人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2(MIP-2)試劑盒使用建議

1、人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）試劑盒使用建議本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍： 96T15pg/ml-400pg/ml使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）水平。用純化的人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2），再與HRP標(biāo)記的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)

2、化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）濃度。 試劑盒組成 130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6ml1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（800pg/ml）0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液6ml1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求 1 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20保存，但

3、應(yīng)避免反復(fù)凍融2 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。400pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔

4、、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。 溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：

5、以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8