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文檔簡介
1、word課時跟蹤檢測(四十一)基因工程1.(2017 高考)為了增加菊花花色類型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。&oR I EsH 下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖?()A.用限制性核酸內(nèi)切酶 EcoRI和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B.用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞C.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D.用分子雜交方法檢測 C基因是否整合到菊花染色體上解析:選C目的基因C和質(zhì)粒都有可被 EcoRI切割的酶切位點(diǎn),另外需要DNAi1接酶 將切好的目的基因和質(zhì)粒連接起來; 愈傷組織全能性較高, 是理想的植物受體細(xì)胞
2、, 將目的 基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞的方法通常為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因,因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)該加入潮霉素;使用分子雜交方法可檢測目的基因是否整合到受體染色體上。(2014 某某高考)下圖為利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關(guān)敘述,正B.侵染植物細(xì)胞后,重組 Ti質(zhì)粒整合到的染色體上C.的染色體上若含抗蟲基因,則就表現(xiàn)出抗蟲性狀D.只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異解析:選D構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到限制性核酸內(nèi)切酶和DNA1接酶,不需要 DNAm合酶,含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后,重組Ti質(zhì)粒的T-DNA整合到受體細(xì)胞的染色體上,而不是重組 Ti質(zhì)粒整合到受體細(xì)胞的
3、染色體上,導(dǎo)入受體細(xì)胞的目的基因表達(dá)后, 轉(zhuǎn)基因植株方能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀,若目的基因在受體細(xì)胞中不表達(dá),轉(zhuǎn)基因植株不能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀,表現(xiàn)出抗蟲性狀則表明該植株細(xì)胞發(fā)生了基因重組,基因重組是可遺傳變異。(2014 某某高考)下列關(guān)于“ DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述,錯誤的是()wordA.酵母和菜花均可作為提取 DNA勺材料B. DN幽溶于2 mol/L NaCl 溶液也溶于蒸儲水C.向雞血細(xì)胞液中加蒸儲水?dāng)嚢?,可見玻棒上有白色絮狀物D. DN崎液加入二苯胺試劑沸水浴加熱,冷卻后變藍(lán)解析:選C 含DNA勺生物材料都可用來提取DNA只是選用DNA含量高的生物組織,成功的可能性更大;DNA在2
4、mol/L NaCl溶液和蒸儲水中溶解度都較大;向雞血細(xì)胞液中DNA DNA溶液加入二苯胺試加蒸儲水?dāng)嚢?,雞血細(xì)胞會吸水破裂,但在蒸儲水中不會析出 劑后需沸水浴加熱,待冷卻后溶液變藍(lán)。(2019 某某模擬)下面為“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的一些重要操作示意圖,據(jù)圖回答下列有關(guān)該實(shí)驗(yàn)的問題:h2 mnl/L Na門溶悔學(xué)戲淌精 &析出較純寸力的能狀液NaCl溶液勢狀物(1)正確的操作順序是 (2)上圖C、E步驟都加入蒸儲水,但其目的不同,分別是 和圖A步驟中所用酒精必須經(jīng)過 才能使用,該步驟的目的是(4)為鑒定A中所得到的絲狀物的主要成分為DNA可?B口 試劑,沸水浴,如果出現(xiàn),則該絲狀物的主
5、要成分為DNA解析:兩次加入蒸儲水的作用:第一次是使雞血細(xì)胞吸水漲破,DNA從細(xì)胞中釋放出來進(jìn)入濾液;第二次是使溶解于物質(zhì)的量濃度為2 mol/L的NaCl溶液中的DNAW出,與雜質(zhì)分離。本題還涉及 DNA勺鑒定,DNA可在沸水浴條件下與二苯胺試劑作用,被染成藍(lán)色。答案:(1)C-B- A A(2)加速雞血細(xì)胞的破裂降低NaCl溶液的濃度,使 DNA析出(3)充分冷卻提取含雜質(zhì)少的DNA (4)二苯胺藍(lán)色(2019 某某模擬)科學(xué)家通過利用 PCR點(diǎn)突變技術(shù)改造 Rubisco酶基因,提高了光合作用過程中 Rubisco酶基因?qū)O的親和力,從而顯著提高了植物的光合速率。請回答word下列問題
6、:(1)PCR過程所依據(jù)的原理是 ,該過程需要加入的酶是 。利用PCFa術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核甘酸序列,以便根據(jù)這一序列合成 。(2)該技術(shù)不直接改造 Rubisco酶,而是通過 Rubisco酶基因進(jìn)行改造,從而實(shí)現(xiàn)對 Rubisco酶的改造,其原因是 。和傳統(tǒng)基因工程技術(shù)相比 較,定點(diǎn)突變最突出的優(yōu)點(diǎn)是獲得的產(chǎn)物一般是自然界中 (填“存在的”或“不存 在白T ), pc臉點(diǎn)突變技術(shù)屬于 工程的X疇。(3)可利用定點(diǎn)突變的 DNA勾建基因表達(dá)載體,常用 法將基因表 達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞,將該細(xì)胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成幼苗,從細(xì)胞水平分析所依據(jù)的原理是。解析:(1)PC
7、R過程所依據(jù)的原理是 DNAZ鏈復(fù)制,該過程需要加入的酶是耐高溫的DNA聚合酶。利用PCRa術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核甘酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物。(2)該技術(shù)不直接改造 Rubisco酶,而是通過對 Rubisco酶基因進(jìn)行 改造,從而實(shí)現(xiàn)對Rubisco酶的改造,其原因是蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜,改造困難。和傳 統(tǒng)基因工程技術(shù)相比較,定點(diǎn)突變最突出的優(yōu)點(diǎn)是獲得的產(chǎn)物一般是自然界中不存在的,PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程的X疇。(3)可利用定點(diǎn)突變的 DNA勾建基因表達(dá)載體,常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞,將該細(xì)胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成幼苗,從細(xì)胞水平
8、分析所依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性。答案:(1)DNA雙鏈復(fù)制 耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)引物(2)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu) 較為復(fù)雜,改造困難不存在的 蛋白質(zhì) (3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的全能性(2017 全國卷I )真核生物基因中通常有內(nèi)含子,而原核生物基因中沒有,原核生 物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。已知在人體中基因A(有內(nèi)含子)可以表達(dá)出某種特定蛋白(簡稱蛋白A)?;卮鹣铝袉栴}:(1)某同學(xué)從人的基因組文庫中獲得了基因A,以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白A,其原因是。(2)若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體,在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中,不選用作為載體,其原因是。(3
9、)若要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。因?yàn)榕c家蠶相比,大腸桿菌具有(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。(4)若要檢測基因A是否翻譯出蛋白 A,可用的檢測物質(zhì)是 (填“蛋白Aword的基因”或“蛋白 A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DNA遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn),也可以說是基因工程的先導(dǎo),如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示,那么,這一啟示是解析:(1)人為真核生物,從人的基因組文庫中獲取的基因A含有內(nèi)含子,基因 A轉(zhuǎn)錄出的產(chǎn)物中有與內(nèi)含子對應(yīng)的RN際列。大腸桿菌為原核生物,沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列的機(jī)制,因此以大腸桿菌作為受體細(xì)胞,不能切除內(nèi)
10、含子對應(yīng)的RNA序列,無法表達(dá)出蛋白 Ao (2)噬菌體和動物病毒均可作為基因工程的載體,但它們的宿主 細(xì)胞不同。題中受體為家蠶,是一種昆蟲,因此,選擇昆蟲病毒作為載體,噬菌體的宿主是 細(xì)菌,不適合作為該實(shí)驗(yàn)的載體。(3)大腸桿菌具有繁殖快、容易培養(yǎng)、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn),因此,常作為基因工程的受體細(xì)胞。(4)常用抗原一抗體雜交的方法檢測目的基因是否表達(dá),故能用于檢測蛋白A的物質(zhì)為蛋白A的抗體。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,S型菌的DNA專移到了 R型菌體內(nèi),其對基因工程理論的建立提供的啟示是DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體。答案:(1)基因A有內(nèi)含子,在大腸桿菌中,
11、其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列不能被切除,無法表達(dá)出蛋白 A (2)噬菌體 噬菌體的宿主是細(xì)菌,而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(yǎng) (4)蛋白A的抗體 (5)DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體(2017 全國卷出節(jié)選)編碼蛋白甲的 DNA列(序列甲)由A B、C、 D E五個片段組成,編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成,如 圖所示?;卮鹣铝袉栴}:(1)現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙,若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的 DN際列(TTCGCTTGTCAGGAAGGA)則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白 乙,原因是。(2)某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段
12、B或D的過程中,在 PCR反應(yīng)體系中加入了 DNA 聚合酶、引物等,還加入了序列甲作為 ,加入了 作為合成DNA的原料。解析:(1)若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的 DNA序列 (TTCGCTTCTCAGGAAGGA)U轉(zhuǎn)錄出的mRNAh缺少起始密碼子,故不能翻譯出蛋白乙。(2)使用PC破術(shù)獲取DNM段時,應(yīng)在 PCR應(yīng)體系中添加引物、耐高溫的DNA聚合酶、模板、dNTP作為原料。答案:(1)編碼乙的DN附列起始端無 ATG(TAC),轉(zhuǎn)錄出的mRNAB起始密碼子(2)模word板 dNTP0兌氧核甘酸)(2018 某某一模)真核生物基因中通常含有內(nèi)含子,而原核生物基因中沒有,原核生物沒有
13、真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的RN際列的機(jī)制。如圖表示從基因文庫提取胰島素基因的過程?;卮鹣铝袉栴}:技卷企用器素- 基因的受體菌整因表達(dá)載悻情需出現(xiàn)效交帶用呼標(biāo)注的 探計條支DNA培養(yǎng)璉卜的菌落(1)從基因結(jié)構(gòu)分析,與基因組文庫中的基因相比,cDNA文庫中獲得的目的基因少了等結(jié)構(gòu)(至少寫兩個)。(2)將獲得的胰島素基因?qū)胧荏w菌內(nèi),并在受體菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,在基因 工程中稱為。(3)過程需將纖維素膜上的細(xì)菌裂解, 釋放出 ,再用32P標(biāo)記的 作為探針進(jìn)行雜交。依據(jù)雜交結(jié)果,應(yīng)選取培養(yǎng)基上 (填字母)菌落繼續(xù)培養(yǎng),才能獲得 含有胰島素基因的受體菌。(4)經(jīng)過目的基因的檢測和表達(dá),從大腸
14、桿菌中獲得的“胰島素”未能達(dá)到期待的生物 活性,導(dǎo)致這種差異的原因可能是 。(5)與從基因組文庫獲取目的基因相比,圖示方法獲得的目的基因在受體菌中更容易表 達(dá),原因是解析:(1)cDNA文庫是由mRN嵌逆轉(zhuǎn)錄而來,成熟的 mRNAB經(jīng)切除了內(nèi)含子對應(yīng)的堿 基序列,且mRNAF含有啟動子、終止子對應(yīng)的堿基序列, 因此cDNAC庫中獲得的目的基因 少了啟動子、終止子、內(nèi)含子等結(jié)構(gòu)。(2)將獲得的胰島素基因?qū)胧荏w菌內(nèi),并在受體菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,在基因工程中稱為轉(zhuǎn)化。(3)過程用32P標(biāo)記的目的基因(或胰島素基因)單鏈作為探針檢測受體菌中是否含有目的基因,首先需將纖維素膜上的細(xì)菌裂解,釋放出
15、DNA培養(yǎng)基上a菌落對應(yīng)位置出現(xiàn)雜交帶,說明a菌落是由含有胰島素基因的受體菌形成的。(4)大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器,無法對核糖體合成的肽鏈進(jìn)行有效的折疊、加工,所以從大腸桿菌中獲得的“胰島素”未能達(dá)到期待的生物活性。 (5)cDNAword文庫中獲得的目的基因沒有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄出的RNA不需要經(jīng)過加工,可直接作為合成蛋白質(zhì)的模板,所以在受體菌中更容易表達(dá)。答案:(1)啟動子、終止子、內(nèi)含子 (2)轉(zhuǎn)化 (3)DNA 目的基因(或胰島素基因)a (4)受體菌中基因表達(dá)獲得的蛋白質(zhì)未加工(5)cDNA中不含有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄出的 RNA不需要經(jīng)過加工,可直接作為合成蛋白質(zhì)的模板(2019
16、某某調(diào)研)科學(xué)家將擬南芥的抗寒基因(CBF),轉(zhuǎn)入香蕉以獲得抗寒的香蕉 品種。如圖是某質(zhì)粒載體上的 Saci、Xbal、EccRl、Hind出四種限制酶的切割位點(diǎn)示意 圖。據(jù)圖回答問題:用”鼠芾青零_ _ 素余勝基因/inrf III(1)在該實(shí)驗(yàn)中為構(gòu)建基因表達(dá)載體,用Sacl、Xbal切下CBFl基因后,對質(zhì)粒載體進(jìn)行切割的限制酶是 ,理由是。(2)連接CBFl基因到該質(zhì)粒載體后,作為基因表達(dá)載體的組成還必須有。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入香蕉細(xì)胞最常用的方法(3)為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有CBFl基因,可用含 的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。(4)科學(xué)家將生長健壯、苗齡一致的轉(zhuǎn)基因香蕉(實(shí)驗(yàn)組)與非轉(zhuǎn)基因香蕉(對照
17、組)進(jìn)行處理,鑒定兩組之間的抗寒性差異,如果,則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種。解析:(1)在基因工程中,用相同限制酶切割來源不同的DN斫,可產(chǎn)生相同的末端,所以和含目的基因的 DNA一樣,質(zhì)粒也應(yīng)使用 Sacl、Xbal進(jìn)行切割。(2)基因表達(dá)載體的 組成包括啟動子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因等。香蕉細(xì)胞是植物細(xì)胞,將目的基因?qū)?植物細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(3)據(jù)圖分析可知,質(zhì)粒上的標(biāo)記基因是氨茉青霉素抗性基因, 所以為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有CBFl基因,可用含氨茉青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。(4)根據(jù)題干信息已知目的基因是抗寒基因,所以科學(xué)家將生長健壯、 苗齡一致的轉(zhuǎn)基因香蕉(實(shí)驗(yàn)組)與非轉(zhuǎn)
18、基因香蕉(對照組)進(jìn)行低溫處理,鑒定兩組之間的抗寒性差異,如果實(shí)驗(yàn)組的 抗寒能力明顯高于對照組,則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種。答案:(1) Sacl、Xbal 用相同限制酶切割來源不同的DN斫,可產(chǎn)生相同的末端(2)啟動子和終止子農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(3)氨茉青霉素(4)低溫實(shí)驗(yàn)組的抗寒能力明顯高于word對照組10.(2019 某某模擬)某生物興趣小組開展DNA1提取的相關(guān)探究活動。具體步驟如下:材料處理:稱取新鮮的菜花、辣椒和蒜黃各2份,每份10 g o剪碎后分成兩組,一組置于20 C,另一組置于20 c條件下,保存24 h 。DNA1提取:第一步:將上述材料分別放入研缽中,各加入15 mL研磨
19、液,充分研磨。用兩層紗布過濾,取濾液備用。第二步:先向6只小燒杯中分別注入 10 mL濾液,再加入20 mL體積分?jǐn)?shù)為95%勺冷酒精溶液,然后用玻璃棒緩緩地向一個方向攪拌,使絮狀物纏繞在玻璃棒上。第三步:取6支試管,分別加入等量的 2 mol/L的NaCl溶液溶解上述絮狀物。DNA檢測:在上述試管中各加入 4 mL二苯胺試劑?;旌暇鶆蚝螅糜诜兴屑訜? min ,待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺,結(jié)果如表所示:材料保存溫度菜花辣椒蒜黃20 C+ + + +-20 C+ + + + + + +注:“ 十 ”越多表示藍(lán)色越深。分析上述實(shí)驗(yàn)過程,回答下列問題:(1)該探究性實(shí)驗(yàn)課題名稱是 。(2)第
20、二步中“緩緩地”攪拌, 這是為了減少(3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,得出結(jié)論并分析。結(jié)論1:與20 c相比,相同實(shí)驗(yàn)材料在20 c條件下保存,DNA的提取量較多。結(jié)論2: 。針對結(jié)論1,請?zhí)岢龊侠淼慕忉專?。(4)氯仿密度大于水,能使蛋白質(zhì)變性沉淀,與水和DNA勻不相溶,且又DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高 DNA屯度,依據(jù)氯仿的特性,在DNAfi提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是:然后用體積分?jǐn)?shù)為 95%勺冷酒精溶液使DN麗出。解析:(1)從題目實(shí)驗(yàn)步驟看出,該實(shí)驗(yàn)的課題是探究不同材料和不同保存溫度對DNA提取量的影響。(2)在第二步中,為了防止DNA1裂,要用玻璃棒“緩緩地”攪拌。(3)從題表中結(jié)果看出
21、,相同材料在低溫保存下的DN碾取量大,這是由于低溫抑制了相關(guān)酶的活性,wordDNA條解速度慢;在相同條件下,蒜黃組藍(lán)色最深,說明相同條件下從蒜黃中提取的DNA量最大。(4)由于氯仿密度比水大,可使蛋白質(zhì)變性沉淀,而與水和DNA勻不相溶,故可將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合,靜置一段時間,吸取上清液。答案:(1)探究不同材料和不同保存溫度對DNA提取量的影響(2)DNA斷裂 (3)等質(zhì)量的不同實(shí)驗(yàn)材料, 在相同的保存溫度下, 從蒜黃中提取的DNA!最多 低溫抑制了相 關(guān)酶的活性,DNA降解速度慢 (4)將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合,靜置一段 時間,吸取上清液11.干擾素是動物或
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