁?；具^程：分離待測細胞的DNA，應(yīng)用座位、組或等位基因特異性引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物的純化和測序，測出的基因序列與HLA基因庫的DNA已知序列比較，判斷待測的HLA型別。 5. SBT分型法 基于序列的HLA分型法（sequence-based HLA typing,SBT），通過對擴增后的HLA基因片段通過核酸序列測定來判斷HLA型別。第36頁，共73頁。第四節(jié) 常見的組織或器官

17、移植 臨床器官移植術(shù)的建立至今已有50多年的歷史。從腎臟移植到心肺移植、肝臟移植；從完整的器官移植到部分組織器官甚至是細胞移植；從單一的器官移植到器官聯(lián)合移植。 第37頁，共73頁。一、腎臟移植 腎臟移植，創(chuàng)始于1950年，是臨床開展最早、應(yīng)用最多和效果最佳的一種器官移植。 由于免疫抑制藥物的不斷更新和移植技術(shù)的不斷提高，腎臟移植患者1年和5年的存活率，分別可達90% 95%和80%90%。 第38頁，共73頁。組織配型是腎臟移植前選擇供者的重要手段 包括：ABO血型配型 HLA配型 交叉配型腎源選擇的原則：以ABO血型完全相同者為好，至少能夠相容選擇最佳HLA配型的供者器官1.組織配型在腎臟

18、移植中的應(yīng)用第39頁，共73頁。臨床觀測項目: T細胞總數(shù)、CD4/CD8比值和IL-2及其受體的檢測，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果 腎組織活檢，預(yù)測排斥反應(yīng)的發(fā)生 CsA血藥濃度檢測，指導(dǎo)合理用藥，減少腎毒性 2.腎移植受者的療效檢測 療效監(jiān)測：受者免疫狀態(tài)檢測第40頁，共73頁。二、肝臟移植 肝臟移植手術(shù)已經(jīng)成為治療原發(fā)性膽道閉鎖、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝細胞性肝癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及藥物誘導(dǎo)的肝臟損傷等疾病，挽救晚期肝病患者生命的最有效方法。 第41頁，共73頁。特點： HLA是否匹配與肝臟移植效果無顯著差異機制：

19、肝臟移植時，因HLA不配僅發(fā)生較弱的排斥反應(yīng)，而免疫抑制劑 的應(yīng)用有效控制了排斥反應(yīng)的發(fā)生肝臟移植時仍應(yīng)盡可能進行HLA配型1.組織配型在肝臟移植中的應(yīng)用第42頁，共73頁。排斥反應(yīng)發(fā)生幾率：約2/3的肝移植患者出現(xiàn)過排斥反應(yīng)的病理學(xué)改變，也有8的病例術(shù)后發(fā)生急、慢性排斥反應(yīng)，占肝移植致死原因的10%。2.肝移植受者的療效檢測 組織病理學(xué)特點：肝移植術(shù)后第2天，匯管區(qū)出現(xiàn)明顯的白細胞浸潤，匯管區(qū)和肝竇的白細胞浸潤第7天達高峰，涉及到T細胞、B細胞、巨噬細胞、嗜酸性和中性粒細胞。在浸潤的T細胞中CD8+細胞高于CD4+細胞，也見有IL-2R和CD25+的活化T細胞。第43頁，共73頁。三、心臟移

20、植與心肺聯(lián)合移植 在世界范圍內(nèi)，約有300多個心臟中心進行心臟移植，總例數(shù)已超過7萬，年病例不下3000，1年和5年存活率分別為80%和70%。心肺聯(lián)合移植已成為人們可以接受的治療終末期心肺疾病的一種有效方法。第44頁，共73頁。ABO血型匹配：避免急性排斥反應(yīng)的首要條件。HLA I、類分子匹配：移植器官長期存活的重 要因素。 淋巴細胞毒交叉配合和群體反應(yīng)性抗體檢測1.組織配型在心臟和心肺聯(lián)合移植中的應(yīng)用 第45頁，共73頁。 外周血淋巴細胞總數(shù) T、B細胞的轉(zhuǎn)化能力 T細胞亞類百分數(shù)及比值 CTL細胞毒作用 細胞因子及其受體表達或轉(zhuǎn)錄水平 轉(zhuǎn)化生長因子 NK細胞數(shù)及其介導(dǎo)的自然殺傷或ADCC

21、效應(yīng) 粘附分子及其配體在各類細胞表達情況2.心臟及心肺聯(lián)合移植受者的療效檢測 免疫監(jiān)測指標第46頁，共73頁。 骨髓和干細胞移植均系非實質(zhì)性器官移植，其中骨髓移植開展的較早，而干細胞移植正日益受到臨床工作者的重視。 四、骨髓與其他來源的干細胞移植第47頁，共73頁。特點：可同時發(fā)生HVGR和GVHR 分類： 自體骨髓移植、 同基因骨髓移植 同種異基因骨髓移植（多見） 病例較少成功率高 骨髓移植實際上是造血干細胞移植，因此，骨髓中造血干細胞的質(zhì)和量對移植的成敗致關(guān)重要。 1.骨髓移植 第48頁，共73頁。方法：使用藥物動員劑促使造血干細胞從骨髓釋放到外周血，從中獲取足量的干細胞用于移植，可獲得與

22、骨髓移植同樣的治療目的特點：與骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢復(fù)快，GVHR發(fā)生率和嚴重程度不高等優(yōu)點。 移植前檢測：HLA和ABO血型配型、血常規(guī)與骨髓檢驗、性染色體測定、造血干細胞鑒定和GVHR征象追蹤等腫瘤干細胞的發(fā)現(xiàn)，提示人們在進行干細胞應(yīng)用時應(yīng)該注意生物安全性。2.外周血和臍血干細胞移植 第49頁，共73頁。適應(yīng)于同種異型或異基因骨髓移植的疾病。乳腺、卵巢、睪丸以及肺部等實體瘤，不宜行骨髓移植，多應(yīng)用自體末稍血干細胞移植治療。急性髓樣白血病、急性淋巴母細胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤和何杰金病等，則既是同種異型或異基因骨髓移植的適應(yīng)癥，也可用自體末稍血

23、干細胞移植進行治療。 3.適于骨髓或末稍血干細胞移植的常見疾病 第50頁，共73頁。第五節(jié) 排斥反應(yīng)的預(yù)防與治療 除角膜、腦、睪丸和子宮等少數(shù)組織或器官移植外，移植排斥反應(yīng)仍然是困擾臨床移植的重要問題，有效地預(yù)防排斥反應(yīng)是延長移植物存活時間和保護受者的重要手段。 第51頁，共73頁。一、組織配型HLA是引起同種異型移植排斥反應(yīng)的主要抗原供者與受者的HLA等位基因匹配程度決定了移植排斥反應(yīng)的強弱程度通過HLA組織配型(tissue typing)，選擇合適的供者，減輕排斥反應(yīng) 1.HLA配型第52頁，共73頁。供、受者HLA-A和HLA-B相配的位點數(shù)越多，移植物存活機率越高供、受者HLA-DR

24、位點相配更重要，因為HLA-DR和DQ基因有很強的連鎖不平衡，DR位點相配的個體，通常DQ位點也相配；不同地區(qū)HLA匹配程度與移植結(jié)果的關(guān)系有著不同的預(yù)測價值，在歐洲HLA匹配的程度對移植結(jié)果的預(yù)測性比美國高，因為歐洲人群的近交程度較高 ，導(dǎo)致HLA位點連鎖不平衡性削弱。 移植物存活與HLA配型的關(guān)系第53頁，共73頁。交叉配型采用補體依賴的細胞毒試驗 陽性對照:陽性對照血清可用淋巴細胞免疫家兔獲得 陰性對照:陰性血清可采用無受血史的AB血型男性血清根據(jù)反應(yīng)時參與的細胞成分分類： 淋巴細胞交叉配型 T細胞淋巴細胞毒性交叉配型 B細胞淋巴細胞毒性交叉配型 流式細胞法交叉配型 自身交叉配型 結(jié)果判

25、讀: 交叉配型陽性:表明受者預(yù)存有抗供體的抗體臨床意義: 交叉配型陽性:即使組織配型好，也不宜進行移植，易發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。 在做受體選擇時，組織配型差，但交叉配型為陰性，仍可實施移植。 交叉配型常用于腎臟移植2.HLA交叉配型與預(yù)存抗體的檢測第54頁，共73頁。方法方法類型與參與成分需時應(yīng)用組織配型補體依賴的淋巴毒試驗血清學(xué)法（HLA抗血清、補體、待測細胞）3hHLA、類抗原鑒定交叉配型PBL交叉配型血清學(xué)法（受著血清、供者細胞、補體、有/無AHG）3h檢測受者血清中已存在的抗供者抗體TB交叉配型血清學(xué)法（純化的供者T/B細胞、受者血清、AHG）3-6hT細胞： 檢測抗HLA I類抗體；B

26、細胞：檢測HLA I、II類抗體MLC試驗細胞學(xué)法（供、受者細胞培養(yǎng)）6dHLA II類抗原相容性CML試驗細胞學(xué)法（受者細胞、供者刺激細胞作為靶細胞）4h抗供者CTL檢測FCC血清學(xué)法（受者血清、供者細胞、熒光抗人Ig）3-4h檢測非常弱的和無細胞毒性的抗供者抗體自身交叉配型血清學(xué)法（受者PBL、T和B細胞以及血清）和FCC3-4h檢測非特異的淋巴細胞抗體（自身抗體）HLA抗體篩選HLA I類抗體的篩選血清學(xué)法（受者血清、相應(yīng)的HLA類型T細胞或PBL）3h60細胞HLA I類抗體檢測，抗體特異性鑒定HLA II類抗體的篩選血清學(xué)法（吸附過的受者血清、用作HLA-DR/DQ分型的B細胞）4h

27、60細胞數(shù)加吸附時間HLA II類抗體檢測，抗體特異性鑒定CML：細胞介導(dǎo)的淋巴細胞溶解試驗第55頁，共73頁。群體反應(yīng)性抗體（panel reactive antibody,PRA）：指用4060人含已知HLA的T細胞或T、B混合細胞，檢測待移植受者血清所得到的抗體陽性百分數(shù)。檢測意義: 用于判斷器官移植時受體的敏感程度 高PRA血清:可針對多個HLA抗原發(fā)生反應(yīng)，受體對所接受的移植器 官或組織威脅大注意:應(yīng)考慮在不同HLA上可能出現(xiàn)的共同表位或稱公共抗原（public antigens）與受體血清發(fā)生的交叉反應(yīng)3.群體反應(yīng)性抗體的檢測第56頁，共73頁。不同的組織器官的移植，其移植物的處理

28、不盡相同首先是從移植術(shù)的角度對離體組織器官進行外科修整，然后根據(jù)不同器官的要求采取相應(yīng)的預(yù)處理二、移植物與受體的預(yù)處理（一）移植物的預(yù)處理第57頁，共73頁。組織配型或交叉配型移植前應(yīng)用一定劑量的免疫抑制劑，其用量視組織配型的結(jié)果而定術(shù)前輸血,視患者的需要進行 （二）受體的準備 第58頁，共73頁。人工調(diào)節(jié)受者機體的免疫狀態(tài)是控制移植術(shù)后排斥反應(yīng)發(fā)生的主要途徑采取的措施： 使用免疫抑制劑:以此控制受者的免疫應(yīng)答，降低對移植物的排斥能力 誘導(dǎo)免疫耐受:誘導(dǎo)受者對移植抗原的特異性免疫耐受三、免疫抑制措施第59頁，共73頁。3、生物性免疫抑制劑 2、某些中草藥 抗淋巴細胞球蛋白(ALG)或抗胸腺細胞

29、球蛋白(ATG) 細胞性單克隆抗體某些融合蛋白 反義寡核苷酸 (antisence oligonucleotide) 1、化學(xué)性免疫抑制劑 環(huán)孢菌素A(cyclosporine A，CsA)FK506 (tacrolimus)，霉酚酸酯 (mycophendate mofetil, MMF)糖皮質(zhì)激素硫唑嘌呤環(huán)磷酰胺（一）免疫抑制劑的應(yīng)用第60頁，共73頁。常見免疫抑制劑作用位點 第61頁，共73頁。通過將同種抗原置入子宮或注射給新生兒而誘導(dǎo)同種抗原的特異性免疫耐受封閉同種抗原特異性T細胞的TCR，以誘導(dǎo)受者特異性T細胞凋亡，產(chǎn)生免疫耐受干擾共刺激信號的形成誘導(dǎo)T細胞無能阻礙T細胞活化誘導(dǎo)特異

30、性耐受T細胞疫苗（T cell vaccine, TCV）（二）對移植抗原特異性免疫耐受誘導(dǎo)第62頁，共73頁。第六節(jié) 排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測 排斥反應(yīng)發(fā)生時，受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答將發(fā)生一系列變化，據(jù)此，檢測機體的免疫狀態(tài)可幫助診斷或推測排斥反應(yīng)的發(fā)生。第63頁，共73頁。一、體液免疫與細胞免疫水平檢測的臨床意義 特異性抗體水平的檢測 相關(guān)免疫指標： ABO等血型和HLA抗體 抗供者組織細胞抗體 血管內(nèi)皮細胞抗體 冷凝集素 測定方法: 交叉配型、補體依賴的細胞毒性試驗 血清PRA水平:判斷器官移植時受體對移植物的敏感程度， 基于細胞毒性試驗的PRA測定，被作為心臟移植前的常規(guī)項目， 若PRA超過5，

31、則應(yīng)進行供者淋巴細胞與受者血清的交叉配型。（一）體液免疫水平檢測的臨床意義第64頁，共73頁。補體水平的檢測補體活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)當移植物遭受排斥時，補體成分的消耗增加可采用溶血法或比濁法進行檢測。補體活性的檢測補體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b、C3d等的測定常用的檢測方法有免疫電泳、免疫標記技術(shù) 第65頁，共73頁。（二）細胞免疫水平檢測的臨床意義外周血T細胞及其亞類的計數(shù) CD4/CD8比值大于1.20時:預(yù)示急性排斥即將發(fā)生， CD4/CD8比值小于1.08時:發(fā)生感染的可能性很大。 若進行動態(tài)監(jiān)測，對急性排斥反應(yīng)和感染具有鑒別診斷的意義NK細胞活性測定混合淋巴細胞反應(yīng):刺

32、激細胞:滅活的供者的淋巴細胞 反應(yīng)細胞:受者淋巴細胞 結(jié)果顯示的是CTL和NK細胞共同作用的結(jié)果。 動態(tài)監(jiān)測NK細胞活性則意義更大第66頁，共73頁。血清細胞細胞因子測定 IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-等細胞因子的水平均可升高 個體間血清IL-2R的含量差別顯著粘附分子及其配體的檢測免疫細胞以及血管內(nèi)皮細胞等細胞膜表面粘附分子及其配體的表達，與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。諸如ELAM-1、VCAM、ICAM和HLA分子等比較受者接受移植物前后的細胞因子水平環(huán)孢霉素A具有腎毒性，血清肌酐值增高，而IL-2R卻明顯降低血清肌酐值和IL-2R同時增高提示急性排斥反應(yīng)的發(fā)生巨細胞病毒感染時，IL-2R血清含量的升高將更為明顯第67頁，共73頁。二、尿微量蛋白檢測的臨床意義 尿微量蛋白檢測意義： 判斷大器官移植、尤其是腎臟移植時排斥反應(yīng)的發(fā)生 檢測免疫抑制藥的肝腎毒副作用 1-微球蛋白是能較早反映腎功能損害的指標 尿-1微球蛋白和尿IgG與腎移植受者短期腎功能關(guān)系密切尿微量蛋白種類： 血漿蛋白：包括白蛋白（Aib）、IgG、IgA、IgM、輕鏈（）、2-微球蛋白（2M）、補體C3、1微球蛋白（1M）、