HLAB27檢測及臨床意義課件

1、HLA-B27檢測及臨床意義第1頁，共25頁。病 因學臨 床表 現(xiàn)AS血 清學流 行病 學第2頁，共25頁。AS第3頁，共25頁。年輕男士多見男:女比例約為（23）:1種族差異，白種人患病率1%，黑人最低中國人HLA B27陽性率約68%，中國 人群患病率0.3%，在患者家系中為4%， 南方較北方高AS發(fā) 病 率第4頁，共25頁。病因學遺傳感染血清學RF陰性HLA-B27陽性第5頁，共25頁。HLA-B*27位 于 第 6 號染色體的短 臂上HLA-B 含 有 1 000個 等位 基因 型 M HC基因，基本 上表達在機體 中所有有核的 細胞上，尤其 是淋巴細胞的 表面HLA-B27亞 型(B

2、27*02;B27*04; B27*05; B27*07)第6頁，共25頁。HLA-B27檢測意義超 過 9 0%的強直性脊椎炎患者其H LA-B27 抗原表達為陽 性 ， 普通人群中僅5-10%的為陽性HLA-B27陽性者AS 發(fā)病率約為1 0% 20% ，而普通人群發(fā) 病 為 1 2，相差約1 00 倍與傳統(tǒng)方法相比，用流式細胞儀來檢測 HLA-B27的表達， 靈 敏 度可達1 00%，特異性達9 7.4%第7頁，共25頁。PCR-SSP/SSO方法基 因 芯片技術Real-time PCR 方 法補 體 依賴性微量淋巴細胞毒試驗ELISA法流 式 細胞術（FCM法）HLA-B27檢測方法

3、第8頁，共25頁。補 體 依 賴 性微量淋巴細 胞毒抗體與 淋巴細胞 表面的 膜抗原特 異性結 合后，免 疫球蛋 白的 補體 結合位點暴露，該I C 與補體結合而使其活化，形成攻膜復合體在細胞 膜上穿孔，導致靶細胞的溶解死亡。在細胞被穿孔但尚未裂解前加入 染 料 ，可使染料進入細胞內，使細胞著色。第9頁，共25頁。補 體 依 賴 性 淋 巴細 胞毒 缺 少 高純度的單價抗血清 人 工 計數(shù)淋巴細胞數(shù)量，易誤診和漏診 可 疑 結果，難判斷結果，常需復查 血 標 本要求高，實驗條件的影響 成 本 低第10頁，共25頁。流 式 細胞術第11頁，共25頁。流式細胞術BD FACSAria II Flo

4、w Cytometer第12頁，共25頁。流式細胞術 熒 光 標記的單克隆抗體，特異性高 操 作 簡便，靈敏度和準確性高 成 本 較高 抗 體 發(fā)生交叉反應 樣 本 要求較高第13頁，共25頁。ELISA方法第14頁，共25頁。ELISA方法 快 速 、簡單 特 異 性和靈敏度低 溶 血 標本影響檢測結果 成 本 低第15頁，共25頁。PCR-SSP 序列特異性引物第16頁，共25頁。PCR擴增抽提DNA瓊脂糖凝 膠電泳實 驗 步驟第17頁，共25頁。PCR-SSP/SSO第18頁，共25頁。Real-time PCR通 過 融 解 曲 線 對 擴 增 片 斷 進 行 檢 測本 體 系 包 含

5、 兩 對 引 物 質 控 引 物、B27 擴增引物同 一 份 樣 本 ， 只 擴 增 出 質 控 峰 陰性同 一 份 樣 本 ， 擴 增 出 現(xiàn) 雙 峰 陽性陰 陽 性 結 果依 據(jù) 質控 峰 與 B 27陽性峰 的 比值進行判斷19質控峰 B27峰第19頁，共25頁。操 作 流程核 酸 提取3 小時PCR擴增3 小時軟 件 判讀，報告輸出20第20頁，共25頁。基因芯片技術 病 人 樣本的D NA 提取PCRDNA 芯 片 雜 交全自動結果判讀第21頁，共25頁?；蛐酒夹g病 人 D NA熒 光 信號寡 核 苷酸探針Spot 芯 片 基質第22頁，共25頁。基因技術準 確 性 高 ：基因型檢測特 異 性 好 ：有效區(qū)分B 7和B27， 避免假陽性