實(shí)驗(yàn)診斷實(shí)驗(yàn)課課件

1、實(shí)驗(yàn)(shyn)一白細(xì)胞計(jì)數(shù) 共五十二頁一目的：熟悉白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，掌握(zhngw)白細(xì)胞計(jì)數(shù)參考值及臨床意義。二原理：用2%稀醋酸(冰乙酸)作白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液，可使紅細(xì)胞溶解，留下白細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)一定體積中的白細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出每升血液中白細(xì)胞的總數(shù)。三器材：白細(xì)胞稀釋液、顯微鏡、計(jì)數(shù)板、采血針、小玻棒、小試管、試管架、微量吸管、小紗布、75酒精棉球、消毒干棉球共五十二頁四步驟：1.以2冰乙酸溶液為白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液，用吸管準(zhǔn)確吸取稀釋液 0.38ml，置于清潔干燥的小試管中。2.毛細(xì)血管采血法:用微量吸管采血至20微升處，擦去管尖外圍多余的血液，將管內(nèi)血液迅速注入試管底部，并用上清液

2、將管內(nèi)殘存血液洗凈，立即混勻。待液體呈褐色后，再振蕩均勻，用小玻棒取此液注入計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置23分鐘。3.用低倍鏡計(jì)數(shù)四角(s jio)的四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)(N)。壓線細(xì)胞計(jì)數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。共五十二頁五 計(jì)算： 四個(gè)大方格(fn )內(nèi)白細(xì)胞數(shù)（N）(N)/41020106白細(xì)胞數(shù)/升 式中：四個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)/4，算出每個(gè)大方格（即0.1微升）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)。 10 把0.1微升換算為1微升。 20 為血液稀釋倍數(shù)。 106 將1微升換算為1L。六 參考值 ： 成人 （410）109/L 6個(gè)月至2歲嬰兒（1112）109/L 新生兒 （1520）109/L共五十二頁八注

3、意事項(xiàng)：1稀釋倍數(shù)一定要準(zhǔn)確（包括(boku)采血量和加稀釋液量）。2小試管、計(jì)數(shù)板一定要清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。3.一定要待稀釋液轉(zhuǎn)化為棕褐色后方可進(jìn)行計(jì)數(shù)，此時(shí)紅細(xì)胞已完全破壞，否則可因紅細(xì)胞殘留而干擾計(jì)數(shù)，使結(jié)果偏高。 九思考題： 白細(xì)胞總數(shù)增多的臨床意義？ 共五十二頁共五十二頁共五十二頁共五十二頁實(shí)驗(yàn)(shyn)二紅細(xì)胞計(jì)數(shù)共五十二頁一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆占t細(xì)胞計(jì)數(shù)原理和方法，熟悉紅細(xì)胞參考值及臨床意義。 二 實(shí)驗(yàn)原理：用紅細(xì)胞稀釋(xsh)液將血液稀釋(xsh)一定倍數(shù)，置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，然后 再計(jì)算出每升血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。 三 實(shí)驗(yàn)器材

4、和試劑： 紅細(xì)胞稀釋液（0.85%NaCl）、顯微鏡、 小試管、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板、蓋玻片、微量吸管、試管架、采血針、小 玻棒、75%酒精棉球、小紗布、消毒干棉球、報(bào)告單。 共五十二頁四 實(shí)驗(yàn)步驟：1.取試管1支，加紅細(xì)胞稀釋1.99ml。 2.消毒(xio d)皮膚，用采血針刺破皮膚，使血液自動(dòng)流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管準(zhǔn)確取血10微升。 3.去管尖外部余血，輕輕注入紅細(xì)胞稀釋液底部，再吸取上層稀釋液清洗吸管2-3次，立即搖勻。 4.傾斜試管用小玻棒沾取紅細(xì)胞懸液，注入血細(xì)胞計(jì)池內(nèi)，要求一次充好，不要產(chǎn)生氣泡。靜置2-3分鐘，使紅細(xì)胞完全沉降。 5.將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下用 高倍鏡計(jì)數(shù)中央

5、大方格紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)四個(gè)角和中間的一個(gè)中方格共5個(gè)中方格內(nèi) 的紅細(xì)胞。凡壓在中方格邊緣上的紅細(xì)胞，以數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。共五十二頁共五十二頁五 計(jì)算R（五個(gè)中方格內(nèi)RBC數(shù)） R510106200= .1012個(gè)/升式中：5：5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)換算為1個(gè)大方 格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)10：1個(gè)大方格容積（0.1微升）換算成1微升106：1微升換算為1升200：血液稀釋倍數(shù)六 實(shí)驗(yàn)報(bào)告方式：.1012/L七 正常(zhngchng)參考值： 成年男性：4.00-5.501012/L 成年女性：3.50-5.001012/L 新生兒：6.00-7.001012/L共五十二頁 八 注意事項(xiàng)：1

6、.顯微鏡物鏡接近計(jì)數(shù)板時(shí)應(yīng)注意，勿損壞計(jì)數(shù)板及鏡頭。2.計(jì)數(shù)時(shí)進(jìn)入顯微鏡的光線要適中，否則不易找到方格。計(jì)數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布要均勻，各中方格的細(xì)胞相差(xin ch)不應(yīng)超過10%，否則重新計(jì)數(shù)。3.試管、計(jì)數(shù)板須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為紅細(xì)胞。4.稀釋倍數(shù)要準(zhǔn)確。5.計(jì)數(shù)完畢后，用清水將計(jì)數(shù)盤和蓋玻片沖洗干凈，待干后備用。 九 思考題：1.計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確的常見原因有哪些？2.紅細(xì)胞數(shù)增多減少的臨床意義？共五十二頁 實(shí)驗(yàn)(shyn)三 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)共五十二頁 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?md)：掌握白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)原理和方法，熟悉白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的參考值及臨床意義。 二 實(shí)驗(yàn)原理：白細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核和胞槳顆粒

7、等含有不同的化學(xué)成分，其與各種染料的親和力不同。經(jīng)染色后能著上不同的顏色，根據(jù)顏色的差異，可將白細(xì)胞區(qū)別并進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。 三 實(shí)驗(yàn)器材和試劑：顯微鏡 擦鏡紙 75 酒精 推玻片 吸水紙 消毒干棉球 載玻片 染色架 瑞氏染色液 采血針 香柏油 緩沖液 吸球 二甲苯 共五十二頁四 實(shí)驗(yàn)步驟：1.血涂片制備- 取末梢血一滴，置于載玻片一端，將推片的一端，放在血滴前面，逐漸后移接觸血滴，血滴好沿推片散開，然后使推片與載玻片間成3045夾角，平穩(wěn)向前推動(dòng)至載玻片的另一端，玻片上便留下一均勻薄層(bo cn)血膜，自然干燥。2. 染色-將干燥后的血膜片置于染色架上。用瑞氏染液35滴，覆蓋整個(gè)血膜，固定細(xì)胞

8、0.51min。滴加等量或稍多的緩沖液于血膜上，用吸球?qū)⑵浯祫?，染?10min。平放玻片，用流水從玻片的一側(cè)沖去染液，待血片自然干燥或用濾紙吸干，即可鏡檢。3.鏡檢-在低倍鏡下觀察細(xì)胞著色情況，然后選擇血涂片體尾交界部染色良好的區(qū)域滴加一滴香柏油，在油鏡下按一定的方向順序?qū)λ姷降拿恳粋€(gè)白細(xì)胞進(jìn)行分類，既不得重復(fù)亦不遺漏，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。求出各類白細(xì)胞所占的百分率。共五十二頁 瑞氏染色外周血五種白細(xì)胞形態(tài)(xngti)特征： 細(xì)胞類型大?。╩）外形細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)核形染色質(zhì)著色顆粒中性桿狀核粒細(xì)胞1015圓形彎曲呈臘腸樣，兩端鈍圓深紫紅色粗糙淡橘紅色量多，細(xì)小，均勻布滿胞質(zhì)，淺紫紅色中性分

9、葉核粒細(xì)胞1015圓形分為25葉，以3葉為多深紫紅色粗糙淡橘紅色量多，細(xì)小，均勻布滿胞質(zhì)，淺紫紅色嗜酸性粒細(xì)胞1116圓形分為2葉，呈眼鏡樣深紫紅色粗糙淡橘紅色量多粗大，圓而均勻，充滿胞質(zhì)，鮮橘紅色嗜堿性粒細(xì)胞1012圓形核結(jié)構(gòu)不清，分葉不明顯粗而不勻淡橘紅色量少，大小和分布不均，常覆蓋核上，藍(lán)黑色淋巴細(xì)胞615圓形或橢圓形圓形或橢圓形，著邊深紫紅色塊粗糙透明淡藍(lán)色小淋巴細(xì)胞一般無顆粒，大淋巴細(xì)胞可有少量粗大不均勻，深紫紅色顆粒單核細(xì)胞1020圓形或不規(guī)則形不規(guī)則形，腎形，馬蹄形，或扭曲折疊淡紫紅色，細(xì)致疏松呈網(wǎng)狀淡灰藍(lán)色量多細(xì)小，灰塵樣紫紅色顆粒彌散分布于胞質(zhì)中共五十二頁中性(zhngxng

10、)桿狀核粒細(xì)胞 中性(zhngxng)分葉核粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞共五十二頁 外周血各類白細(xì)胞的百分率及絕對(duì)值共五十二頁血涂片(t pin)的制備共五十二頁 五 注意事項(xiàng)：1.所制血膜片一定要均勻，厚薄適宜，頭、體、尾分明。2.玻片需清潔，血膜干透后才可固定染色。3.染色時(shí)間的長短與染液的濃度、室溫高低及有核細(xì)胞多少有關(guān)。染液濃度愈小、室溫愈低、細(xì)胞愈多、所需時(shí)間愈長。必要時(shí)可增加染液量或延長時(shí)間。4.染液不宜過少，以免蒸發(fā)干燥，導(dǎo)致染料沾著于血膜上不易沖掉。5.沖洗時(shí)不可先倒掉染液，應(yīng)讓流水從血膜一端緩緩將染液沖去，以免染料殘?jiān)?cn zh)附在血膜上。六 思考題：

11、 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的臨床意義？共五十二頁實(shí)驗(yàn)(shyn)四網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)共五十二頁一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?熟悉網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理(yunl)和測定方法，掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞參考值及臨床意義。二 實(shí)驗(yàn)原理： 網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，其胞質(zhì)中含有核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)新亞甲藍(lán)活體染色后呈淺藍(lán)或深藍(lán)色的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可區(qū)別于完全成熟的紅細(xì)胞。三 實(shí)驗(yàn)器材和試劑：顯微鏡、10g/l新亞甲藍(lán)染液，試管、載玻片、香柏油共五十二頁四 實(shí)驗(yàn)步驟：1. 取小試管1支加10g/l新亞甲藍(lán)染液1滴。2. 加入(jir)血液1滴于上述試管中，混勻。3. 室溫下放置1015分鐘后，取1滴制成血膜片。 4. 在低倍鏡下

12、選擇細(xì)胞分布均勻，著色清晰的部位，用油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。五 計(jì)算：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)/1000 六 參考值： 成人：0.005-0.015 (0.5%1.5%) 新生兒：0.03-0.06 (3% 6% )共五十二頁 七 注意事項(xiàng)：1.網(wǎng)織紅細(xì)胞必須用新鮮血液活體染色(rns)才能顯示，染液與血液的比例1：1為宜2. 血膜制備技術(shù)很重要。紅細(xì)胞應(yīng)均勻散開，如有重疊則影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。網(wǎng)織紅細(xì)胞體積較成熟紅細(xì)胞體積稍大，多分布于涂片的尾部及兩側(cè)，故進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)巡視整個(gè)血涂片中網(wǎng)紅細(xì)胞分布情況再進(jìn)行計(jì)數(shù)。3.染料配制前必須過濾，放置保存過程中應(yīng)防止有任何沉淀出現(xiàn)以影響

13、計(jì)數(shù)結(jié)果。4. 為便于計(jì)數(shù)，可使用米勒窺盤進(jìn)行計(jì)數(shù)。5.血液與染液混合時(shí)間必須足夠長。八 思考題：網(wǎng)織紅細(xì)胞的臨床意義？共五十二頁Miller窺盤為一厚1 mm，直徑19mm的圓形玻片，玻片上的微細(xì)刻線劃分成大小兩個(gè)正方形。B為小正方形，A為大正方形。B位于A之內(nèi)， 如附圖(f t)所示。其中B的邊長為A的邊長的13，故其面積為A的19。將Miller窺盤置于接目鏡內(nèi)檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞涂片。用小正方形（B）計(jì)數(shù)紅細(xì)胞,大正方形（A）計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù),再接下式計(jì)算:網(wǎng)織紅細(xì)胞 %= A格內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞/ （B格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)9 ）100% 共五十二頁實(shí)驗(yàn)(shyn)五凝血酶原時(shí)間（PT）測定凝血酶時(shí)間（T

14、T）測定共五十二頁一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆誔T,TT實(shí)驗(yàn)的原理、操作方法和臨床意義。二 實(shí)驗(yàn)原理： PT原理：在受檢血漿中加入足量的凝血活酶和鈣離子，測定血漿凝固所需的時(shí)間，即為血漿凝血酶原時(shí)間。本試驗(yàn)是外源性凝血系統(tǒng)常用的篩檢試驗(yàn)，此外，常利用本試驗(yàn)對(duì)口服抗凝劑治療進(jìn)行監(jiān)控(jin kn)。 TT原理：受檢血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)化的凝血酶溶液后，測定血漿凝固所需要的時(shí)間，即為血漿凝血酶時(shí)間，TT主要用于檢測血漿纖維蛋白原的減少或抗凝物質(zhì)的增多。三 實(shí)驗(yàn)試劑和器材：待測血漿、37度水浴箱、硅化試管、秒表、加樣槍、氯化鈣凝血活酶試劑、凝血酶溶液。共五十二頁四 實(shí)驗(yàn)步驟：PT: 取待測血漿0.1ml，37 孵育

15、3分鐘，加入(jir)37 預(yù)溫PT試劑0.2ml,記錄凝固時(shí)間，即為PT值。TT：取37 預(yù)溫待測血漿0.2mL,加入TT試劑0.2ml，記錄凝固時(shí)間，即為TT值。注意：TT試劑不需37 預(yù)溫，15-25 室溫直接使用。五 參考值：PT 10-14秒 TT 10-16秒共五十二頁六注意事項(xiàng)：1.采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，貯血必須使用塑料試管或硅化玻璃管。2血漿分離(fnl)后應(yīng)盡快測定。3血漿預(yù)溫不宜超過10分鐘。4凝血活酶預(yù)溫不可超過30分鐘。5待測血漿應(yīng)使用 0.109mo 1L枸櫞酸鈉抗凝。6手工操作時(shí)，凝血酶原和凝血酶時(shí)間的終點(diǎn)計(jì)算以出現(xiàn)混濁的 初期凝固為準(zhǔn)。 7

16、. 測定溫度365385，過低或過高溫度均使PT、TT延長。共五十二頁七 臨床意義：1.PT延長 ： 見于先天性凝血因子異常，如因子、缺乏癥；后天性凝血因子異常，如彌漫性血管內(nèi)凝血、原發(fā)性纖溶、維生素K缺乏癥、嚴(yán)重肝??；血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)，如口服抗凝劑、肝素和FDP等。 2PT縮短 :見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病、先天性因子增多癥、口服避孕藥等。3.TT延長：以DIC時(shí)纖維蛋白原消耗為多見，也有部分屬于先天性低（無）纖維蛋白原血癥、原發(fā)性纖溶及肝臟病變。也可見于肝素增多或類肝素抗凝物質(zhì)增多。 4.TT縮短：極為罕見，主要見于某些異常蛋白血癥或巨球蛋白血癥時(shí)，此外較多是技術(shù)原因，如標(biāo)本(biobn)

17、在4度環(huán)境中放置過久，組織液混入血漿等。共五十二頁實(shí)驗(yàn)(shyn)六尿常規(guī)檢查共五十二頁尿液的常規(guī)檢查包括：物理學(xué)檢查：尿量、氣味、顏色、透明度化學(xué)檢查：蛋白、糖、PH、酮體、尿膽紅素、尿膽原、尿亞硝酸鹽、尿隱血(ynxu)、白細(xì)胞、比密、維生素C尿沉渣（顯微鏡）檢測：尿液細(xì)胞、管型、結(jié)晶、上皮等一般性狀檢查：1、尿量： 正常尿量 1000-2000ml/24hr平均1500ml 少尿：400ml/24hr或持續(xù)17ml/hr 無尿：2500ml/24hr共五十二頁2.尿液外觀：正常(zhngchng)尿的顏色：多為澄清透明至淡黃色或琥珀色，顏色常受食物、藥物、尿色素（尿膽原、尿膽素、尿卟啉）

18、的影響。病理性尿液外觀1.血尿：尿中含有一定量紅細(xì)胞，可呈淡紅色云霧狀、水洗肉樣（量少時(shí)）、紅色血凝塊（量多時(shí)）。2.肉眼血尿：每升尿中含血量超過1ml，即可出現(xiàn)淡紅色。3. 顯微鏡血尿：尿外觀無明顯變化，離心沉淀后鏡檢，平均3RBC/Hp4.血紅蛋白尿 ：可使尿液呈濃茶色、紅葡萄酒色或醬油色。隱血試驗(yàn)為陽性（正常尿液試驗(yàn)隱血為陰性）血紅蛋白尿：見于嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血：陣發(fā)性血紅蛋尿、蠶豆病、血型不合的輸血反應(yīng)。共五十二頁5.膽紅素尿：尿就中含有(hn yu)大量結(jié)合膽紅素，呈豆油樣改變，振蕩后出現(xiàn)黃色的泡沫且不易消失。 常見：阻塞性黃膽和肝細(xì)胞性黃疸。6.膿尿和菌尿：新鮮排出的尿液呈白色混濁（

19、膿尿）或云霧狀（菌尿）加熱加酸不溶解，內(nèi)含膿細(xì)胞、炎性滲出物或細(xì)菌。 常見：泌尿道感染：腎盂腎炎、膀胱炎尿中紅細(xì)胞尿中白細(xì)胞共五十二頁膿細(xì)胞(xbo)共五十二頁7.乳糜尿和脂肪尿：乳糜尿：乳糜液逆流進(jìn)尿中所致外觀呈不同程度乳白色，當(dāng)含有較多血液時(shí)呈乳糜血尿。常見：腫瘤、結(jié)核、絲蟲病及周圍淋巴管梗阻。 脂肪尿：尿中出現(xiàn)脂肪小滴。常見：脂肪擠壓損傷、骨折、腎病綜合征，可通過乙醚(y m)等有機(jī)溶劑提取乳糜顆粒、脂肪小粒使尿液變清，可與其他混濁尿鑒別。氣味：來自尿中的揮發(fā)性酸和酚類，新鮮的尿特殊微弱芳香氣味氨臭味：久置尿、但尿液新鮮時(shí)可為慢性膀胱炎、慢性尿潴溜蘋果樣氣味：糖尿病、酮癥酸中毒蒜臭味：有

20、機(jī)磷中毒進(jìn)食蔥、韭菜、蒜和某些藥物可呈相應(yīng)氣味。共五十二頁干化學(xué)(huxu)檢查共五十二頁試劑帶原理絨制層：包括碘酸鹽層和試劑層：碘酸鹽層：可以破壞維生素C等干擾物質(zhì)，試劑層：含有試劑成分(chng fn)，主要與尿液中測定物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化；吸水層：可使尿液均勻快速的浸入，并能抑制尿液流到相鄰的反應(yīng)區(qū)；塑料底層：作支持體。共五十二頁各項(xiàng)目測定(cdng)原理項(xiàng)目 縮寫符號(hào) 反應(yīng)原理 PH PH PH指示劑（甲基紅和溴麝香草酚蘭） 蛋白質(zhì) PRO PH指示劑的蛋白質(zhì)誤差法 葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶法 隱血 BLD Hb類過氧化酶法 共五十二頁各項(xiàng)目(xingm)測定原理項(xiàng)目 縮

21、寫符號(hào) 反應(yīng)原理 膽紅素 BIL 偶氮反應(yīng)法 尿膽原 URO 醛反應(yīng)法，重氮反應(yīng)法 酮體 KET 硝基鐵氫化鈉法 亞硝酸鹽 NIT 亞硝酸鹽還原法 白細(xì)胞 LEU 脂酶法 比密 D(SG) 多聚電解質(zhì)離子解離法 共五十二頁 尿沉渣（顯微鏡）檢測 尿液沉渣檢測是對(duì)尿液離心沉淀物中有形成分的鑒定。 傳統(tǒng)的尿液沉渣檢測：顯微鏡對(duì)尿液沉渣進(jìn)行定性、定量檢查及有形成分的記數(shù)。 現(xiàn)在用尿液分析儀、尿沉渣分析儀。對(duì)有形成分檢測細(xì)胞、管型和結(jié)晶(jijng)等進(jìn)行自動(dòng)檢測。 尿沉渣檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法： 取新鮮混勻的尿液10ml于離心管內(nèi)，以1500rmin離心5min，棄去上清液，留取0.2ml沉渣液，混勻后用下列方法檢查： 玻片法：尿沉渣定量分析板法：本法是用特制的尿沉