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1、 PAGE 3撰寫發(fā)明專利交底書模板申請(qǐng)人北京石油化工學(xué)院第一發(fā)明人張XX第一發(fā)明人身份證它發(fā)明人李XX(學(xué)生) 王XX聯(lián)系人聯(lián)系人電話聯(lián)系人郵箱 說 明 書一種某物的制備方法技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及某層析填料技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種復(fù)合型某物的制備方法。背景技術(shù)復(fù)合型層析介質(zhì)是一類具有雙重或多重功能性的純化填料,可以同時(shí)應(yīng)用多個(gè)分離機(jī)理來達(dá)到更加高效的純化結(jié)果,廣泛應(yīng)用于疫苗研制中的病毒純化、色譜分離、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。該類型的層析介質(zhì)通常是通過偶聯(lián)具有不同性質(zhì)的配基來達(dá)到親水或疏水作用或者是通過偶聯(lián)帶有不同電荷的配基來吸附帶相反電荷的物質(zhì),再通過改變緩沖液pH

2、來使配基和分離物帶有正負(fù)不同的電荷,當(dāng)配基與分離物具有相同電荷時(shí)形成靜電排斥從而達(dá)到洗脫與分離等效果。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,該方法制備過程簡(jiǎn)單、操作步驟少、安全環(huán)保,表面能夠截留的蛋白粒徑范圍為20-400 nm,所制備的層析介質(zhì)可以廣泛適用于大部分病毒的中度和精細(xì)純化。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,所述方法包括:步驟1、首先將核殼型某微球加入到帶有大量電荷的水溶性多胺的去離子水中,攪拌均勻,并保持一定溫度和轉(zhuǎn)速進(jìn)行反應(yīng);步驟2、再選取高分子量中性高分子化合物與所述步驟1反應(yīng)后的某微球在一定溫度和轉(zhuǎn)速下進(jìn)行反應(yīng),將其偶

3、聯(lián)至所述某微球的殼層表面,制備得到表面中性、內(nèi)部為離子交換基團(tuán)的復(fù)合型某層析介質(zhì)。在步驟1中,所選用的水溶性多胺包括四乙烯五胺、聚乙烯亞胺或乙二胺。在步驟1中,所選用水溶性多胺的用量為某微球質(zhì)量的0.5-10倍。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出,上述方法制備過程簡(jiǎn)單、操作步驟少、安全環(huán)保,表面能夠截留的蛋白粒徑范圍為20-400 nm,所制備的層析介質(zhì)可以廣泛適用于大部分病毒的中度和精細(xì)純化。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案,下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹,顯而易見地,下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例,對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講,在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的

4、前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法流程示意圖;圖2;圖3;圖4;圖5;圖6;圖7;圖8;圖9。具體實(shí)施方式下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖,對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明的實(shí)施例,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明實(shí)施例所述方法適用于核殼結(jié)構(gòu)某微球,在微球內(nèi)外表面引入離子配基起到離子交換作用,再將殼層表面進(jìn)行中性化處理達(dá)到類似凝膠過濾的作用,即制備出凝膠過濾/離子交換雙重功能的復(fù)合型層析

5、介質(zhì)。下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明實(shí)施例作進(jìn)一步地詳細(xì)描述,如圖1所示為本發(fā)明實(shí)施例提供的復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法流程示意圖,所述方法包括:步驟1、首先將核殼型某微球加入到帶有大量電荷的水溶性多胺的去離子水中,攪拌均勻,并保持一定溫度和轉(zhuǎn)速進(jìn)行反應(yīng);在該步驟中,所選用的水溶性多胺包括四乙烯五胺、聚乙烯亞胺或乙二胺等多胺類,凡是能和環(huán)氧基反應(yīng)的水溶性多胺類皆可;且所選用水溶性多胺的用量為某微球質(zhì)量的0.5-10倍。上述反應(yīng)的溫度范圍為30-60,轉(zhuǎn)速為80-140r/min,反應(yīng)時(shí)間為12-36h。具體實(shí)現(xiàn)中,反應(yīng)完后可以進(jìn)行抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物。步驟2、再選取高分子量中性高分子化合物與所述步

6、驟1反應(yīng)后的某微球在一定溫度和轉(zhuǎn)速下進(jìn)行反應(yīng),將其偶聯(lián)至所述某微球的殼層表面,制備得到表面中性、內(nèi)部為離子交換基團(tuán)的復(fù)合型某層析介質(zhì)。在該步驟中,所選取的高分子量中性高分子化合物包括醛基化葡聚糖、醛基化聚乙烯醇、醛基化瓊脂糖、醛基化纖維素中的一種或多種;且所選取的高分子量中性高分子化合物的平均分子量范圍為1000000-10000000,其質(zhì)量用量為某微球質(zhì)量的0.1-5倍。具體實(shí)現(xiàn)中,進(jìn)行反應(yīng)的溫度范圍為5-25,轉(zhuǎn)速為80-140 r/min,反應(yīng)時(shí)間為24-48h。同時(shí),在反應(yīng)完后可以進(jìn)行抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物。下面以具體的實(shí)例對(duì)本發(fā)明的方法及材料作進(jìn)一步說明:實(shí)施例1、1)偶聯(lián)離子

7、配基稱取核殼型某微球(以甲基丙烯酸縮水甘油酯與乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚微球,PGMA-EDMA)和四乙烯五胺,其質(zhì)量比為2:1,加入到100 mL的去離子水中,攪拌至混合均勻,放到搖床上調(diào)整溫度為30 、轉(zhuǎn)速為80 r/min進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間為12 h,反應(yīng)完成后抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物;2)實(shí)施例2、1)偶聯(lián)離子配基稱取核殼型某微球(PGMA-EDMA)和聚乙烯亞胺,其質(zhì)量比為1:3,加入到100 mL去離子水中,攪拌至混合均勻,放到搖床上調(diào)整溫度為40 、轉(zhuǎn)速為100 r/min進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間為20 h,反應(yīng)完成后抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物;2)實(shí)施例3、1)偶聯(lián)離子配基稱取核殼型

8、某微球(PGMA-EDMA)和乙二胺,其質(zhì)量比為1:6,加入到100 mL去離子水中,攪拌至混合均勻,放到搖床上調(diào)整溫度為50 、轉(zhuǎn)速為120 r/min進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間為30 h,反應(yīng)完成后抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物;2)實(shí)施例4、1)偶聯(lián)離子配基:稱取核殼型某微球(PGMA-EDMA)和聚乙烯亞胺,其質(zhì)量比為1:10,加入到適量的去離子水中,攪拌至混合均勻,放到搖床上調(diào)整溫度為60 、轉(zhuǎn)速為140 r/min進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間為36 h,反應(yīng)完成后抽濾洗滌除去未反應(yīng)的殘留物;2)值得注意的是,本發(fā)明實(shí)施例中未作詳細(xì)描述的內(nèi)容屬于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的現(xiàn)有技術(shù)。綜上所述,本發(fā)明實(shí)施例所述

9、方法首先通過向核殼型某微球上偶聯(lián)帶正電荷陽離子配基,通過選取不同分子量的高分子某和調(diào)控反應(yīng)時(shí)間來控制偶聯(lián)配基密度,從而使微球內(nèi)外表面具備了離子交換功能;接著通過表面偶聯(lián)高分子量水溶性高分子,從而微球表面中性,形成惰性的殼層,與凝膠過濾功能相似具備了只截留特定分子量物質(zhì)的功能。上述方法操作步驟簡(jiǎn)單、反應(yīng)容易控制、設(shè)計(jì)思路巧妙,所用試劑成本低、綠色環(huán)保,同時(shí)該微球所制成的層析介質(zhì)適用范圍廣,分離純化效率高,表面還有未結(jié)合的位點(diǎn)可以繼續(xù)修飾其他配基來拓展其他功能。以上所述,僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式,但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此,任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi),可輕易想到的

10、變化或替換,都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此,本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。權(quán) 利 要 求 書1、一種復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,其特征在于,所述方法包括:步驟1、首先將核殼型某微球加入到帶有大量電荷的水溶性多胺的去離子水中,攪拌均勻,并保持一定溫度和轉(zhuǎn)速進(jìn)行反應(yīng);步驟2、2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,其特征在于,在步驟1中,所選用的水溶性多胺包括四乙烯五胺、聚乙烯亞胺或乙二胺。3、。4、5、。6、。7、8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,其特征在于,在步驟2中,進(jìn)行反應(yīng)的溫度范圍為5-25,轉(zhuǎn)速為80-140 r/min,反應(yīng)時(shí)間為24-48h。說 明 書 附 圖 圖1 圖2 圖3圖7 圖8 圖9說 明 書 摘 要 本發(fā)明公開了一種復(fù)合型某層析介質(zhì)的制備方法,首先將核殼型某微球加入到帶有大量電荷的水溶性多胺的去離子水中,攪拌均勻,并保持一定溫度和轉(zhuǎn)速

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