《動(dòng)物傳染病學(xué)（豬?。氛n件4-3(13)豬繁殖與呼吸綜合征

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS） 蔡旭旺 農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室204 電 話QQ:2532609832 E-mail： 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），又稱藍(lán)耳病。1987年，最早發(fā)現(xiàn)于美國(guó)“神秘病”。1991年，荷蘭首次分離病毒（LV株）。1992年，OIE統(tǒng)一命名為豬繁殖與呼吸綜合征。1996年，國(guó)內(nèi)郭寶清首次分離CH-1a株。目前，PRRS遍及全球主要養(yǎng)豬國(guó)家和地區(qū)。1. 概述豬繁殖與呼吸綜合征的危害PRRSV感染主要導(dǎo)致：母豬：早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、弱仔。公豬：精液品質(zhì)

2、下降。初生仔豬：高死亡率。其它年齡豬：呼吸系統(tǒng)疾病。1991年，歐洲大面積暴發(fā)PRRS，導(dǎo)致至少100萬(wàn)頭豬死亡。1996年，丹麥再次暴發(fā)PRRS，全國(guó)4050%母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎，哺乳仔豬大量死亡。2000年，美國(guó)農(nóng)業(yè)部將PRRS列為最嚴(yán)重的豬病毒性傳染病。在我國(guó)，PRRS廣泛存在，并且還呈流行態(tài)勢(shì)。2. 病原學(xué)PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科，動(dòng)脈炎病毒屬。病毒粒子大小約5065nm，核衣殼3035nm，氯化銫的浮力密度為1.19。病毒對(duì)溫度、酸堿度敏感，70和20可保存幾月到幾年，在pH6.57.5時(shí)穩(wěn)定。對(duì)脂溶劑去污劑敏感，不凝集紅細(xì)胞（日本2株例外）。PRRSV電子顯微鏡結(jié)構(gòu)圖2.1 PR

3、RSV基因型分為2個(gè)不同的基因型（genotype）：歐洲基因型（簡(jiǎn)稱A群）：以歐洲原型病毒LV株為代表。美洲基因型（簡(jiǎn)稱B群）：以美國(guó)原型病毒ATCC VR-2332株為代表。2.2 PRRSV細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞：豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAM），豬脾巨噬細(xì)胞、腦小膠質(zhì)細(xì)胞。傳代細(xì)胞：比PAM更常用，如非洲綠猴腎細(xì)胞MA-104及在MA-104基礎(chǔ)上克隆得到的Marc-145、 CL-2621、CRL11171等細(xì)胞。Marc-145細(xì)胞形態(tài)特征正常細(xì)胞 病變細(xì)胞2.3 PRRSV基因組結(jié)構(gòu) 單股正鏈RNA，約15kb。G+C含量約53%。9個(gè)開放閱讀框（ORF），相鄰ORF部分重疊。5NCR（非編碼

4、區(qū)）長(zhǎng)約200nt，高度保守（99%）。3NCR長(zhǎng)約114151nt，3末端有一個(gè)長(zhǎng)約1423nt的Poly（A）序列。 2.4 PRRSV基因組功能 ORF1（ORF1a和ORF1b）位于基因組的5端，約占病毒基因組的80%，編碼與病毒復(fù)制有關(guān)的酶類如RdRp（RNA依賴性RNA聚合酶）等。ORF27位于基因組的3端，總長(zhǎng)約3kb，分別編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白GP2、E蛋白、GP3、GP4、GP5、M蛋白、N蛋白。1a1b2a3456715 kb 1: RNA replicase 5: GP5 (25kDa) 2: GP2 (2930kDa) 6: Matrix (19kDa) 3: GP3 (4

5、550kDa) 7: Nucleocapsid (15kDa) 4: GP4 (3135kDa)PRRSV基因組結(jié)構(gòu) E2.5 PRRSV蛋白 非結(jié)構(gòu)蛋白（ORF1編碼），為病毒復(fù)制有關(guān)的酶類如RdRp等。結(jié)構(gòu)蛋白（ORF27編碼）主要結(jié)構(gòu)蛋白：GP5、M蛋白、N蛋白。GP5誘導(dǎo)中和抗體, M蛋白是細(xì)胞免疫原性最強(qiáng)的蛋白，N蛋白為體液免疫原性最強(qiáng)的蛋白。次要結(jié)構(gòu)蛋白：GP2、GP3、GP4。PRRSV結(jié)構(gòu)模式圖 GP5 (ORF5)M protein (ORF6)GP2, GP3, or GP4(ORF2, 3, 4)N protein (ORF7)ssRNA(+)Lipid bilayerA

6、AA3. 流行病學(xué)傳染源：感染豬和康復(fù)豬是主要的傳染源。病豬在康復(fù)后3個(gè)月內(nèi)可持續(xù)排毒，通過眼鼻分泌物、胎兒及子宮，甚至公豬的精液排出病毒。母豬：通過分泌物（乳汁等）向外排毒。公豬：通過精液散毒期因豬的品種不同而不同， 約克夏312d，長(zhǎng)白豬2478d，漢普夏介于兩者之間。 注意：在引種時(shí)對(duì)PRRS應(yīng)引起高度重視。傳播途徑 ：水平傳播：主要通過呼吸道或通過公豬的精液經(jīng)生殖道在同群豬間進(jìn)行。垂直傳播：母仔間傳播，通過胎盤先天感染。傳播類型：畜群內(nèi)的傳播：一旦感染，PRRSV就會(huì)在畜群中無(wú)限循環(huán)。據(jù)生產(chǎn)者和獸醫(yī)工作者的報(bào)道，很難在一個(gè)畜群中同時(shí)清除PRRSV。 畜群間的傳播：已知的畜群間傳播的病毒

7、來(lái)源有已受感染的病毒攜帶者和使用PRRSV污染的精液和物品等。傳播媒介：鳥類（如野鴨）：亞臨床感染，長(zhǎng)距離傳播?？諝猓猴L(fēng)媒傳播在本病流行中具有重要意義，可使本病在3km以內(nèi)的農(nóng)場(chǎng)中傳播。蚊蟲與蒼蠅：美國(guó)明尼蘇達(dá)州立大學(xué)豬病控制中心（SDEC）研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV在蚊蟲和蒼蠅腸道內(nèi)分別可存活6h和12h，它們能機(jī)械傳播PRRSV，使PRRS的防制更加困難。易感動(dòng)物：各種年齡豬對(duì)PRRSV均具有易感性。野鴨在實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)PRRSV有易感性，在感染后524天可以從糞便排毒但自身不發(fā)病，可能為貯存宿主。目前尚未發(fā)現(xiàn)其它動(dòng)物有易感性。傳播十分迅速，24周即可蔓延，傳播速度隨風(fēng)而定，呈明顯的跳躍式。低溫，

8、密集飼養(yǎng)，空氣污濁，賊風(fēng)有利于發(fā)病。病毒傳染性強(qiáng)（少于10個(gè)病毒顆粒就能建立感染），傳播途徑多（口、鼻、肌肉、交配等，還可經(jīng)胎盤先天感染，垂直傳播）。豬繁殖與呼吸綜合征的流行特點(diǎn)群內(nèi)傳播，一經(jīng)感染動(dòng)物長(zhǎng)期帶毒，群內(nèi)無(wú)限期循環(huán)，母源抗體對(duì)仔豬保護(hù)期短。保育豬感染后生長(zhǎng)迅速下降5070%，死亡率上升1025%。群間傳播，引進(jìn)帶毒豬、精液占70%以上，20%以上其它污染物，氣溶膠傳播是非接觸性區(qū)域傳播原因，傳播距離一般為50m之內(nèi)。4. 臨床癥狀因毒株、豬群免疫狀態(tài)、飼養(yǎng)管理因素的不同，臨床表現(xiàn)有很大差異。強(qiáng)毒引起的流行性（非免疫豬群）：厭食、發(fā)熱、呼吸困難、早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊及大小不一的弱仔

9、，斷奶時(shí)死亡率高。第一期母豬可發(fā)生在妊娠的21109天，少數(shù)死亡。第二期始于發(fā)病1周后，產(chǎn)生后期繁殖障礙，580%母豬在100118天懷孕期繁殖失敗。公豬急性期除厭食、嗜睡和呼吸癥狀外，還出現(xiàn)乏力、精液質(zhì)量下降等。哺乳豬斷奶前死亡率可高達(dá)60%，仔豬有多種癥狀，而眼瞼和結(jié)膜水腫具有特征性，繼發(fā)細(xì)菌感染增加。斷奶和生長(zhǎng)豬：不吃嗜睡、呼吸困難、皮膚充血發(fā)紺，其它地方流行性疾病發(fā)病率升高，使死亡率可達(dá)1020%。 地方流行豬群（已感染豬群）：主要表現(xiàn)在斷奶豬和生長(zhǎng)豬，種群主要在后備母豬和替換公豬。PRRS臨床差異很大，沒有任何一個(gè)癥狀恒有。藍(lán)耳?。耗肛i流產(chǎn)。藍(lán)耳?。毫鳟a(chǎn)死胎。藍(lán)耳?。喝踝?、死胎和木乃

10、伊胎。藍(lán)耳病：死胎和木乃伊胎。藍(lán)耳病：流產(chǎn)死胎。藍(lán)耳?。鹤胸i呼吸困難。藍(lán)耳?。翰∝i臥地不起。藍(lán)耳?。翰∝i耳部皮膚嚴(yán)重發(fā)紺，呈“藍(lán)耳”癥狀。藍(lán)耳?。翰∝i耳部皮膚嚴(yán)重發(fā)紺，呈“藍(lán)耳”癥狀。5. 病理變化間質(zhì)性肺炎，肺呈“胸腺樣”和肝樣。淋巴結(jié)的輕度或中度腫大。流產(chǎn)胎兒出現(xiàn)動(dòng)脈炎心肌炎和腦炎，以血管周圍出現(xiàn)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征。藍(lán)耳病：間質(zhì)性肺炎。藍(lán)耳?。洪g質(zhì)性肺炎。藍(lán)耳?。悍窝撞∽?，顯示出血性炎癥。藍(lán)耳?。毫馨徒Y(jié)腫大、水腫。藍(lán)耳?。毫馨徒Y(jié)腫大、水腫。2006年我國(guó)大部分省市暴發(fā)流行高致病性藍(lán)耳病。高致病性PRRS的臨床特點(diǎn)大小豬只均發(fā)病，表現(xiàn)高熱（4142），昏睡，呼吸困難，育肥豬以及一些

11、感染懷孕母豬也發(fā)病死亡。仔豬發(fā)病率達(dá)100%，死亡率50%以上，母豬流產(chǎn)率30%以上。腦部海馬區(qū)大量血管的管壁細(xì)胞腫大增生，胃部有出血和潰瘍。6. 診斷方法臨床診斷：初步診斷（可能）實(shí)驗(yàn)室診斷：確診病原檢測(cè)病毒分離. 很少應(yīng)用病毒蛋白檢測(cè). 很少應(yīng)用病毒核酸檢測(cè). 最常用 抗體檢測(cè) 血清中和試驗(yàn) (SN). 較少應(yīng)用 間接熒光抗體試驗(yàn) (IFA). 很少應(yīng)用 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA). 最常用免疫過氧化物酶單層試驗(yàn) (IPMA). 很少應(yīng)用病毒分離： 準(zhǔn)確，但病料的采集極為重要，因周期長(zhǎng)極少用于診斷。采集病料：死胎或活產(chǎn)仔豬：肺、心、腦、腎、肝和脾等。懷孕后期流產(chǎn)胎兒：胎兒血清，肺等。

12、哺乳仔豬、斷奶仔豬和育肥豬：最好采集肺，也可用脾、腦、扁桃體等，母豬可用血清、血漿。注意：木乃伊胎兒、公豬精液不能用于病毒分離。6.1 病原學(xué)檢測(cè)病毒抗原（蛋白）檢測(cè)：免疫組織化學(xué)技術(shù)。免疫熒光抗體染色技術(shù)。雙抗夾心ELISA。病毒核酸（RNA）檢測(cè)：反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）：在診斷中得到廣泛應(yīng)用，但費(fèi)用較貴。核酸探針雜交技術(shù)：因繁瑣，很少應(yīng)用。6.2 血清學(xué)檢測(cè)免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA） 歐洲國(guó)家，細(xì)胞培養(yǎng)，結(jié)果判定有一定的主觀性，不能自動(dòng)顯示，費(fèi)時(shí)，應(yīng)用不廣泛。間接熒光抗體試驗(yàn)（IFA） 北美，與IPMA具有相同的特異性和敏感性，血清抗體效價(jià)1:20判為陽(yáng)性。檢測(cè)結(jié)果不

13、能自動(dòng)顯示，不適合大規(guī)模檢疫，結(jié)果判定有一定的主觀性，應(yīng)用不廣泛。血清中和試驗(yàn)（SN） 特異性好，46周才出現(xiàn)中和抗體，顯然SN不適宜于PRRS的早期診斷。但Yoon等（1994）對(duì)常規(guī)SN進(jìn)行改良，在試驗(yàn)中加入20%豚鼠血清以增加補(bǔ)體的含量，提高SN的敏感性（911d），可檢測(cè)到SN抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）首次用于PRRSV抗體檢測(cè)： Albina等（1992），PAM，PRRSV抗原。改進(jìn)ELISA： （1）Takikawa等（1996），MARC-145細(xì)胞，PRRSV抗原（全病毒）。 （2）美國(guó)IDEXX公司， PRRSV全病毒。 （3）基因工程表達(dá)的PRRSV單一蛋白，國(guó)

14、內(nèi)外均用重組N蛋白建立ELISA。7. 防制平時(shí)預(yù)防：引進(jìn)種豬應(yīng)隔離飼養(yǎng)30天，進(jìn)行兩次血清學(xué)檢查，陰性者方可混群。一旦證明感染則所有引進(jìn)豬均應(yīng)處理掉。同時(shí)執(zhí)行一般衛(wèi)生防疫措施，防止病原傳入。發(fā)病豬場(chǎng)：哺乳仔豬提前斷奶。母仔隔離飼養(yǎng)。育成豬全進(jìn)全出。免疫預(yù)防。滅活苗：滅活苗免疫豬后，可以刺激豬產(chǎn)生針對(duì)ORF5、ORF6、ORF7所編碼的蛋白的抗體，而且減少病毒血癥的發(fā)生，可有效地阻止肺部病變。因此，PRRSV滅活苗能為豬提供安全、有效的保護(hù)。弱毒苗：對(duì)PRRS流行區(qū)的保育舍豬和哺乳仔 豬有明顯的保護(hù)作用。7.1 豬繁殖與呼吸綜合征的防制難點(diǎn)PRRSV變異速度快：歐洲型和美洲型毒株核苷酸序列同源

15、性僅60%左右，同型不同毒株的同源性也不高。PRRSV基因序列的進(jìn)化率（10-2/位/年）明顯高于其它RNA病毒（10-3-5 /位/年）。PRRSV的變異分布于整個(gè)基因組，但以Nsp2基因和ORF5基因變異最大。持續(xù)性感染：PRRSV的持續(xù)性感染包括感染豬只體內(nèi)病毒的持續(xù)存在和污染場(chǎng)內(nèi)感染豬群的持續(xù)存在。在人工感染豬，感染后23周內(nèi)出現(xiàn)病毒血癥。病毒血癥的持續(xù)時(shí)間隨感染動(dòng)物的年齡和感染病毒的劑量而變化，最長(zhǎng)可以持續(xù)68周?？贵w依賴性病毒增強(qiáng)作用：中和抗體在高水平時(shí)對(duì)病毒存在中和作用。在亞中和抗體水平存在的情況下、病毒在細(xì)胞上的復(fù)制能力反而增強(qiáng)。抗原抗體復(fù)合物與PAM的Fc受體結(jié)合，促進(jìn)病毒進(jìn)

16、入細(xì)胞。免疫抑制與繼發(fā)感染：原發(fā)性靶器官：肺臟。靶細(xì)胞：PRRSV導(dǎo)致豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAM）被大量破壞，從而引起免疫抑制，進(jìn)而導(dǎo)致繼發(fā)感染。繼發(fā)感染：在田間PRRSV感染中，經(jīng)常分離出副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌、多殺性巴氏桿菌、沙門氏菌、豬瘟病毒和流感病毒等。PRRSV持續(xù)感染PRRSV持續(xù)感染1420病毒血癥淋巴組織中的病毒全部抗體 中和抗體 干擾素分泌T細(xì)胞感染后周數(shù)感染階段急性感染期持續(xù)感染期完全免疫81216體液免疫細(xì)胞免疫感染指征結(jié)論：中和抗體抗急性感染；干擾素抗持續(xù)性感染。 PRRS的免疫反應(yīng)雙刃劍免疫產(chǎn)生抗體，可以抵抗病毒的攻擊、減少臨床癥狀的發(fā)生。產(chǎn)生中和抗體水平低而遲緩。抗體依賴性增強(qiáng)作用促進(jìn)感染？PRRS引起免疫抑制與繼發(fā)感染。7.2 豬繁殖與呼吸綜合征綜合控制措施疫苗免疫技術(shù)：科學(xué)使用疫苗，滅活疫苗，弱毒疫苗（JX