hbv基因與耐藥檢測檢驗(yàn)科版課件

1、產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇HBV分型和耐藥突變基因檢測產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇第1頁，共21頁。一、基因芯片原理及特點(diǎn)二、HBV分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介三、亞能HBV分型與耐藥突變基因檢測的運(yùn)用及臨床意義四、亞能HBV分型與耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢第2頁，共21頁。一、基因芯片原理及特點(diǎn)第3頁，共21頁?；蛐酒?gene chip)：是多種特定的寡核苷酸序列為探針，固定于支持物表面上而成的二維DNA陣列?；驹恚豪脡A基互補(bǔ)配對(duì)原則，通過目的DNA與探針特異結(jié)合來判斷目的DNA的序列信息。 PCR+反向點(diǎn)雜交（RDB）基因芯片原理第4頁，共21頁?；蛐酒夹g(shù)特點(diǎn) 高靈敏度PCR 高特異性-核酸分子雜交

2、高通量-膜芯片上排列多種探針 結(jié)果易判讀-化學(xué)顯色 第5頁，共21頁。二、HBV分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介第6頁，共21頁。乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測試劑盒 （PCR-反向點(diǎn)雜交法）注冊號(hào)：國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2011第3401177號(hào)專利號(hào)：ZL200710073933.3國內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑第7頁，共21頁。 PCR擴(kuò)增：在S基因和P基因重疊區(qū)段設(shè)計(jì)PCR引物，PCR擴(kuò)增片段既包含耐藥突變位點(diǎn)又能進(jìn)行基因分型。P基因：耐藥突變檢測編碼DNA合成酶（包含逆轉(zhuǎn)錄酶rt），抗病毒藥物作用靶區(qū)，耐藥基因突變熱點(diǎn)區(qū)S基因：分型檢測技術(shù)原理第8頁，共21頁。采集

3、樣本雜交顯色結(jié)果判讀0.5小時(shí)3小時(shí)1.5小時(shí)提取DNAPCR擴(kuò)增操作流程全程僅需6小時(shí)第9頁，共21頁。儀器名稱參數(shù)及要求臺(tái)式高速離心機(jī)轉(zhuǎn)速13000rpm，轉(zhuǎn)子規(guī)格：1.5mL冰箱雙溫區(qū)：4/-18；雙門 移液器1-10L,10-100L, 100-1000L干式恒溫器孔徑：1.5 mL；控溫范圍：室溫+5-100PCR儀0.2 mL，48或96孔分子雜交儀控溫范圍：環(huán)境溫度+5-100，可調(diào)；精度：0.1檢測儀器第10頁，共21頁。試劑盒性能指標(biāo)準(zhǔn)確性：檢測105例臨床慢性HBV感染陽性樣本，結(jié)果與測序比較顯示為相同的 基因型和耐藥突變類型，準(zhǔn)確率為100%。特異性：檢測50例臨床HBV

4、陰性樣本結(jié)果全部為陰性；檢測非HBV感染性病原體DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）和HIV，結(jié)果均為陰性。靈敏度：能檢測血清HBV的最低檢出限為1.0103IU/mL。精密度：檢測2.0103IU/mL的血清HBV，批內(nèi)和批間的一致性好。穩(wěn)定性：產(chǎn)品有效期為6個(gè)月，在有效期內(nèi)產(chǎn)品性能穩(wěn)定。第11頁，共21頁。本產(chǎn)品檢測的樣本為血清或血漿；要求待檢樣本的HBV DNA載量1.0103copies/mL。樣本要求樣本保存為了避免DNA降解，制備好的血清或血漿，避免長時(shí)間室溫放置；28保存不超過48小時(shí)；-18以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。注意事項(xiàng)第12頁，共21頁。三、亞能HBV分型與耐藥突變

5、基因檢測的運(yùn)用及臨床意義第13頁，共21頁。亞能HBV產(chǎn)品應(yīng)用抗病毒治療前、治療中HBV的基因分型和耐藥突變基因檢測 區(qū)分我國常見的HBV-B、C、D基因型 涵蓋我國4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、阿德福韋酯、 替比夫定、恩替卡韋）7個(gè)耐藥位點(diǎn)的16種突變：rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L。第14頁，共21頁。HBV基因型檢測臨床意義 HBeAg陽性患者中，B基因型對(duì)IFN-治療的應(yīng)答率高于C基因 型，A基因型高于D基因型。 與C基因型感染者相比，B基因型感染者較早出現(xiàn)HBeA

6、g血清學(xué) 轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；預(yù)測干擾素應(yīng)答和疾病進(jìn)展情況慢性乙型肝炎防治指南（2010年）第15頁，共21頁。HBV耐藥檢測臨床意義抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測 協(xié)助臨床選擇合理抗病毒藥物，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化抗病毒治療、提高抗病毒療效、降低耐藥發(fā)生率。 抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測 全程監(jiān)測耐藥，利于早期挽救治療，為調(diào)整治療方案提供理論支持。全程監(jiān)測耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)第16頁，共21頁。四、亞能HBV分型耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢第17頁，共21頁。全基因序列測定法限制性片段長度多態(tài)性分析法（RFLP）實(shí)時(shí)熒光PCR法亞能HBV 基因芯片靈敏度靈敏度低，最低檢測限為

7、20%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；檢測位點(diǎn)所有突變位點(diǎn)已知耐藥位點(diǎn)僅能檢測rt204位點(diǎn)我國4種核苷類藥物7個(gè)耐藥位點(diǎn)的16種突變評(píng)價(jià)1、測序試劑大多未獲得SFDA批準(zhǔn)；2、操作繁瑣、技術(shù)難度大、儀器要求高、不易在臨床開展。1、需針對(duì)每一個(gè)待測突變位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)特異性內(nèi)切酶反應(yīng)體系；2、一些突變可能生成新的酶切位點(diǎn)，或破壞原有酶切位點(diǎn)，必須謹(jǐn)慎看待檢測結(jié)果。結(jié)果僅提示拉米夫定耐藥。1、是首個(gè)獲得SFDA批準(zhǔn)的，同時(shí)進(jìn)行HBV分型、耐藥檢測的試劑盒；2、準(zhǔn)確性好、6小時(shí)出結(jié)果、結(jié)果肉眼可見。儀器要求低，操作便捷、易于臨床使用。HBV耐藥檢測產(chǎn)品比較第18頁，共21頁。亞能HBV分型與耐藥突變檢測優(yōu)勢 高 效：SFDA批準(zhǔn)，國內(nèi)首個(gè)HBV分型與耐藥突變基因同時(shí)檢測的試劑盒； 檢測位點(diǎn)廣：能檢測我國 4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、 阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋）7個(gè)耐藥位點(diǎn)的16種突變； 靈敏度高： 1.0103IU/mL，最低檢測限為5%； 快 速：6小時(shí)即可完成檢測； 易 用：操作簡易、結(jié)果可直接讀取，設(shè)備要求低，易于臨床使用。 第19頁，共21頁。國內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；6h全面呈現(xiàn)：4種核苷（酸）相關(guān)的7個(gè)耐藥位點(diǎn)16種突變，區(qū)分HBV- B、C、D三種基因型