微生物實驗室培養(yǎng)詳解

1、關(guān)于微生物的實驗室培養(yǎng)詳解第一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物包括：細(xì)菌、藍(lán)藻、放線菌、支原體、衣原體原核生物界真菌 原生生物病毒沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物真核生物有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物第二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落：不同的細(xì)菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。第三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)皿第五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按成分分按功能分按物理狀態(tài)分培養(yǎng)基類型合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基分類： （一）培養(yǎng)

2、基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。第六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞第七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物

3、就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。鑒別培養(yǎng)基第八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)第九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？ 2、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 3、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？（二）無菌技術(shù)第十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月消毒與滅菌消毒：指

4、使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。第十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月消毒的方法：1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線或化學(xué)藥物消毒第十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。3、高壓

5、蒸汽滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.第十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。旁欄思考第十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考第十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗操作 本實驗用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的

6、純化培養(yǎng)，可分為制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌兩個階段進(jìn)行。第十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1微生物的實驗室培養(yǎng).flv第十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在

7、倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第二十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法第二十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次劃線后,可以分離到由一個細(xì)胞繁

8、殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.第二十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物的恒溫培養(yǎng)第二十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒

9、接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第二十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第二十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月問題討論

10、涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第二十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月固體培養(yǎng)基：菌落第三十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌種的保存 1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法第三十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)第三十三張

11、，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一、課題背景1、尿素的利用 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)脲酶+ CO2NH3+ H2O第三十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月4、課題目的從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣 的細(xì)菌第三十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一.研究思路.篩選菌株.統(tǒng)計菌落數(shù)目.設(shè)置對照第三十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存

12、環(huán)境的 要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70800C，淘汰了絕大多 數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。.篩選菌株第三十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。什么是選擇性培養(yǎng)基？第三十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解

13、尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基：從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基第三十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理第四十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接

14、種目的結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物是第四十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種目的結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物是第四十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細(xì)菌的計數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點第四十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）原理

15、：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細(xì)胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細(xì)胞。常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。第四十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板上進(jìn)行計數(shù)。為使結(jié)果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。第四十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組

16、中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。.設(shè)置對照：第四十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計菌 落數(shù)目的實驗時，A同學(xué)從對應(yīng)的106 倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌 落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下 只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：土樣不同， 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì))第四十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月小結(jié)：通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實驗 方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空

17、白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。第四十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二.實驗的具體操作 .土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。第四十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行三樣品的稀釋第五十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月.取樣涂布

18、實驗時要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。第五十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月.取樣涂布分離不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細(xì)菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計數(shù)的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同第五十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月.微生物的培養(yǎng)與觀察思考：要將哪些培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)？第五十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：3037培養(yǎng)12d放線菌：2528培養(yǎng)57d霉菌：2528的溫度下培養(yǎng)34d。第五十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。第五十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物的培養(yǎng)與觀察第五十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月三.結(jié)果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；