單抗制備流程

1、單抗制備技術(shù)原理和流程單克隆抗體簡單回顧機(jī)體受到抗原刺激后，由漿細(xì)胞合成并分泌一組能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白，即抗體?？乖峡梢砸饳C(jī)體產(chǎn)生抗體的結(jié)構(gòu)叫做抗原決定簇，或者抗原表位，一個抗原可以有多個不同的抗原表位。由單一B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生僅識別某一特定抗原表位的抗體為單克隆抗體。由多種B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，識別多個抗原表位的抗體被稱為多克隆抗體。單克隆抗體的特點(diǎn)特異性高：單抗特異性太高，以至于無法跨物種應(yīng)用。抗體組成：僅有一種抗體亞型組成，比如IgG1、IgG2、IgG3。批次差異：和多抗一樣，容易產(chǎn)生批次間差異。實(shí)驗(yàn)檢測：由于單抗特異性高，因此檢測時(shí)，產(chǎn)生的背景更少，結(jié)果重現(xiàn)性?？乖儺悾旱窍啾?/p>

2、于多抗，單抗對微小抗原變化（如輕微變性、糖基化異質(zhì)性、多態(tài)性）的包容性更弱。但可以通過合并靶抗原相同的兩種及以上抗體進(jìn)行補(bǔ)償?？贵w制備：對制備技術(shù)要求高，制備雜交瘤細(xì)胞的時(shí)間較長，花費(fèi)更高，制備周期更長。單克隆抗體的應(yīng)用分析抗原的細(xì)微結(jié)構(gòu)及探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域；可用于分離、特征化及純化特定分子抗原；產(chǎn)品可直接用于臨床診斷和治療，或用于以單抗為彈頭的“生物導(dǎo)彈”藥物，直接導(dǎo)向腫瘤等。單克隆抗體的制備單抗制備的方法主要包括雜交瘤技術(shù)和展示抗體庫技術(shù)。實(shí)驗(yàn)室主要用雜交瘤技術(shù)，而大規(guī)模生產(chǎn)中主要用雜交瘤技術(shù)或者展示抗體庫技術(shù)。抗體庫技術(shù)的要求更高，制備時(shí)間更短，易于人源化，因此更適合規(guī)模生產(chǎn)。雜交瘤技

3、術(shù)發(fā)展多年，頗受認(rèn)可，實(shí)驗(yàn)操作較為簡單，可生產(chǎn)特異性強(qiáng)的單抗，因此在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用。1.雜交瘤技術(shù)關(guān)于雜交瘤技術(shù)，我們已經(jīng)開展過幾次專題解讀，這里不再贅述。您可以移步查看下列文章：雜交瘤技術(shù)簡述及基本原理雜交瘤細(xì)胞系如何建立雜交瘤篩選一選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤篩選一特異性抗體篩選雜交瘤細(xì)胞克隆方法圖2.雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體原理示意圖。TunwW(HOPR.Tcfe*Mint|Us*ELISAi&peterrrfyhy時(shí)MFNbrpduqnq加咖謚EtwxJyHybndemBproducingijaskwmrwwnsJartbM)-Graonosfromski口也1fT2.抗體庫技術(shù)抗體庫技

4、術(shù)是在已知抗體基因序列的前提下，將基因序列克隆到相應(yīng)載體（比如噬菌體，哺乳細(xì)胞等），進(jìn)行重組抗體的表達(dá)。下面，我們以噬菌體抗體庫技術(shù)舉例，講解抗體庫技術(shù)原理。噬菌體抗體庫技術(shù)原理噬菌體展示技術(shù)是利用基因工程手段將外源基因片段插入噬菌體特定蛋白基因，利用噬菌體表達(dá)并展示重組融合蛋白的技術(shù)。2018年的諾貝爾化學(xué)獎頒給了噬菌體展示的發(fā)明者喬治.史密斯。噬菌體展示主要包括重組噬菌體、輔助噬菌體和宿主細(xì)菌等，先后發(fā)展出了噬菌體M13,入,T4,T7展示系統(tǒng)。輔助噬菌體是指由能為噬菌體提供復(fù)制和包裝過程所需要的酶和結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的完整噬菌體，即不含外源基因。絲狀噬菌體pill蛋白和pVIII蛋白最常用于展示

5、外源性重組蛋白。外源蛋白能夠融合在Pill蛋白中間或者N段。圖3.噬菌體展示技術(shù)原理?？贵w庫生產(chǎn)單抗流程（1）抗體庫構(gòu)建選取高質(zhì)量的mRNA,逆轉(zhuǎn)錄得到抗體的輕鏈和重鏈的DNA,將PCR擴(kuò)增得到的輕鏈和重鏈基因與載體連接，導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)菌中。如果該噬菌體不包含噬菌體所需的全部基因，還要加入輔助噬菌體。然后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),重組蛋白得到展示與表達(dá)。（2）淘選利用免疫反應(yīng)進(jìn)行淘選。即將表達(dá)的單抗與靶抗原進(jìn)行免疫反應(yīng),在經(jīng)過洗脫,稀釋和擴(kuò)增結(jié)合的噬菌體。經(jīng)過3-4輪,即可得到高度特異性的抗體噬菌體。（3）分析淘選得到的噬菌體還需要經(jīng)過ELISA檢測。主要過程是在包被有靶抗原的板子上加入噬菌體孵育,洗脫未結(jié)合的噬菌體,加入偶聯(lián)酶的噬菌體抗體和酶特異性顯色劑。若是發(fā)生顯色反應(yīng),說明噬菌體抗體能與靶抗原結(jié)合。選出顯色的噬菌體用于單抗的生產(chǎn)。通過高通量測序技術(shù),還能對抗體的序列進(jìn)行分析。生產(chǎn)出的抗體,也能用于下游檢測,如ELISA，免疫熒光，免疫印跡，和免疫沉淀等。檢驗(yàn)合格的單抗能在科學(xué)研究、臨床診斷、醫(yī)藥研究等方面發(fā)揮重要作用。安必辭物科技有限公司抗萍陣構(gòu)建連轉(zhuǎn)隸掀幡筍和亜旅基國陀瞼鏈(LC)和廈惟(HC)基內(nèi)fiPCfU物與瑤的萍樂體琳啡按書穿孔摂郴電俎能圖*轉(zhuǎn)啓in人俺更